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分子医学进展带来的伦理、法律与社会的影响
空前的机遇近20年来,分子医学,尤其是基因组学的飞速发展,使我们关于人类健康与疾病的知识在细胞与分子水平上发生了一场革命.自1995年首先发表了嗜血性感冒杆菌的基因顺序以来,50余个细菌、真菌及寄生虫的基因顺序相继发表.公元2001年,人类基因组的30多亿个碱基对的顺序已基本确定,与此同时生物医学实验研究的主要动物模型-小鼠的基因图也已绘就.基因组学涵盖一系列特异的技术平台,从不同的角度分析基因组及其产物,包括转录子组学,蛋白质组学及调节与代谢机制研究.
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RHD基因不同转录子表达载体的构建
RHD基因存在多种不同的另路剪接的转录子,本研究分别构建正常mRNA及DEL9和DEL89转录子的表达载体.从Rh(D)阳性新生儿脐血网织红细胞中提取总RNA,分别采用一步法和两步法RT-PCR获取完整目的转录子片段,然后分别克隆至pCR4 TOPO测序载体并测序验证和筛选.用正常RHD cDNA筛选质粒为模板,PCR扩增全长目的基因,然后亚克隆至pcDNA3.1/VS-His TOPO表达载体;DEL9和DEL89转录子直接克隆至表达载体,通过测序验证目的基因序列及插入方向.结果表明,序列分析证实了不同目的基因片段序列和方向正确,表明3种不同RHD转录子的表达载体构建成功.结论:RHD不同转录子表达载体已成功构建,为进一步研究Rh(D)抗原膜表达机理奠定了基础.
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人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P4启动子甲基化变化及其意义
胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)是肝细胞产生的一种多功能调节因子,其基因含4个不同的启动子(P1~P4).在胎肝和新生儿肝,IGF-ⅡmRNA表达量高,其中P3活性大,其次分别为P4及P2,P1失活;在成人肝脏,IGF-ⅡmRNA水平显著下调,约为新生儿峰值的1/10,其中P1活性大,P2~P4活性明显降低或失活[1].近年发现,IGF-Ⅱ在人类肝脏的癌前病变及肝癌中呈过量表达[2,3],但其详细机制尚未明确.本研究探讨了肝癌组织中P4是否存在低甲基化及其与P4转录子表达变化的关系,旨在阐明IGF-ⅡP4启动子在肝细胞癌变中的作用及其临床病理意义.
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LAT在HSV-1潜伏-复发感染中的研究进展
疱疹病毒的一个特点就是在宿主体内可以建立长期的潜伏感染,单纯疱疹病毒-1(HSV-1)在原发感染如单纯疱疹病毒性脑炎、角膜炎后,除了可以在三叉神经节等外周神经组织建立潜伏感染之外,角膜也是其潜伏感染部位之一.潜伏相关转录子LAT (latency-associated transcript)是HSV-1在潜伏感染时唯一大量表达的基因,同时LAT对HSV-1有效地从潜伏状态再激活也是必须的.本文对近几年LAT在HSV-1潜伏-复发感染中的研究进展做一综述.
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主要组织相容复合物Ⅰ类相关基因A与直肠癌发病及病程转归的影响
主要组织相容复合物Ⅰ类相关基因A(major histocompatibility complex class Ⅰ chin-related gene A,MICA)作为人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类相关基因,是位于HLA-B位点上游约46 kb处,全长11 722 bp,编码1382 bp的转录子.MICA基因具有高度多态性,目前已发现59个等位基因.
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信号调节蛋白SIRPα在肝癌内的表达及意义
目的:探讨信号调节蛋白SIRPα与肝细胞癌之间的关系.方法:应用Northern杂交技术,检测36对肝细胞癌(HCC)和相应癌旁肝组织,以及1种正常肝细胞系、4种肝癌细胞系内SIRPα基因表达的变化,并结合各组织标本的病理学特点进行分析.结果:SIRPα在20例肝癌组织及两种肝癌细胞系内表达水平明显下降.在两种主要杂交信号中,肿瘤组织内3.9 kb转录子表达量较癌旁组织下降2~4倍,而2.5 kb转录子表达量则下降4~6倍.有9例肿瘤组织在原基因表达水平下降的同时,在3.9 kb转录子的上方又出现一长度稍大的杂交信号,而相应癌旁肝组织内则为阴性.其中,5例有肝内或门静脉转移的肿瘤组织,SIRPα表达全部下降,且均发现有这种新的基因表现形式出现.结论:SIRPα,尤其是2.5 kb转录子在肝癌内表达下降,与肿瘤进展程度密切相关,且肿瘤组织内存在SIRPα相关的新的基因表现形式.SIRPα可能为肝癌发生发展过程中一个重要的调节蛋白.
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细胞粘附分子CD44在消化道肿瘤中的表达及临床意义
肿瘤的浸润转移是肿瘤细胞与宿主间复杂的多步骤相互作用的结果.Listta[1]先提出浸润转移的三步学说:即粘附、降解和移动.其中粘附是指肿瘤细胞通过自身的细胞膜表面的粘附受体与细胞外基质成分间的相互作用.细胞粘附分子CD44是一种分布广泛的跨膜糖蛋白,介导细胞与细胞,细胞与间质之间的粘附.其转录子根据所含外显子可分为两种类型:标准型CD44(standardform CD44,CD44s)和变异型CD44(variance form CD44,CD44v).近来研究提示:CD44变异型与多种肿瘤的生长、侵袭、转移和预后有关[2].本文对CD44基因定位、结构及CD44蛋白的主要功能与消化道肿瘤关系概述如下.
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白细胞介素8-251位点单核苷酸多态与胃癌及癌前疾病的关系
白细胞介素-8(IL-8)是趋化因子超家族中的一员,属于CXC趋化因子家族,在多种因素(脂多糖、IL-1等)刺激下,多种细胞均可产生IL-8,如单核细胞、内皮细胞和肿瘤细胞等.IL-8启动子区包括几个转录子结合位点,包括核因子-kappaB(NF-kappaB)、CAAT/增强结合蛋白、Lef/TCF等.在这些位点中尚未找到与疾病关系密切的多态.可能与激活IL-8启动子有关的多态在转录起始部位上游-251处[1].目前的研究发现IL-8-251A等位基因的携带频率在胃癌组显著高于对照组,但是IL-8-251多态性在各种不同胃疾病中的分布情况尚无报道.
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人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系
目的 探讨人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P3,P4启动子表达及其与p53基因突变的关系.方法 应用半定量RT-PCR、PCR、直接测序分别检测7例正常成人肝组织、23例乙型肝炎病毒阳性肝癌组织IGF-Ⅱ基因P3,P4启动子特异的转录子表达及p53基因突变状况.结果 ①绝大多数肝癌组织P3和P4 mRNA表达量显著上调,平均值均明显高于正常成人肝组织(P<0.01);②肝癌组织p53基因的突变率为30.4%(7/23).③23例肝癌组织中,具有p53基因突变的标本P3,P4 mRNA表达水平分别明显高于无p53基因突变的肝癌组织(P<0.05).结论 ①IGF-Ⅱ基因P3和P4再激活是大多数乙型肝炎病毒阳性肝癌的重要特征;②肝癌组织P3,P4 mRNA显著上调与p53基因突变密切相关,后者可能是P3,P4再激活的转录调控机制之一.
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单纯疱疹病毒潜伏相关转录子功能的研究进展
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)早的报道在1984年,1987年通过Northern印迹检测确定.LATs是HSV病毒唯一大量存在和被转录的RNAs.LAT基因区域是高度重复的基因区域,编码的有非主要的8.3-kb的LAT和主要的2.0-kb,1.5-kb和1.45-kb的LATs,其中2.0-kb LAT由于在HSV-1潜伏过程中大量存在而被广泛的研究.
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基因表达系列分析技术及其应用
基因表达系列分析(Serial Analysis of GeneExpression,SAGE)是近几年来发展起来的一种全基因组基因表达分析和寻找差异基因的新技术,能同时对大量的转录物进行定性和定量分析,可以同时反映正常或异常等不同功能状态下细胞整个基因组基因的全貌,特别对低丰度表达基因有较高的检测结果,因而具有重要的应用价值.它不但能快速详细地同时分析成千上万个基因转录子的丰富信息,还能发现新基因.SAGE是目前较为成熟的用于全基因组基因分析的方法,经过数年的探索,SAGE受到广泛关注,显示出广阔前景.本文简介SAGE技术的基本原理、操作方法、应用前景、优缺点.