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9-顺-维甲酸对人肺腺癌细胞株细胞分化和凋亡的影响
维甲酸类化合物(Retinoids)在调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动中起重要作用[1].其在体内的生理活性代谢产物包括全反式维甲酸(ATRA)、13-顺维甲酸(13-cis-RA)和9-顺维甲酸(9-cis-RA),它们可通过核维甲酸受体(RAR)结合于DNA应答元件调节靶基因的转录;其中9-cis-RA除生物学活性较强外,尚能与维甲酸X受体(RXR)结合.实验已证明,维甲酸类化合物能有效地抑制多种肿瘤细胞的生长并促进其分化[1].在动物模型上的研究表明9-cis-RA在治疗耐药性及播散性肿瘤方面比全反式维甲酸具有更大的潜力.本实验观察了不同浓度的9-cis-RA对人肺腺癌细胞生长、细胞形态、细胞周期和凋亡的影响,为临床利用维甲酸治疗恶性肿瘤提供实验依据.
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维甲酸信号通路的生物学进展
本文阐述了受维甲酸信号调控的基因表达多样性的分子机制,描述了维甲酸受体的特征、维甲酸反应元件的多态性、转录中介因子包括辅活化因子和辅抑制因子在维甲酸受体介导的转录调控中的作用,主要的维甲酸应答基因及维甲酸在肿瘤治疗中的应用.
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肠癌组织维甲酸受体的测定和维甲酸对其表达的影响
目的用放射配体结合分析法测定肠癌组织细胞内维甲酸受体 (retinoic acid receptor, RAR)含量,探讨维甲酸 (Retinoic acid, RA)对肠癌组织内RAR表达的影响.方法取Wistar大鼠160只,随机分4组,每组40只,其中第1、2组二甲基肼诱癌,第3、4组用生理盐水注射;于第7周开始,第2、3组按50mg/kg体重灌服维甲酸,每日1次,共8周.于7,14, 21周每组处死8只,于28周全部处死大鼠.测定RAR的含量.结果第1组肠癌发生率100%,第2组20%,差异有显著性(p<0.01);结肠组织细胞核内存在丰富的RAR,而肠癌组织RAR含量明显减少,并主要表现为数量的减少; RA对正常组织、肠癌组织内的RAR表达有显著性影响,差别有统计学意义(p<0.05).结论 RA可以减少二甲基肼诱发肠癌的发生;肠癌组织细胞内存在着RAR表达的异常; RA对肠癌组织的调控作用机制有待于进一步研究.
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CK7/CK20、MUC6、RARα在各类结直肠锯齿状病变中的表达及意义
目的 探讨CK7、CK20、MUC6、维甲酸受体(RARα)在各类结直肠锯齿状病变中的表达及鉴别意义.方法 应用免疫组化方法检测CK7、CK20、MUC6、RAR α在44例增生性息肉(HP),45例传统锯齿状腺瘤(TSA),11例广基锯齿状腺瘤(SSA)中的表达情况,并以结直肠管状腺瘤、腺癌及正常黏膜组织作为对照.结果 CK7阳性率HP为45.4%, SSA为36.4%,TSA为22.2%.CK20在结直肠各组病变中阳性率均较高,表达无差异.统计学分析显示,HP与TSA比较CK7的阳性率差异显著.MUC6的阳性率在SSA中为36.4%,HP中为4.5%,TSA中为11.1%.RAR α的阳性率在HP中为38.6%,SSA中为81.8%,TSA中为62.2%.统计学分析RAR α的阳性强度在HP和CRC中差异显著,在各型锯齿状病变间则差异不显著.结论 CK7(+)对鉴别HP和TSA有一定意义;MUC6(+)有助于SSA的确诊;RARα在锯齿状病变和结直肠腺癌组织中的阳性强度比正常结直肠黏膜组织减弱,但对各类锯齿状病变的鉴别意义不大.
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乳腺癌中雌激素α受体36与HER2表达的相关性
雌激素α受体( ERα)36是相对分子质量为36000的ERα剪接变异体,由Wang等[1]在2005年首次确定并克隆。ERα36的表达失调与包括乳腺癌在内的大多数疾病有密切关系。我们利用乳腺癌细胞系MCF-7,通过高表达ERα36蛋白后检测细胞内相关蛋白表达量的变化,分析ERα36与HER2及维甲酸受体( RAR)之间可能的调节机制。
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酵母双杂交技术筛选HBcAg肝细胞结合蛋白基因
目的:乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBcAg)在HBV感染的肝细胞中可同时存在于筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与HBcAg相互作用蛋白的基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBcAg基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出HBcAg基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上均能生长,并变成蓝色的真阳性菌落16个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有2个、未知基因4个、补体8 α基因1个、NAD(P)H脱氢酶亚基1个、维甲酸受体应答元件2基因1个、细胞色素c氧化酶基因1个、细胞色素b基因1个、DAZ相关蛋白2基因2个、线粒体核蛋白L41基因2个、人血白蛋白基因1个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白的结合蛋白,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.
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食管癌早期诊断的分子生物学标志物
肿瘤相关基因产物及肿瘤标志物的检测用于食管癌的早期诊断,已显示出可喜前景.核抗原Ki67、P53、P21、p27、c-myc蛋白和Bcl-2蛋白过量表达,cyclin D1基因蛋白表达及DNA倍体的定量检测,抑癌基因FHIT缺失、P16基因点突变,血清癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)、P53抗体的联合检测,微卫星不稳定性与D3S4513、D5S2501等标志物,iNOS,Cox-2蛋白,TSGF,端粒酶,Egr-1 mRNA和蛋白,脂肪酸合酶,TGFβ1和TGFβR Ⅱ,维甲酸受体RAR β等在食管癌的早期诊断中均不同程度的显示出自身的价值,对食管癌早期诊断的研究有重要作用.
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不同肺癌细胞RARγ受体转录水平对9-顺维甲酸诱导的反应
目的检测用9-cis-RA处理前后肺腺癌细胞株PG和A549维甲酸受体RARγ不同时相的表达变化.方法将两细胞株分别分为9-cis-RA组和对照组,应用细胞计数方法统计每组各时相细胞数,相对定量RT-PCR方法检测加药前后RARγ在不同时相的表达变化.结果加入9-cis-RA前,PG和A549细胞RARγ mRNA转录水平检测结果显示RARγ在PG细胞株中有一定水平的基础转录,而在A549细胞中无基础转录.应用1uM 9-cis-RA后,PG细胞的RARγ mRNA的转录水平受到抑制,而A549细胞的RARγ的转录水平在各时相有较弱的诱导表达.结论RARγ受体对9-cis-RA的诱导在不同细胞株中的反应不同,表明9-cis-RA对不同肿瘤细胞株的作用存在特异性.
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9-顺维甲酸诱导的肺癌细胞RXRs受体转录水平的变化
目的:检测用9-cis-RA处理前后肺腺癌细胞株PG和A549维甲酸受体RXRs不同时相的表达变化.方法:将两细胞株分别分为9-cis-RA组和对照组,应用细胞计数方法统计每组各时相细胞数,相对定量RT-PCR方法检测组加药前后RXRs各亚型在不同时相的表达变化.结果:加入9-cis-RA后,PG和A549细胞RXRS mRNA转录水平检测结果显示:(1)RXRγ在两细胞株中均有一定水平的基础转录,而RXRα、RXRβ均无基础转录.(2)应用luM 9-cis-RA后,两细胞株的RXRγ有短暂增高,其余受体转录无明显变化.结论:RXRγ可能参与介导9-cis-RA对两细胞株的诱导分化和凋亡作用.
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雄激素受体的分子生物学研究及其对运动科学的启示
雄激素的各种生理作用是由其靶细胞内受体(核受体)介导的,该受体即为雄激素受体(androgen receptor,AR),属于配体依赖的转录因子超家族,这一家族还包括其它类固醇激素(雄、雌、孕激素,糖、盐皮质激素,维生素D3)受体,甲状腺激素受体和维甲酸受体以及一些未知其配体的孤儿受体[1].一般认为细胞内仅有一种雄激素受体,睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)均是其有效配基,即"两配基一受体"学说[2].
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维甲类化合物R8607对人急性早幼粒白血病NB4细胞的分化及其作用机理
目的研究维甲类化合物R8607对人急性早幼粒白血病NB4细胞的分化诱导作用及其作用机理.方法采用NBT还原能力和细胞形态的方法观察R8607对NB4细胞功能和形态的分化作用,采用竞争性结合的方法测定R8607和维甲酸受体的结合能力并用流式细胞术观察其对细胞周期移行的影响.结果 R8607有抑制NB4细胞的生长并能使细胞的功能和形态发生分化的作用; 对维甲酸受体的3个亚型α,β,γ均有结合作用并将NB4细胞周期移行阻断在G1期.结论 R8607通过维甲酸受体的调节通路将NB4细胞阻断在G1期并诱导细胞发生功能和形态的分化.
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大黄素诱导癌细胞凋亡和抑制视黄醇X受体的转录激活功能
大黄素(emodin)对多种肿瘤细胞有较强的抑制增殖和诱导凋亡的作用,但其作用机制尚不清楚.本研究通过配体-受体竞争结合实验以及报告基因检测了大黄素对维甲酸X受体(retinoid X receptor alpha,RXRα)的结合和转录活性的调控,并研究了大黄素对肺癌细胞H460和肝癌细胞SMMC-7721生长和凋亡的作用.结果发现,大黄素对两种癌细胞有很强的抑制增殖作用,加入RXRα的天然配体9-顺式视黄酸(9-cis-retinoid acid,9-cis-RA)共同处理可显著缓解这种抑制作用.大黄素能浓度依赖地引起两种癌细胞系的凋亡,使细胞核出现碎裂和染色质浓染.报告基因实验发现大黄素对RXRα同源和异源二聚体的转录激活有显著抑制作用.体外的配体竞争结合实验发现,大黄素不直接结合RXRα的配体结合区.蛋白质免疫印迹实验发现,大黄素不影响RXRα的蛋白表达.结果提示,大黄素具有诱导肺癌细胞H460和肝癌细胞SMMC-7721凋亡和抑制细胞生长的作用,大黄素抑制9-cis-RA对RXR转录激活作用以及9-cis-RA具有一定程度拮抗大黄素对肺癌细胞H460和肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用,提示大黄素的抗癌作用可能与细胞内RXR的功能有关,并以RXR转录非依赖性的方式起作用.配体竞争结合实验结果提示大黄素可能间接作用于RXR.
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维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立
目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物.方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体.将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物.结果建立了高效的药物筛选细胞模型.此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定.结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选.
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两头尖中的香豆素类成分及其生物活性研究
为了研究两头尖的香豆素类化学成分,利用硅胶柱色谱及高效液相色谱等方法对两头尖提取物进行分离和纯化,根据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构.从中分离得到两个新的香豆素类化合物,分别鉴定为4,7-二甲氧基-5-甲基-6-羟基香豆素(1)和4,7-二甲氧基-5-醛基-6-羟基香豆素(2).生物活性试验显示两个化合物对肿瘤细胞的增殖有抑制作用,对维甲酸α受体(RARα)有激动活性,同时对人白细胞弹性蛋白酶也有抑制作用.
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肝癌细胞中AFP与RAR相互作用的实验研究
目的 探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)与维甲酸受体(retinoic acid receptor,RAR)之间的相互作用.方法 采用免疫荧光、荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer,Fret)及免疫共沉淀实验验证肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721胞质中AFP与RAR之间的相互关系.结果 在胞质中AFP与RAR存在共定位现象,Fret结果显示,两者之间存在很高的能量转移效率,分别为21%和19%.免疫共沉淀实验结果显示,胞质中AFP与RAR存在相互作用.结论 AFP与RAR存在相互作用,为后续研究AFP的生物学功能,以及维甲酸的药物疗效提供实验基础.
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维甲酸与胰岛素抵抗及2型糖尿病
代谢性核受体是一大类配体激活核受体转录因子,包括过氧化物酶体增殖体激活受体(PPAR)、肝X受体、法尼酯衍生物X受体等,代谢性核受体作为糖尿病治疗的新靶点日益受到国内外学者的关注,维甲酸受体也隶属于代谢性核受体,其与胰岛素敏感性以及胰岛B细胞功能均有紧密联系,现就维甲酸与2型糖尿病(T2DM)的相关新研究进行综述.
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维甲酸类化合物及其受体与银屑病研究进展
维甲酸类药物目前在银屑病治疗中广泛应用,疗效较为满意但机制未明.本文综述了维甲酸类化合物及其受体在正常表皮分化中的作用,阐述了其与银屑病发病的一定相关性,并指出详细机制待进一步研究.
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维甲酸对培养的猪支气管上皮细胞β-连环素/Tcf信号途径的影响
维甲酸(RA)及其衍生物在肺的胚胎发育过程及肺的损伤修复中发挥一定的作用,RA(ATRA)是维甲酸受体RAR和RXR两者的配体,RA可分别与RAR和RXR结合作为一种转录因子调节细胞的分化.同时核内RAR可以与β-连环素(β-catenin,β-cat)结合,激活下游基因表达.β-cat是Wnt信号途径的重要成分,在Wnt信号的刺激下,抑制β-cat的磷酸化,引起胞质中β-cat水平升高,以致于β-cat进入核内与TCF结合,活化靶基因CyclinD1,调控细胞周期,促进细胞生长与增殖.观察不同浓度的RA对TBEC的β-cat的蛋白及mRNA水平的影响,及RA对β-cat/Tcf途径影响,探讨其在细胞增殖分化中的作用.
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丹参酮ⅡA对NB4细胞PML-RARαmRNA和融合蛋白的影响
我们采用急性早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞株作为体外细胞模型,检测丹参酮ⅡA(TanⅡA)作用NB4细胞后早幼粒细胞白血病-维甲酸受体α(PML-RARα)mRNA和融合蛋白的变化,探索TanⅡA诱导NB4细胞分化与凋亡[1]的分子机制.
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维甲酸及其衍生物对卵巢癌作用的研究进展
卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤,发病率和死亡率较高,5年存活率低.维甲酸是维生素A代谢及化学合成衍生物,具有多种同分异构体,在体内维甲酸可以通过其结合蛋白和受体调节其分布、代谢和发挥生物学活性.维甲酸衍生物是在全反式维甲酸分子结构的基础上衍生而来的一类促凋亡化合物,较维甲酸具有更低的细胞毒作用和更强的抗肿瘤作用.维甲酸及其衍生物可以通过受体依赖和抑制转录活性因子活性蛋白-1等途径抑制细胞增殖、调控凋亡、诱导分化和抑制血管生成发挥抗肿瘤作用.