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人乳头瘤病毒、沙眼衣原体和单纯疱疹病毒Ⅱ型感染与宫颈疾病的相关性研究
目的 探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)、沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)和单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-Ⅱ)感染与宫颈疾病的关系.方法 采用核酸分子快速杂交基因分型技术对598例宫颈脱落细胞进行HPV感染基因型分型测定,同时应用实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测CT和HSV-Ⅱ两种病原体的感染情况.结果 HPV、CT和HSV-Ⅱ的阳性检出率分别为24.9％、9.2％和8.9％,且随着宫颈病变程度加重而逐渐增高,宫颈炎组和宫颈癌病变组三种病原体的感染率差异均有统计学意义.HPV感染以高危型为主(占77.9％),低危型为22.1％.HPV高危型和阴性组比较两种病毒的感染率有统计学差异(CT:x2=26.97,P＜0.05;HSV-Ⅱ∶x2=65.93,P＜0.05).各宫颈病变组均有多病毒混合感染情况出现,其中宫颈癌组混合感染率为22.2％.结论 HPV、CT和HSV-Ⅱ感染与宫颈癌的发生密切相关,多病原体混合感染会促进宫颈癌的发生.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gG-2相关研究进展
本文综述了单纯疱疹Ⅱ型的包膜糖蛋白gG-2作为抗原在HSV-2血清学诊断分型脐包膜糖白gG-2作为疫苗成分的研究进展
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上海口岸入境人员单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体检测及其流行病学特征
目的 了解上海口岸入境人群中单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染率及其流行病学特征,为口岸性传播疾病的科学防控提供依据.方法 随机抽取2012年5月上海口岸艾滋病病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)和梅毒螺旋体抗体检测阴性的入境人员874名以及历年上述3种抗体检测任一阳性的入境人员167名,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HSV-2特异性IgG抗体,并利用SPSS软件对数据进行统计学分析.结果 874名HCV、HIV和梅毒抗体全阴性者中154例HSV-2抗体阳性,感染率17.6％,且随着年龄增长,HSV-2感染率随之增长(x2=17.255,P＜ 0.001).HIV、HCV或梅毒螺旋体抗体检测任一阳性的167名入境人员中52例HSV-2抗体阳性,感染率31.1％,其中,女性感染率为45.5％,男性感染率为26.0％,女性显著高于男性(x2=5.711,P=0.017).结论 上海口岸入境人员中HSV-2抗体阳性率较高,尤其伴随HCV、HIV、梅毒螺旋体感染时感染率高达31.1％,远高于我国普通及某些特殊人群的平均感染水平,因此,入境人员中较高的HSV-2感染率对HSV-2向我国传播扩散形成威胁和压力,应加强人境人员HSV-2血清学监测,严防通过口岸传播.
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降落PCR扩增单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的研究
目的 建立一种快速,准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的方法.方法 根据已发表的gG蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gG蛋白基因进行扩增.结果 从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且能有效地降低或避免非特异性扩增.结论 TD-PCR能够用于快速,准确地检测gG蛋白基因,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白免疫优势肽段在杆状病毒表达系统的表达及其反应原性
目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白G(gG-2)免疫优势片段gG321-580进行表达,纯化并评价其反应原性,以探索HSV-2免疫诊断试剂的研制.方法 提取HSV-2 DNA作为模板,PCR扩增gG321-580基因,克隆至pFastBac HTC载体中,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gG321-580融合蛋白,SDS-PAGE和Western-blotting鉴定表达产物,NTA-Ni2+纯化后间接ELISA评价其反应原性.结果 HSV-2 gG321-580在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组gG321-580蛋白对HSV-2阳性血清抗体有较好的抗原性和特异性.结论 gG321-580蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中成功表达,表达产物表现出良好的反应原性,为发展HSV-2免疫诊断试剂奠定了基础.
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1567例性传播疾病患者单纯疱疹病毒Ⅱ型病毒感染的临床分析
目的 观察性传播疾病(STD)中单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)临床感染情况.方法 对1 567例患有STD的患者进行泌尿生殖道分泌物HSV-ⅡDNA检测.结果 1 567例STD患者中HSV-ⅡDNA阳性为398例占25.40%,其中男性阳性率26.60%(216/812),女性阳性率24.11%(182/755).泌尿生殖道有明显溃疡的427例中HSV-ⅡDNA阳性320例阳性率74.94%,1 140例无溃疡中HSV-ⅡDNA阳性78例,阳性率6.84%.结论 在STD感染患者中HSV-Ⅱ感染较为常见.泌尿生殖道无溃疡的STD患者中仍存在HSV-Ⅱ病毒的感染.荧光PCR技术检测HSV-Ⅱ感染有较好的临床应用价值,值得临床推广.
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细胞ERK信号通路对单纯疱疹病毒Ⅱ型增殖复制的影响
目的 以Raf-MEK-ERK通路关键激酶MEK1(MAPK/extracellular signal-regulated kinasekinase-1)为研究重点,利用MEK1-siRNA(small interfering RNA for MEK1)阻断宿主Raf-MEK-ERK通路,阐述该通路对病毒复制的作用.方法 用HSV-2感染预转染MEK1-siRNA的HEK 293细胞,应用观察细胞病变效应、病毒滴度以及病毒蛋白表达等研究方法,揭示细胞Raf-MEK-ERK通路对HSV-2增殖复制作用的影响.结果 MEK1-siRNA在特异性阻断MEK1表达的同时,能明显抑制HSV-2的复制.结论 体外实验表明,Raf-MEK-ERK通路在HSV-2增殖复制过程中具有十分重要的作用,MEK1-siRNA具有药物开发的潜能.
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大黄提取液体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型作用的实验研究
目的:研究大黄提取液在体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用.方法:用hela细胞做体外培养实验,以不同剂量的大黄提取液作用于病毒复制周期的各个阶段,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变(CPE)、MTT染色细胞保护率(MTT法)作为评价指标,判断药效,对大黄提取液抗HSV-Ⅱ作用进行评价.结果:大黄提取液对hela细胞的增殖无明显作用,且对hela细胞毒性极低,对病毒有直接灭活作用;可干扰病毒向宿主细胞吸附,还可有效抑制病毒复制.结论:大黄提取液在体外对HSV-Ⅱ有显著的抑制和杀伤作用,并且有效抑制病毒复制.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因对人原发性肝细胞癌治疗作用的实验研究
目的研究含单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因(HSV-ⅡTK)对人原发性肝细胞癌SMMC-7721的治疗作用.方法用已构建的真核表达载体pcDNA3/TK,通过阳离子脂质体Lipofectin介导,体外转染人原发性肝细胞癌SMMC-7721.加入GCV,细胞培养.用RT-PCR,光镜,MTT,流式细胞仪等方法检测HSV-ⅡTK在SMMC-7721细胞中的表达及其对该细胞的杀伤作用.结果实验组细胞通过RT-PCR获得与目的基因(HSV-ⅡTK)大小一致(1000 bp)的特异性条带,而对照组细胞则无任何条带出现;MTT法检测显示,实验组的OD值明显低于对照组,且有显著意义(P<0.01);流式细胞仪检测显示,实验组可发现明显的凋亡峰,而对照组则无凋亡峰出现.结论通过阳离子脂质体Lipofectin介导,HSV-ⅡTK在SMMC-7721细胞中能够获得表达,其表达产物结合GCV可明显抑制人原发性肝细胞癌细胞的增殖.
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7种单纯疱疹病毒Ⅱ型IgG抗体检测试剂盒的比较
目的 比较7种单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)特异性IgG抗体检测试剂盒的优劣.方法 对来自体检和性病门诊的生殖器疱疹可疑者的189份血清,同时用3种进口试剂盒(A、B、C)和4种国产试剂盒(D、E、F、G)进行检测.结果 以"扩大金标准"为判断标准,7种检测试剂盒的敏感性:A、B、C分别为94.6%、100%、100%,D、E、F、G分别为98.5%、93.9%、96.9%、30.8%;特异性:A～G分别为98.2%、96.4%、96.4%、9.1%、43.6%、18.2%,100%;受试者工作特性曲线(ROC)下面积:A～G分别为0.964(0.933～0.995)、0.982(0.953～1.011)、0.982(0.953～1.011)、0.529(0.434～0.623)、0.664(0.567～0.761)、0.517(0.416～0.618)、0.654(0.576～0.732).结论 三种进口试剂盒检测结果可信度高,可用于临床实验室的辅助诊断、流行病学调查等.
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疱疹合剂2号治疗生殖器疱疹及对外周血T淋巴细胞亚群、白介素-2的影响
目的 观察疱疹合剂2号抗生殖器疱疹复发的临床疗效及对患者外周血T淋巴细胞亚群、白介素-2(IL-2)的影响.方法 将60例非发病期生殖器疱疹患者随机分为2组.治疗组30例,口服疱疹合剂2号;对照组30例,口服阿昔洛韦片.两组各27例于治疗前后检测外周血T淋巴细胞亚群及IL-2水平.结果 治疗组用药后6个月内复发1次的有7例,复发2次的有3例,20例无复发,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).治疗组于治疗前后T3、T8、T4/T8差异均有显著性(P＜0.01),T4、IL-2差异有显著性(P＜0.05).治疗后两组比较,T3差异有显著性(P＜0.01),T4、T8、T4/T8、IL-2差异有显著性(P＜0.05).结论 疱疹合剂2号抗生殖器疱疹复发的疗效明显优于阿昔洛韦片,且具有调节患者免疫功能的作用.
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新兵人群单纯疱疹病毒Ⅱ型感染流行病学调查
目的:了解新兵人群单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染情况.方法:采用血清流行病学调查方法,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术,对随机抽取某部2002、2004、2006和2008年度入伍新兵360例的超低温保存血清标本进行HSV-2 IgG抗体检测,并对检测结果进行统计分析.结果:仅在2002年和2008年血清标本各检出1份HSV-2抗体阳性,阳性标本均来自于直接从学校入伍的新兵.结论:入伍新兵人群中单纯疱疹病毒Ⅱ型感染率极低,但也应采取加强检疫和健康教育等措施进行预防.
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异叶青兰提取物抗病毒作用及挥发油成分分析
目的:探讨藏药异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抗腺病毒(ADV)、流感甲型病毒A/汉防/359/95 (H3N2)及单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的作用.方法:细胞病变法测定提取物的半数有毒浓度及对病毒的半数效应浓度,以治疗系数(TI)为指标评价药效.采用气相色谱-质谱联用分析挥发油成分.结果:石油醚提取物抗A/汉防/359/95(TI=12.99)、抗单纯疱疹病毒Ⅱ(TI =6.48)活性强.挥发油抗腺病毒(TI=7.77)活性强.挥发油对单纯疱疹病毒Ⅱ型有较强的直接灭活作用(TI=3.1).挥发油主要成分为桉油精(22.18％),桃金娘烯醇(11.28％),顺式松油醇(11.11％)等.结论:异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物具有一定的抗腺病毒、流感甲型病毒A/汉防/359/95 (H3N2)及单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用.
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α27基因特异性siRNA对单纯疱疹病毒Ⅱ型感染宿主细胞的影响
目的：探讨在RNA干扰技术条件上,干扰α27基因表达对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)宿主细胞的影响。方法体外合成四对α27基因特异性siRNA(R1、R2、R3、R4组)和阳性、阴性对照siRNA,用Lipofectamine2000转染Vero细胞后接种HSV-Ⅱ,感染后用MTT比色法分别于12、24、36、48、60、72 h测定细胞的存活情况。结果转染了特异性siRNA的细胞OD值较空白组高,细胞存活情况较好,其中R2和R4组存活情况更好。结论α27基因特异性siRNA对宿主细胞具有保护作用。按照同样设计原则合成的不同序列siRNA,其抑制效果存在明显差异。
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检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型荧光定量PCR方法的建立
目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)DNA的实时荧光定量PCR方法,为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法.方法 依据HSV-2糖蛋白D(gD)基因序列,使用序列比对软件,选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选;以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2 gD作为标准模板,对该检测方法的反应条件进行优化,提高其检测特异性、敏感度和重现性.结果 该检测方法特异性好,检测的低拷贝数可达到2个拷贝,线性范围为2×100～2×108拷贝/反应,是普通PCR敏感度的103倍.该检测方法组间和组内变异系数均低于5％,说明该检测方法具有良好稳定性.结论 本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2 DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点.
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门诊女性生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型感染情况分析
目的 了解女性泌尿生殖道感染者单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的感染情况,为早期诊断及治疗提供依据.方法 应用荧光定量PCR技术对158例女性患者生殖道分泌物进行HSV-Ⅱ-DNA检测,同时以40名健康体检妇女作为对照组.结果 在158例生殖道感染者中有48例HSV-Ⅱ阳性,阳性率为30.4%,明显高于对照组(7.5%);31～40岁年龄组阳性率(46.2%)明显高于其他年龄组(P＜0.05).结论 女性泌尿生殖道感染者HSV-Ⅱ的感染不容忽视,部分无生殖器疱疹症状的患者也能检测到HSV-Ⅱ,对此类患者进行HSV-Ⅱ检测十分必要.
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妇女生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型和人乳头瘤病毒的感染及其相关关系的研究
为探讨妇女生殖道单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes Simples Viru s 2,HSV2)和人乳头瘤病毒(Human Papillamavirus,HPV)的感染及其相关关系,我们应用聚合酶链反应(PCR)对48例患有性病、生殖道感染的妇女和39例正常妇女进行了下生道HSV2、HPV 的检测.HSV2在实验组和对照组妇女中的感染率分别是72.9%和25.6%,两组有极显著性差异(P＜0.01);HPV在实验组和对照组妇女中的感染率分别是53.3%和33.3%,两组无显著性差异(P＞0.05);两组中HSV2、HPV双阳性率分别是45.8%(22/48)和23.1%(9/39),有显著性差异(P＜0.05);在两组共87份标本中,HSV2和HPV双阳性者占31例,阳性率是35.6% .统计学分析表明:HSV2和HPV感染之间有极显著的相关性(X2=24.08,P＜0.01).研究表明:患有生殖系感染和性病妇女其HSV2或HPV和HSV2混和感染的机率显著高于正常妇女,H SV2和HPV的感染具有协同作用.由于这两种病毒均与宫颈癌的发生有关,它们在生殖道中感染的相互作用机理有待于进一步研究.
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IL-18与HSV-2gD模拟抗原表位DNA疫苗的免疫效果观察
目的:研究串联重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6和pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6对机体的免疫效果.NP6为与HSV-2gD模拟抗原P6相似的天然抗原表位序列(Accession Number:E00394).方法:将构建的真核表达质粒pcDNA3.1-IL-18、pcDNA3.1-IL-18-HSV P6和pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔1周.末次免疫后1周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率.结果:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体的产生,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18.可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖.结论:重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,从而为构建更加有效的HSV-2DNA疫苗奠定了良好的基础.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性
目的 在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性.方法 利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达.表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率.结果 重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoR Ⅰ/Not Ⅰ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85％,浓度为40 μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P＜0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P＜0.001).结论 在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础.
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HSV-2LAT ORF1在Vero细胞中的表达特性及其对细胞活性的影响
目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1(ORF1)的表达特点及其对Vero细胞活性的影响.方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF1真核表达载体pEGFP-ORF1,并以转染试剂盒Xfect介导其转染至Vero细胞,通过RT-PCR和绿色荧光蛋白检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析.结果:重组质粒表达的融合蛋白主要集中细胞核,而空质粒表达的绿色荧光蛋白在细胞核和细胞质中分布均匀；重组质粒对Vero细胞没有损伤作用.结论:HSV-2 LAT ORF1影响了绿色荧光蛋白的分布,可降低空质粒对细胞的损伤作用；其作用位点可能主要定位在细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF1在潜伏复发中的功能奠定了实验基础.
