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锌指蛋白Kaiso的甲基化特异性结合功能分析
目的 研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.方法 构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.结果 缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力.结论 人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助.
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川崎病患儿急性期Th1/Th2细胞功能状态的研究
川崎病(Kawasaki disease,KD)迄今病因不明,从流行病 学特征推测可能与病原体感染或毒素超抗原引起的免疫学异常有关.认为超抗原有强大的激活T细胞能力,通过T细胞介导血管炎性反应[1].但仍有着诸多争议.本研究旨在通过对KD患儿外周血淋巴细胞干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)及各自的特异性转录因子T盒21(T-bet)和锌指转录调解因子3(GATA-3)mRNA的检测,在基因转录水平上探讨KD患儿T细胞功能状态.
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锌指蛋白A20的临床应用
1990年美国密歇根州立大学的病理学家Dixit在人类脐静脉内皮细胞中发现了一种细胞因子诱导的基因,经白细胞介素(IL)-1、PLS和肿瘤坏死因子(TNF)刺激后表达量迅速增加,并分布于体内的多种细胞中,其能编码一种特殊的锌指蛋白,该基因被命名为锌指蛋白A20基因,其编码的蛋白被命名为锌指蛋白A20,简称A20.A20是一种内源性调控蛋白,其通过抑制NF-KB的活性来抑制炎症反应,并能抑制细胞凋亡.文章将对A20的结构、功能及其临床意义作一综述.
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半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达
目的 观察半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CRP2)在变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠鼻黏膜中的表达,探讨其在AR发病中的作用.方法 20只BALB/C小鼠,随机分为AR模型组和正常对照组.用卵清蛋白作为变应原建立AR小鼠模型.采用免疫荧光组织化学染色方法 观察CRP2在各组小鼠鼻黏膜的表达情况.结果 CRP2主要表达于AR模型组小鼠鼻黏膜固有层细胞,表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论CRP2可能在AR的发病中发挥一定的作用.
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内质网氨肽酶与银屑病研究进展
内质网氨肽酶1(ERAP1)及其异构体内质网氨肽酶2(ERAP2)都属于锌指金属基质肽酶M1家族中的“缩宫素酶亚家族”,在人类细胞均由IFN-γ和TNF-α诱导表达[1,2].参与许多生化过程:在细胞内质网中参与内源性抗原肽的修饰及递呈,被认为是内质网中参与内源性抗原肽修饰的关键酶[3].ERAP1还参与细胞因子受体(如促进肿瘤坏死因子受体1(TNFR1),IL-6α受体和IL-1β受体胞外结构域)的脱落,使之成为可溶性受体.
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转录因子Snail与肿瘤的关系
肿瘤转移是恶性肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因,在肿瘤转移级联反应的早期阶段可发生上皮细胞-间充质细胞转换(EMT),Snail可诱发EMT,在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用.现对Snail的结构、功能、与E-钙黏附素的相关性、诱导信号及在肿瘤浸润、转移过程中的作用予以综述,可以进一步为Snail相关的上皮性肿瘤治疗策略提供重要的理论基础.
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ZFP580对大鼠心肌缺血/再灌注后心室重塑的影响
目的:探究锌指转录因子(ZFP580)与心肌缺血/再灌注损伤后心室重塑的关系.方法:72只SD大鼠随机分为假手术(sham)组(n=8)和心肌缺血/再灌注(I/R)组(n=64),其中I/R组分别在再灌注后的0.5h、1h、2h、4h、1d,7d,14 d,28 d处死后取材,观察心肌组织中ZFP580的表达.培养大鼠H9C2心肌细胞,每组设3个复孔,分别在转化生长因子β1(TGF-β1)刺激0h、8h、16 h、24h后观察心肌细胞肥大情况,并检测心肌细胞中β-MHC、心房利钠肽(ANP)以及ZFP580 mRNA的表达.利用慢病毒介导的基因转染获得高表达ZFP580的H9C2心肌细胞,转染72h后,检测心肌细胞中基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达.结果:成功建立心肌缺血/再灌注损伤模型,大鼠心肌I/R损伤后第14天,心肌组织大面积梗死,心肌细胞呈嗜酸性变.大鼠心肌组织中ZFP580及TGF-β1表达上调.TGF-β1(5 ng/ml)刺激H9C2心肌细胞后诱导心肌细胞肥大,心肌细胞肥大标志蛋白β-MHC、ANP表达上调,且心肌细胞中ZFP580mRNA表达上调(P＜0.05).高表达ZFP580的H9c2心肌细胞中MMP-3表达下调(P＜0.05).结论:锌指转录因子ZFP580可能参与了心肌缺血/再灌注后心室重塑的过程,其作用可能与参与TGF-β1诱导的心肌细胞肥大过程以及抑制心肌细胞产生MMP-3有关.
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间歇低压低氧预处理对心肌缺血/再灌注损伤及ZFP580表达的影响
目的:探讨间歇性低压低氧(IHH)预处理对大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤后血清中心肌酶、心肌梗死的影响及锌指核转录因子ZFP580发挥的作用.方法:32只雄性Wistar大鼠随机分为IHH预处理组和常氧对照组(n=16).IHH组大鼠置于模拟海拔高度为5000m的低压氧舱中,每天6h,持续42d.两组大鼠经结扎冠状动脉左前降支建立心肌I/R损伤模型后,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)活性及肌酸磷酸肌酶同功酶(CK-MB)浓度,并利用Western blot方法观察各组大鼠心肌组织中ZFP580的表达情况.每组另外8只大鼠经心肌酞菁蓝-TTC染色后比较心肌梗死面积.培养大鼠H9c2心肌细胞,利用慢病毒介导的基因转染实验获得高表达ZFP580的心肌细胞,并进行心肌细胞模拟缺血/再灌注(SI/R)损伤实验.利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2心肌细胞的凋亡情况.结果:IHH预处理能明显减少心肌I/R损伤后LDH、CK-MB漏出至血清,并明显缩小心肌梗死面积.大鼠经IHH预处理后心肌组织中ZFP580的表达上调,IHH预处理明显上调心肌I/R损伤后心肌组织中ZFP580的表达.高表达ZFP580的H9c2心肌细胞在SI/R损伤后细胞凋亡率明显下降.结论:IHH预处理对于心肌I/R损伤具有明显细胞保护作用,其上调的ZFP580表达具有减少心肌细胞凋亡的作用,ZFP580可能作为心肌细胞内源性抗凋亡分子之一,参与IHH预处理抗心肌I/R损伤的过程.
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Evi-1反义寡核苷酸对人红白血病细胞系HEL的抑制作用
Evi-1 (ecotropic virus integration site 1) 定位于染色体3q26,为一原癌基因,与髓系恶性肿瘤的发生密切相关[1].Evi-1基因编码含两个锌指区的蛋白,能特异地结合基因启动子DNA 序列,发挥转录调节作用[2].正常人骨髓和外周血细胞Evi-1 mRNA表达阴性[1].我们的初步研究结果表明,近50%的骨髓增生异常综合征(MDS)患者Evi-1基因表达阳性,Evi-1的表达水平与MDS向急性髓系白血病(AML)演变有关[3,4].为进一步探讨Evi-1在AML 发生和发展中可能的作用,我们观察了Evi-1反义寡核苷酸(Evi-1-AS)对人红白血病细胞系HEL增殖的抑制作用.
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SH-SY5Y细胞中过表达RIPK3对ZFP36基因转录的影响
目的：探讨SH-SY5Y细胞中受体相互作用蛋白激酶-3（RIPK3）下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法通过质粒转染的方式在实验组SH-SY5Y细胞内表达外源性RIPK3蛋白，将转染空载质粒载体SH-SY5Y细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白（GFP）在细胞中的表达情况以验证转染结果，Western blot对外源性RIPK3表达进行验证。MTT法检测细胞增殖活性，观察过表达RIPK3对细胞活性的影响，以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术（RNAseq）分别检测2组细胞内基因转录丰度并应用Ingenuity Pathway Analysis（IPA）数据库进行分析，获得RIPK3下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化PCR（ddPCR）对部分RNAseq结果进行验证。结果外源性RIPK3在细胞内具有生物活性，能够抑制SH-SY5Y细胞的增殖。RNAseq数据经IPA分析后得出锌指蛋白36（ZFP36）为RIPK3下游效应分子，其相关效应分子包括血管内皮生长因子（VEGF）、人脱帽酶2（DCP2）、脑源性神经营养因子（BDNF）、肿瘤坏死因子（TNF）的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3能够参与对ZFP36以及与其相关效应分子的转录调控，进而在神经系统的发育、炎症和肿瘤发生等生理、病理过程中发挥重要作用。
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锌指蛋白185对胶质瘤细胞增殖影响的研究
目的：探讨锌指蛋白ZNF185在人脑胶质瘤细胞增殖中的作用。方法标本取自2011年1月—2013年12月于唐山市工人医院就诊，经病理确诊为胶质瘤患者的肿瘤组织，以瘤旁组织作对照。提取不同组织总蛋白， Western-blot检测ZNF185的表达。提取瘤旁组织总RNA，反转录扩增ZNF185编码序列并克隆至pEGFPC2质粒，构建ZNF185表达载体。采用Lipofactamine2000将ZNF185表达载体转染人胶质瘤细胞系SF767，以转染pEGFPC2空载体细胞作为对照。采用流式细胞仪检测细胞周期变化；MTT法检测细胞增殖活性。结果与瘤旁组织相比， ZNF185在人脑胶质瘤组织中表达显著降低（P<0.01）；转染ZNF185表达载体的胶质瘤细胞与对照细胞相比ZNF185的表达显著增加（P<0.01）；过表达ZNF185导致SF767细胞G0~G1期细胞比例显著增加（P<0.05），而S期细胞比例减少（P<0.05）。同时，过表达ZNF185也导致SF767细胞的增殖速度显著降低（P<0.05）。结论ZNF185在人脑胶质瘤细胞中发挥抑制细胞增殖的作用。
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ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响
目的：探讨锌指蛋白和同源框3（ZHX3）基因沉默对骨髓间充质干细胞（BMSCs）中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs（ZHX3沉默组），同时设空载病毒转染BMSCs （载体对照组）及不做任何处理的BMSCs（空白对照组）。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功；采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果（1）复苏培养的细胞具有BMSCs表型。（2）转染后，ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光，空白对照组不表达荧光，且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。（3）免疫荧光结果显示，smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质，RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞，且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异，但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。（4）免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异，但均显著高于ZHX3沉默组（P＜0.05）。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟，可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。
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三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病研究进展
急性早幼粒细胞白血病(APL)是临床上第一个应用诱导分化治疗取得成功和第一种针对肿瘤特异性标志分子进行治疗的人类恶性肿瘤.95%以上APL患者具有特征性的非随机染色t(15;17).该易位使15号染色体上的早幼粒细胞白血病基因与17号染色体上的维甲酸受体α(RARα)发生融合,表达PML-RARα融合蛋白.少数变异型APL患者产生t(11;17),该易位使11号染色体上的早幼粒细胞白血病锌指(PLZF)基因与17号染色体上的RARα基因发生融合,表达为PLZF-RARα融合蛋白.
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凋亡抑制蛋白Livin在肝癌组织中的表达及其临床意义
Livin蛋白是2001年由Kasof等报道的凋亡抑制蛋白(IAPs)家族的一个新成员,含有IAPs家族成员所特有的BIR和RING锌指结构域.本研究主要收集了48例原发性肝癌组织、20例肝硬化组织、12例外伤性肝破裂正常肝组织标本,采用免疫组织化学技术[链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)]和图像分析技术,检测Livin蛋白在肝癌组织中的表达情况,并探讨其表达与肝癌某些临床特征之间的关系.
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上皮间质转化与胰腺癌关系的研究进展
胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤,早期转移和化疗耐药是影响其临床治疗效果的两大主要因素,并且与肿瘤的上皮间质转化(EMT)有着密切联系.本文就EMT与胰腺癌的转移和耐药性之间的联系综述如下.1 EMT1.1 EMT相关转录因子 到目前,已发现的参与EMT的转录因子有锌指结构蛋白Snail和Slug,具有螺旋-环-螺旋结构的Twist1、Goosecoid和Foxc2,两端锌指结构蛋白ZEB1和SIP1等[1].
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TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响
目的:探讨TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响.方法:采用反转录( reversetranscription,RT) -PCR法从人卵巢癌组织总RNA中扩增TIZ基因的cDNA全长序列,与pcDNA3.1/myc-his(-)C质粒载体连接构建重组质粒;采用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)转染入卵巢上皮癌细胞HO8910中;分别采用MTT法和集落形成实验测定细胞的增殖能力;FCM法检测细胞周期;细胞体外侵袭重建基膜实验、Transwell小室实验和体外黏附实验分别测定细胞的体外侵袭、转移及黏附能力.结果:从卵巢癌组织中扩增获得了TIZ基因全长序列,并成功构建pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)重组质粒,测序证实插入片段序列正确.细胞生长曲线、细胞周期和细胞集落测定实验显示,pcDNA3.1/myc-his(-)C-TIZ(+)-HO8910细胞与对照组细胞相比较,其细胞增殖受到明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞体外侵袭、转移及黏附能力测定实验结果显示,HO8910细胞在TIZ基因过表达前后其侵袭、迁移和黏附能力无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:TIZ基因过表达对卵巢上皮癌细胞生长、增殖有一定的抑制作用,可能发挥抑癌基因的生物学作用.
关键词： 卵巢肿瘤 肿瘤坏死因子受体相关肽类及蛋白类 锌指 基因表达 TIZ基因 -
新基因ZNFD的克隆及其多克隆抗体的制备
目的:PCR扩增得到新基因ZNFD(Znf domain containing protein),构建pET32a-ZNFD原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体.方法:通过PCR的方法克隆新基因ZNFD,选取部分抗原免疫原性较高的部分ORF序列,克隆到原核表达载体pET32a上,利用大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)表达系统表达ZNFD融合蛋白.纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体.通过琼脂糖双向扩散实验和Western blot鉴定其效价和特异性.结果:经测序鉴定已成功克隆ZNFD基因.通过构建原核表达载体pET32a-ZNFD,在大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)中使用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约为45 kD的融合蛋白.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫特异性.结论:得到纯化的ZNFD蛋白,制备的多克隆抗体达到了一定的效价,且具有高特异性,为进一步研究ZNFD的功能奠定了实验基础.
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Zic基因在肿瘤发生中的作用和分子调控
Zic1作为编码具有锌指结构转录因子基因家族的一员,在调节生物发育过程中扮演者至关重要的作用.该基因的异常表达还与多种肿瘤如髓母细胞瘤、子宫内膜癌、间叶组织肿瘤和胃肠癌的发生、发展密切相关.深入研究Zie1在肿瘤发生、发展中的作用及其分子调控机制,将对认识肿瘤的发病机制提供重要的分子靶点和理论依据.
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miR-125b通过靶向致癌基因LIN28B调控肝细胞癌细胞的增殖和侵袭行为
目的 探讨miR-125b通过靶向致癌基因LIN28B调控肝细胞癌的增殖和侵袭行为及其机制.方法 qPCR检测肝癌和癌旁正常肝组织中miR-125b和LIN28B的表达情况.双荧光素酶实验分析293U细胞中miR-125b和LIN28B之间的相互关联.MTT增殖实验检测miR-125b对肝癌HepG2细胞增殖能力的变化.Transwell侵袭实验检测miR-125b对HepG2细胞侵袭能力的变化.结果 与癌旁正常肝组织比较,肝癌组织中miR-125b和LIN28B表达增高(均P＜0.05).双荧光素酶实验证明miR-125b能与LIN28B的3'UTR特异性结合.抑制miR-125b可以抑制肝癌细胞增殖和侵袭能力(均P＜0.05).结论 miR-125b在肝癌发生和发展过程中发挥作用,可能是通过调控LIN28B的表达影响肝癌细胞的增殖和侵袭能力.
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室间隔缺损血清候选标志物锌指蛋白41的验证研究
目的 验证锌指蛋白41(zinc finger protein 41,ZNF41)是否为室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)患者的血清候选标志物.方法 收集室间隔缺损患者的血清和与之性别、年龄、民族等频数相匹配的房间隔缺损(atrial septal defect,ASD)患者、法洛四联症(tetralogy of Fallot,TOF)患者和健康对照者的血清各20例,应用蛋白免疫印迹(Western blot)和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,EUSA)检测各组血清样本中锌指蛋白41的表达水平.结果 Western blot检测结果显示,锌指蛋白41在4组血清中均有表达,但VSD组中的相对表达水平均高于其他3组(均有P＜0.05);ELISA检测结果可知VSD组的血清锌指蛋白41浓度为(136.72±56.44) pg/ml,ASD组为(94.54 ±41.98) pg/ml,TOF组为(100.69 ±37.08) pg/ml,健康对照组为(82.08 ±42.46)pg/ml,4组间差异有统计学意义(P =0.008),进一步两两比较,VSD组与其他3组之间差异均有统计学意义(均有P＜0.05),而其他3组两两间差异均无统计学意义(均有P＞0.05).结论 锌指蛋白41在VSD患者血清中表达水平较高,可能是VSD的血清候选标志物.
