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单纯疱疹病毒潜伏与复发机理的研究进展
本文对国外近年关于单纯疱疹病毒潜伏和复发机理研究的进展作一综述.内容包括HSV基因的表达和DNA的合成过程;潜伏相关转录体、ICP4和神经细胞及其因子、TK激酶在HSV潜伏和复发中的作用.
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双秦眼用凝胶对小鼠单疱病毒性角膜炎的抗复发作用研究
目的:探讨双秦眼用凝胶对小鼠单疱病毒性角膜炎(HSK)的抗复发作用.方法:用角膜病毒接种法给BALB/c小鼠接种单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) SM44株,随机分为对照组、无环鸟苷(ACV)组、双秦眼用凝胶组.连续给药2周,停止用药8周后紫外线B (UV-B)光照射,诱导HSK复发,观察各组小鼠泪液膜擦拭液的病毒检出率、UV-B光照射前后病变部位体征评分、角膜组织结构、聚合酶链反应(PCR)方法检测三叉神经节(TG)内HSV-1的潜伏,以及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TG内潜伏相关转录子(LAT)的表达情况.结果:UV-B光照射后,各组检出率均呈不同程度的升高;在照射后7d的泪液膜擦拭液里,除第3-5天双秦眼用凝胶组的泪液膜擦拭液里的病毒检出率高于ACV组外,其余几天,双秦眼用凝胶组的病毒检出率均低于其余两组.但是,比较各组间每天的病毒检出率,均无显著统计学差异;在病变部位体征评分方面,应用双秦眼用凝胶治疗后的小鼠在UV-B光照射诱导后病变程度轻于其余两组(P＜0.05);HE染色观察角膜组织结构发现,UV-B光照射后,对照组及ACV组角膜均有不同程度的损伤,双秦眼用凝胶组角膜各层结构大致正常;双秦眼用凝胶组TG内HSV-1的潜伏及LAT的表达均受到抑制;用PCR技术检测各组小鼠TG内HSV-1 DNA的灰度值,结果显示,双秦眼用凝胶优于对照组(P＜0.05)及ACV组(P＜0.01);应用RT-PCR技术检测并比较各组小鼠TG内LAT mRNA的灰度值,双秦眼用凝胶亦优于对照组(P＜0.01)及ACV组(P＜0.05).结论:双秦眼用凝胶在一定程度上可以降低HSK小鼠泪液膜擦拭液的病毒检出率,减轻UV-B光照射后角膜病变体征、保护角膜的组织结构、抑制TG内HSV-1的潜伏和LAT的表达,但双秦眼用凝胶对小鼠HSK的抗复发作用及机制仍需在增加样本量、排除外界因素影响的基础上进一步研究探讨.
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双秦眼用凝胶对小鼠单疱病毒性角膜炎的干预作用及三叉神经节内LAT表达的影响
目的:探讨双秦眼用凝胶对小鼠单疱病毒性角膜炎(HSK)的干预作用及三叉神经节(TG)内潜伏相关转录体(LAT)表达的影响.方法:用角膜病毒接种法给BALB/c小鼠接种Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)SM44株,随机分为对照组,无环鸟苷(ACV)组,双秦眼用凝胶组.连续给药2周,通过对病变部位体征评分、角膜组织病理观察以及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测LAT在TG内的表达情况综合评价双秦眼用凝胶对HSK模型小鼠的药效及作用机制.结果:治疗14d后,双秦眼用凝胶组和ACV组的病变程度较对照组减轻,差异有统计学意义(P＜0.01),同时双秦眼用凝胶组优于ACV组,差异有统计学意义(P＜0.05).角膜组织病理学观察发现,双秦眼用凝胶组角膜各层结构大致正常,其余各组均出现病理损伤.RT-PCR检测各组小鼠TG内LAT mRNA半定量RT-PCR灰度值,结果显示,双秦眼用凝胶对TG内LAT表达的抑制作用优于对照组(P＜0.05),而ACV抑制LAT表达的作用不明显.结论:双秦眼用凝胶不仅可以减轻HSK的病变程度、保护角膜正常的组织结构,而且可以抑制LAT在TG内的表达.
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单纯疱疹病毒潜伏感染的分子基础
单纯疱疹病毒在体内的生存策略是建立潜伏感染,一定条件下被激活而致病情复发.虽然近年来在分子水平对潜伏感染和再激活进行了相当的研究,但确切机制尚不十分清楚.目前受到关注的主要有潜伏相关转录体、立即早期基因、病毒蛋白16、组蛋白修饰以及CD8+T细胞.进一步研究有助于寻找和发现针对性预防和治疗HSV感染的新方法或药物.
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单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响
目的 研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)凋亡的影响.方法 构建重组质粒pEGPF-ORF3,并转染Vero细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证目的基因的表达.顺铂诱导Vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察凋亡小体,Giemsa染色检测细胞核形态,噻唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡情况.实验结果采用SPSS13.0进行分析,各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验.结果 成功克隆HSV-2 333株ORF3基因,构建pEGFP-ORF3真核表达载体,RT-PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达.转染pEGFP-ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色,显示胞核蓝染,胞质淡浅,细胞形态正常.MTT法分析显示,细胞增殖在转染pEGFP-ORF3组(2.56±0.21)与未经任何处理的正常对照组(2.66±0.13)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组(1.65±0.11)和pEGFP-C2组(1.56±0.18),差异均有统计学意义(P＜0.05)；流式细胞仪分析细胞凋亡率,转染pEGFP-ORF3组(4.03％±1.04％)与正常对照组(2.13％±0.09％)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但低于空质粒pEGFP-C2组(19.45％±2.05％),且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HSV-2 LAT ORF3在Vero细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用.
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单纯疱疹病毒的生物学特点及其潜伏复发机制研究进展
目的：单纯疱疹病毒属疱疹病毒a亚科，是双链DNA病毒，可分为HSV-1及HSV-2两种血清型，感染后可在体内长期潜伏，易复发，给相关疾病的治疗及预防造成了巨大困难。阐明病毒潜伏感染及复发的相关机制，对进一步揭示HSV感染复发发生的本质，以有效防治HSV感染及潜伏复发有重要意义。本文综述了单纯疱疹病毒的生物学特点及其潜伏复发机制研究进展。
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单纯疱疹病毒潜伏与复发机理的研究新进展
本文对国外近年关于单纯疱疹病毒潜伏和复发机理研究的进展作一综述.内容包括HSV基因的表达和DNA的合成过程;潜伏相关转录体、ICP4和神经细胞及其因子、TK激酶在HSV潜伏和复发中的作用.
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Ⅱ型单纯疱疹病毒的潜伏相关转录体
潜伏相关转录体(eatency-associated transcripts,LATs)是HSV病毒在潜伏期间大量存在和被转录的RNAs,在70年代发现初期即被认为在HSV潜伏的建立、维持和再激活过程中起重要的作用.它是目前HSV潜伏与复发研究的一个热点.
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潜伏相关转录体对单纯疱疹病毒的再激活作用
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属于α疱疹病毒科,有HSV-1和HSV-2两个血清型.HSV-1病毒主要感染唇、口、眼、脑等部位,可引起眼结膜炎、致死性脑炎等疾病,而HSV-2病毒则感染腰以下部位,主要引起生殖器疱疹(genital herpes,GH)[1].HSV病毒感染之所以成为世界性的医学难题,其易潜伏特性是症结所在.
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单纯疱疹病毒潜伏相关转录子功能的研究进展
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)早的报道在1984年,1987年通过Northern印迹检测确定.LATs是HSV病毒唯一大量存在和被转录的RNAs.LAT基因区域是高度重复的基因区域,编码的有非主要的8.3-kb的LAT和主要的2.0-kb,1.5-kb和1.45-kb的LATs,其中2.0-kb LAT由于在HSV-1潜伏过程中大量存在而被广泛的研究.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF真核表达载体的构建及表达
目的 构建单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF片段真核表达载体,并在Vero细胞中进行表达. 方法用PCR方法从已成功构建的pVAX-LAT重组质粒中扩增潜伏相关转录体基因ORF片段,克隆到pcDNA 6/myc-his B质粒中,构建pcDNA-ORF重组质粒,双酶切及测序鉴定其正确性.以脂质体法瞬时转染Vero细胞,并用RT-PCR和Western blot检测其表达. 结果双酶切及测序表明ORF片段大小及序列均正确,RT-PCR及Western blot显示重组质粒在Vero细胞中得到了表达. 结论成功构建了pcDNA-ORF重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达.
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单纯疱疹病毒的潜伏、复发感染与防治
单纯疱疹病毒(HSV)分为HSV-1及HSV-2两种血清型,感染后可在人体内长期潜伏且易复发,造成治疗及预防上的巨大困难.潜伏相关转录体(LATs)是单纯疱疹病毒潜伏期间大量存在和被转录的RNA,也是目前研究单纯疱疹病毒潜伏与复发机制的热点.近年来的研究使研究者们对LATs在单纯疱疹病毒潜伏、复发中所起的作用有了更进一步的认识.CTCF(CCCTC binding factor)是广泛存在于真核生物的多功能转录因子,其M段11个锌指结构可以形成不同的组合,调控多种靶基因的表达.CTCF在病毒的潜伏和激活过程中发挥着重要的调节作用,CTCF从结合位点脱落,病毒将被激活进行复制.目前,HSV感染的治疗主要依靠口服抗病毒药物,但难以清除患者体内潜伏的病毒,因此研究HSV疫苗已成为预防和治疗生殖器疱疹的关键.虽然目前尚无安全有效的疫苗批准上市,但其研制已取得一定的进展.阐明病毒潜伏及感染复发的具体机制,对揭示HSV感染易复发的本质,及有效防治HSV感染有重要意义.
