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放射线对小鼠T细胞分化相关蛋白T-bet、GATA-3、ROR γt、Foxp3表达的影响
目的:观察放射线对小鼠脾脏T细胞分化特异性转录因子T-bet、GATA-3、ROR γt、Foxp3蛋白表达水平的影响.方法:60Coγ射线(1.0 Gy,5.5 min)照射Balb/c小鼠,分别于照射后第4、8、12及20天检测小鼠外周血象;骨髓病理切片观察骨髓造血组织增生情况；WesternBlot法检测脾脏T细胞分化特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt、Foxp 3蛋白表达水平.结果:γ射线照射后小鼠外周血白细胞和血小板数量显著降低;骨髓造血细胞显著减少,脂肪细胞明显增多;放射线照射Balb/c小鼠,脾脏GATA-3、ROR γt、Foxp 3蛋白表达下降,于照射后第4天表达水平低,之后逐渐升高但低于正常对照组水平(P＜0.05)；脾脏T-bet蛋白表达水平明显高于对照组水平(P＜0.05)；T-bet/GATA3、RORγt/Foxp3比值明显增大(P＜0.05),于照射后第4天比值大.结论:放射线抑制Balb/c小鼠骨髓造血,同时导致脾脏T细胞分化异常；骨髓造血功能低下可能与T细胞分化异常相关.
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CCK－8对脂多糖诱导的脓毒症小鼠CD4＋T淋巴细胞的调节作用
目的：观察八肽胆囊收缩素（cholecystokinin octapeptide， CCK－8）对脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）诱导的脓毒症小鼠CD4＋T淋巴细胞分化的影响，探讨CCK－8治疗脓毒症的免疫调节机制。方法：将C57BL／6小鼠随机分为正常对照组、脓毒症组、CCK－8对照组和CCK－8治疗组，每组26只。以腹腔注射LPS （20 mg／kg ）复制脓毒症模型；正常对照组腹腔注射生理盐水，每只100 L；CCK－8对照组腹腔注射CCK－8（20μg／kg）；治疗组于注射LPS 30 min后腹腔注射CCK－8（20μg／kg）。观察小鼠72 h存活率（n＝20）；其余动物24 h后HE染色观察小鼠肺组织病理学变化；流式细胞术检测CD4＋T细胞和Treg细胞数量，实时荧光定量RT－PCR检测CD4＋T细胞不同亚群特异性转录因子T－bet、GATA3、Foxp3和RORγt mRNA表达。结果：正常对照组和CCK－8对照组小鼠72 h时全部存活，脓毒症模型组小鼠全部死亡，CCK－8可以显著提高脓毒症小鼠的存活率，肺组织损伤明显减轻；与对照组相比，脓毒症组CD4＋T细胞数量减少，Treg细胞数量增多；T－bet和RORγt mRNA表达减少，GA－TA－3和Foxp3 mRNA表达增加。经CCK－8治疗后，CD4＋T细胞增多，CD4＋CD25＋Treg细胞数量减少；同时，T－bet和RORγt mRNA表达增多，而GATA－3和Foxp3表达降低。结论：CCK－8对脓毒症小鼠具有一定的治疗作用，其机制可能与调节CD4＋T细胞向Th1和Th17细胞分化，抑制Th2和Treg细胞分化有关。
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张应变调控的核骨架蛋白在高血压血管平滑肌细胞增殖中的作用
目的：高张应变诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells， VSMCs）异常增殖在高血压血管重建发生发展中起重要作用。本研究探讨细胞核骨架（ nuclear envelope ，NE）在其中的作用及其机制。方法：应用腹主动脉缩窄构建高血压大鼠动物模型；应用FX4000张应变加载系统对体外培养大鼠胸主动脉VSMCs分别施加5％（正常生理状态）和15％（模拟高血压状态）幅度的周期性张应变；Western blot检测NE蛋白emerin和lamin A蛋白表达水平；染色质免疫共沉淀、芯片（ CHIP－on－chip）结合MOTIF生物信息学分析检测与emerin和lamin A结合的DNA序列及其特性；protein／DNA array检测抑制emerin或lamin A表达后转录因子活性变化。结果：高血压大鼠颈总动脉emerin和lamin A表达水平明显降低，中膜VSMCs增殖明显增加；体外加载15％周期性张应变模拟高血压病理条件下VSMCs受到的张应变力学刺激，VSMCs的emerin和lamin A表达明显降低，细胞增殖明显增加，这一作用可被emerin或lamin A的高表达载体转染所部分逆转。 emerin和lamin A能够分别与包含多种转录因子启动子结合位点的DNA片段结合，进而调控多种与VSMCs增殖相关的转录因子活性。结论：NE蛋白emerin和lamin A能够响应力学刺激，并通过调控与特异性转录因子启动子区域的结合调控转录因子活性，参与VSMCs增殖功能调控和高血压血管重建。
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盐酸青藤碱对体外培养的系膜增生性肾炎患者外周血淋巴细胞相关因子表达的调节作用
盐酸青藤碱(SN)是从中药青风藤中提取的生物碱单体,用于慢性肾炎的治疗已有10多年的成功经验,但其机制依然不清.我们曾发现SN可有效控制非IgA系膜增生性肾炎(MsPGN)患者蛋白尿,不良反应小[1].T-bet是新发现的Th1特异性转录因子[2],GATA-3是Th2特异的转录因子[3].本研究观察SN对MsPGN患者外周淋巴细胞T-bet、GATA-3及Th1、Th2细胞因子表达的影响,探讨SN治疗MsPGN的机制.
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重组人干扰素α-2b治疗宫颈糜烂合并人乳头瘤病毒感染的临床观察
目的:观察重组人干扰素α-2b治疗宫颈糜烂合并人乳头瘤病毒(HPV)感染的疗效和安全性.方法:81例宫颈糜烂合并HPV感染患者随机分为对照组(40例)和观察组(41例).两组患者均于月经干净后3～7 d行微波治疗,微波治疗后3d,对照组患者给予保妇康栓剂1粒,睡前置于阴道深部,每日1次,连用14d.观察组患者在对照组治疗的基础上给予重组人干扰素α-2b凝胶1 g,每日1次,连用14d.观察两组患者的临床疗效,HPV转阴率,治疗前后特异性转录因子(T-bet、GATA3、T-bet/GATA3、FoxP3)水平、炎症因子[白细胞介素(IL)-2、γ干扰素(IFN)-γ、IL-4、IL-10、转化生长因子(TGF)-β1、IFN-γ/IL-4]水平及不良反应发生情况.结果:观察组患者总有效率、HPV转阴率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,两组患者T-bet、T-bet/GATA3、IL-2、IFN-γ、IFN-γ/IL-4水平均显著高于同组治疗前,且观察组显著高于对照组;两组患者GATA3、FoxP3、IL-4、IL-10、TGF-β1水平均显著低于同组治疗前,且观察组显著低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在常规治疗的基础上,重组人干扰素α-2b治疗宫颈糜烂合并HPV感染的疗效和安全性均较好,可提高HPV转阴率.
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Th17细胞在风湿病发病机制中的作用进展
在机体的适应性免疫应答中,CD4+T细胞作为效应T细胞的重要成分,参与免疫应答的各个阶段,并在免疫调节中发挥关键作用.Th17细胞是新的CD4+T辅助细胞亚群,是独立于Th1和Th2细胞之外的第三类效应T细胞亚群,其产生的多种相关细胞因子(如IL-17和IL-17F)在防御胞外细菌感染、介导慢性炎症以及自身免疫病中起着关键性作用[1],因其高水平分泌IL-17故名Th17细胞.Th17分化途径不同于典型的Th1和Th2型细胞,不依赖于与Th1和Th2分化相关的关键信号转导因子STAT-1、T-bet、STAT-4、STAT-6及GA-TA-3.TGF-β和IL-6是诱导初始CD4+T淋巴细胞向Th17细胞分化的关键的细胞因子[2].在两者同时存在的情况下,经由STAT-3通路活化Th17型细胞的特异性转录因子ROR-γt,活化的CD4+T细胞向Th17细胞分化.近年研究发现,Th17细胞引起的免疫反应在风湿性疾病的发病中也起到了重要的作用.
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Engrailed基因对中脑多巴胺能神经元发育的影响
神经系统在结构和功能上都是一个高度复杂的系统,发育生物学虽为生物学中重要的领域,近20年來因新技术的引进,使得发育研究进入基因层次,能更清楚地了解控制机制.中脑多巴胺( midbrain dopamine,mDA)能神经元是哺乳动物中枢神经系统多巴胺的主要来源,对中脑多巴胺神经元的发育过程及其调节机制的研究是神经发育生物学的重要问题,多巴胺神经元的发育是一包括多种转录因子和生长因子参与的严格控制过程.在胚胎发育早期,是由控制中脑发育的多种同源域蛋白调控多巴胺前体细胞的增殖和迁移;在特异性转录因子Nurrl和Ptx3表达后,多巴胺神经元开始表达特定的表型并合成DA;终在与纹状体靶细胞的正确联系建立的前提下分化成熟;同时这一过程要受到来自周围细胞信号的相互影响.近20年来研究表明,Engrailed基因对中脑多巴胺能神经元发育的影响.Engrailed(EN-蛋白)是同源盒蛋白转录因子,其含有同源异型结构( homeobox)的蛋白质,是DNA结合蛋白,在胚胎发育、基因表达调节、细胞分化、神经发生等方面发挥重要作用.它能被细胞分泌和内摄,并调节转录和翻译,是神经系统喙尾(A -P)轴分化的重要决定因子,并控制着中脑多巴胺能神经元的发育和存活.新近研究发现,EN蛋白还具有更多的功能,包括轴突导向等,并且与一些疾病相关,如帕金森病( Parkinson disease,PD),精神分裂症、自闭症和药物成瘾等,近来还发现它通过基因融合或基因失调控方式参与肿瘤的发生,被认为是乳腺癌的候选基因.
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骨折三期辨证治疗对大鼠骨折愈合特异性转录因子表达影响的实验研究
目的 通过观察骨折不同分期治疗对SD大鼠骨折愈合特异性转录因子(Osx)表达的影响,为其能促进成骨细胞分化,促进骨折愈合提供一定的理论依据.方法 选用SD大鼠40只,于双侧胫骨中下1/3段造成3 mm骨质缺损,随机分为生理盐水组、早期治疗组、中期治疗组、后期治疗组,每组10只,在相应时间段给予相应治疗,于造模后30 d处死大鼠,取胫骨标本,运用免疫组化法测定其Osx表达,并对相应的平均光密度值(MOD)进行分析.结果 早、中、后三期治疗组对Osx表达均有促进作用,较生理盐水组高,差异有统计意义(P<0.05或P<0.01);各治疗组之间比较,后期治疗组对Osx的促进作用更显著(P<0.05),中期治疗组对Osx的促进作用亦优于早期治疗组(P<0.05).结论 中医辨证分期治疗骨折是必要的.
