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阳春砂和在烟草中单独及共同过量表达调控萜类化合物的生物合成
目的:HMGR 和DXR 分别是萜类生物合成途径---MVA和MEP途径的关键酶,本研究探讨阳春砂A vHMGR 和A vDXR 在转基因烟草中的过量表达对不同萜类化合物生物合成的影响。方法:采用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)技术分析A vHMGR 和 A vDXR 的表达水平,应用专一底物法测定 HMGR 和DXR 的酶活性,利用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术检测不同萜类化合物的变化。结果:A vHMGR 或A vDXR 单独过量表达抑制了HMGR 和DXR 的活性,提高了五针松烯、新植二烯、薄荷烯和甾醇的含量;而A vHMGR 和A vDXR 共同过量表达对不同植株中酶活性的影响有差异,提高了甾醇和植醇的含量,但抑制了新植二烯的积累。结论:A vHMGR 和A vDXR 单独或共同过量表达对烟草中不同萜类化合物的合成调控存在差异,同时也证明了MVA和MEP途径并不完全独立,而是有着相互交流,本研究为利用阳春砂A vHMGR 和A vDXR 进行萜类化合物的代谢调控提供了依据。
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用基因芯片技术研究乙醇对肝星状细胞增殖及其CYP450亚型表达的影响
乙醇可经细胞色素P450 2El(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)代谢为乙醛,并产生脂质过氧化产物,引起肝损伤,并可通过肝细胞中过量表达的CYP2E1激活肝纤维化发生的关键细胞--肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)[1].但乙醇能否直接激活HSCs及其可能的机制报道甚少.
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B淋巴细胞刺激因子及其受体与疾病的研究进展
B淋巴细胞刺激因子(BLys)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的新成员,属Ⅱ型跨膜蛋白,其通过与细胞表面的3个受体--B细胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B细胞活化因子受体(BAFF-R)结合而广泛参与B、T淋巴细胞增殖和功能调节.BLys缺乏可导致免疫功能低下,在体外其过量表达能促进多种B系肿瘤细胞的生长,在BLys转基因小鼠中可出现严重的红斑狼疮样症状[1,2].现综述介绍BLys及其受体的分子结构、生物学活性以及与自身免疫性疾病和肿瘤等发生与发展的研究进展.
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成纤维细胞生长因子受体3基因荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立
慢性骨髓白血病、恶性浆细胞瘤、多发性骨髓瘤等疾病均发现成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)的过量表达 [1,2].因此,FGFR3有可能作为病理检验和疗效评价的标志分子.目前国内尚无定量测定FGFR3表达水平的方法.本试验运用SYBR GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测方法,建立了FGFR3基因的定量检测系统.为进一步FGFR3临床和基础研究作好了准备.报道如下.
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食管癌早期诊断的分子生物学标志物
肿瘤相关基因产物及肿瘤标志物的检测用于食管癌的早期诊断,已显示出可喜前景.核抗原Ki67、P53、P21、p27、c-myc蛋白和Bcl-2蛋白过量表达,cyclin D1基因蛋白表达及DNA倍体的定量检测,抑癌基因FHIT缺失、P16基因点突变,血清癌胚抗原(CEA)、鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)、P53抗体的联合检测,微卫星不稳定性与D3S4513、D5S2501等标志物,iNOS,Cox-2蛋白,TSGF,端粒酶,Egr-1 mRNA和蛋白,脂肪酸合酶,TGFβ1和TGFβR Ⅱ,维甲酸受体RAR β等在食管癌的早期诊断中均不同程度的显示出自身的价值,对食管癌早期诊断的研究有重要作用.
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护骨素与代谢骨病和血管钙化
素或称骨保护素(osteoprotegerin, OPG)发现于1997年[1],后相继被不同领域的研究者分别鉴定为破骨细胞生成抑制因子(OCIF)[2]、肿瘤坏死因子受体-1(TNFR -1)[3]和滤泡树状细胞受体-1(FDCR-1)[4].互补脱氧核糖核酸(cDNA)测序分析证明, 它们均属同一基因编码的同一分子.因OPG具有抑制破骨细胞(OC)分化、活化和上调骨密度的生物学作用[1]而得名.研究证实,OPG转基因(OPG+/+)过量表达OPG的小鼠呈现骨硬化症表型[1] ,OPG基因敲除(OPG-/-)所致OPG缺乏小鼠在成熟前即显示严重骨质疏松(OP)及主动脉和肾动脉钙化[5].用重组OPG预防治疗,可防止OP和血管钙化的发生及逆转OP [6].OPG缺乏与代谢性骨病和血管钙化之间的关系正日益引起重视.
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肺癌组织中bcl-2的表达与其抗凋亡特性的关系
研究证明,肿瘤组织中bcl-2基因的过量表达可能与其逃避机体免疫攻击、对抗凋亡的机制有关[1].本研究采用免疫组化和原位细胞凋亡染色法,观察肺癌组织中bcl-2的表达及与细胞凋亡的关系,以探讨肺癌逃避免疫攻击的机制.
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内皮脂肪酶与脂蛋白代谢和动脉粥样硬化关系的研究进展
内皮脂肪酶(Endothelial lipase,EL)是近几年被发现的一个脂肪酶家族新成员.1999年Hirata等[1]利用削减杂交在培养的人脐静脉内皮细胞中首次克隆到了EL,同年,Jaye等[2]利用其他方法也证实了EL.近,人们又克隆出了EL的两种异构体,它们存在于内皮细胞胞质内,但并没有脂肪酶活性[3].序列分析显示EL与脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)有44%的同源性,与肝脂肪酶(hepatic lipase,HL)有41%的同源性.因为这种脂肪酶由内皮细胞合成并在此发挥作用,所以被命名为内皮脂肪酶.研究发现EL是调节高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)代谢的关键酶,EL过量表达的动物会出现HDL胆固醇水平下降,而缺EL基因动物HDL胆固醇水平则显著升高[4].细胞因子和物理因素等均显著影响内皮细胞EL的表达.因此,EL可能在脂质代谢和动脉粥样硬化发展过程中发挥重要作用.
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p27和Ki-67在甲状腺肿瘤中的表达及其意义
p27被认为是判断肿瘤预后的独立标志物.大量研究表明Ki-67过量表达与胃癌、大肠癌等恶性肿瘤的生物学行为和预后密切相关.我们旨在探讨p27、Ki-67在甲状腺肿瘤中的表达及其意义.
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可溶性血管内皮生长因子受体-1在重度子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义
子痫前期是妊娠期特有疾病,胎盘形成或母体对胎盘的反应是子痫前期发生的中心环节[1],但具体发病机制尚不十分明确.近研究发现,循环中可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble fms-like tyrosine kinase-1,sFlt-1)过量表达可能与重度子痈前期的发生发展密切相关[2],sFlt-1过度表达可阻断血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的生物学作用,造成全身内皮功能失调,产生高血压、蛋白尿等重度子痫前期的表现.故本研究通过免疫组织化学方法,检测胎盘组织中sFlt-1蛋白的表达,探讨重度子痫前期患者胎盘组织中sFlt-1的表达部位、表达水平及其意义.
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γ-干扰素对培养人结膜上皮细胞及泪腺上皮细胞的影响
γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)是致炎作用很强的细胞因子,在机体各类炎性反应过程中起着重要的作用,它不仅可以诱导多种上皮细胞过量表达细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1,CD54)、主要组织相容性抗原(HLA-DR)等,而且可诱导细胞凋亡[1].
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红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK的克隆及原核表达
目的:探讨红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因eryK在大肠杆菌中的佳表达条件.方法:将eryK基因克隆到表达质粒pET-22b(+),使其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并对装液量、接种量、诱导时间、IPTG浓度和FeCl3浓度等表达条件进行优化.结果与结论:SDS-PAGE电泳显示,在相对分子质量44×103处有EryK蛋白条带,其含量占菌体总蛋白的58%以上.证明高GC含量的红色糖多孢菌C-12羟基化酶基因EryK可以在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地表达,为体外研究EryK酶学相关性质以及大规模发酵奠定了基础.
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难治性癫痫的耐药机理
癫痫是一种常见病,但约30%为难治型,一些证据表明多种药物转运蛋白如P-糖蛋白(P-GP)和多种药物抗结合蛋白(MRP)在癫痫脑组织中过量表达,从而减少了抗癫痫药物进入癫痫神经元的量,这一假设可能是产生癫痫抗药性的原因之一,这方面有待进一步研究.
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基质金属蛋白酶与颅内病变研究进展
基质金属蛋白酶(MMPs)是一组破坏细胞外基质(ECM)的锌和钙依赖型蛋白水解酶.正常情况下体内MMPs含量极微并在机体发育、创伤愈合等生理功能中发挥重要作用,但在病理情况下其过量表达并参与诸如缺血性脑卒中、脑动脉瘤、颅内恶性肿瘤的侵袭和转移以及颅脑损伤等一系列疾病的病理生理过程.因此笔者就中枢神经系统病变中MMPs的研究进展作一综述.
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Bcl-2抑制CD3ε分子介导的T淋巴细胞凋亡
目的研究Bcl-2过量表达对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的影响.方法采用电穿孔法将bcl-2基因表达载体转染CD8ε阳性的人Jurkat T淋巴细胞(TJK),获得稳定表达Bcl-2的细胞株(TJK/Bcl-2)后,用抗CD8单克隆抗体刺激和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果Bcl-2过量表达可显著抑制TJK细胞凋亡.结论Bcl-2参与CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡的调控.
关键词: Bcl-2基因 过量表达 CD3εT淋巴细胞凋亡 -
人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P4启动子甲基化变化及其意义
胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)是肝细胞产生的一种多功能调节因子,其基因含4个不同的启动子(P1~P4).在胎肝和新生儿肝,IGF-ⅡmRNA表达量高,其中P3活性大,其次分别为P4及P2,P1失活;在成人肝脏,IGF-ⅡmRNA水平显著下调,约为新生儿峰值的1/10,其中P1活性大,P2~P4活性明显降低或失活[1].近年发现,IGF-Ⅱ在人类肝脏的癌前病变及肝癌中呈过量表达[2,3],但其详细机制尚未明确.本研究探讨了肝癌组织中P4是否存在低甲基化及其与P4转录子表达变化的关系,旨在阐明IGF-ⅡP4启动子在肝细胞癌变中的作用及其临床病理意义.
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子宫内膜癌细胞中同源盒B13基因过量表达与肿瘤浸润的关系
目的:探讨正常子宫内膜组织细胞和子宫内膜癌组织细胞中39种同源盒(HOX)基因的表达情况.方法:采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)的方法测定目前已知的39种HOX基因在正常的子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达情况;通过转染技术将反义HOXB13基因片段转染到子宫体癌瘤株AN3CA中:应用Matrigel浸润试验比较转染前后细胞浸润能力的变化.结果:与正常子宫内膜细胞相比,子宫内膜癌细胞中HOXB13基因是过量表达的,转染后的AN3CA细胞的浸润能力下降了90%(P<0.01).结论:HOXB13基因的过量表达可能与子宫内膜癌的浸润转移相关.
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反义同源盒基因的导入对子宫内膜癌AN3CA细胞浸润能力的影响
目的:通过同源盒(HOX)B13、C13基因的反义RNA片段的导入,研究子宫内膜癌细胞浸润能力发生的变化.方法:通过质粒转染技术将反义HOXB13基因片段和反义HOXC13基因片段分别或共同转染到子宫内膜癌AN3CA细胞中;应用Matrigel浸润试验比较转染前后细胞浸润能力发生的变化.结果:转染了HOXB13反义RNA和共同转染HOXB13+HOXC13反义RNA的AN3CA细胞的浸润能力下降了90%(P<0.01),而转染了HOXC13反义RNA的AN3CA细胞的浸润能力没有明显下降.结论:在39种人类HOX基因中虽然只有HOXB13和HOXC13基因在正常的子宫内膜细胞中不表达而在子宫内膜癌的细胞中过量表达,但是只有HOXB13基因与子宫内膜癌的浸润密切相关,HOXC13与子宫内膜癌的浸润能力的增强没有明显相关.
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塞来昔布抗肿瘤作用的研究进展
到目前为止,人们对塞来昔布(celecoxib)的抗肿瘤机制还不是完全清楚,但是越来越多的研究集中于抑制环氧化酶-2(cyclooxygenase -2,COX -2)活性、降低肿瘤细胞内前列腺素E2( PGE2)水平方面.COX -2是一种诱导型表达的蛋白酶,在正常组织中几乎不表达;但是在应激条件或者细胞活素类物质刺激,特别是在肿瘤细胞和组织中会过量表达,活性升高[1,2],同时伴随PGE2含量的提高,肿瘤细胞给予过量的PGE2,促进肿瘤细胞的增生和浸润[3].目前多项试验对塞来昔布作用机制进行研究,现综述如下.
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血管生成抑制素和人血纤维蛋白溶酶原K5环的研究进展
早在20世纪70年代初,Folkman就提出,肿瘤生长是血管依赖性的[1].肿瘤的生长有两个明显的不同阶段,即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增生阶段.血管生成使肿瘤能够获得足够的营养物质,是促成上述转变的关键环节,如果没有血管生成,原发肿瘤的生长不会超过1~2 mm2.同时,肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因.血管生成的调节主要依赖血管形成的刺激因子和抑制因子.例如:肿瘤中成纤维细胞生长因子(FGFs),血管内皮生长因子常为过量表达的血管生成的刺激因子.肿瘤组织可表达一种或多种血管生成刺激因子的多肽,它们能协同刺激肿瘤血管生成和促进肿瘤生长.