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基于荧光素酶报告基因的CHO细胞(抗)雄激素样物质检测方法的建立
目的建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2,4-DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用.方法通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV-Luc及内对照质粒phRL-SV40瞬时转入CHO细胞,检测报告基因lucferase的表达,给予DHT、FLU后检测该系统的有效性和特异性,并用2,4-DDT、METH等受试物进行验证.结果转染后的CHO细胞对DHT呈明显的剂量-反应关系,1×10-10mol/LDHT可出现明显的兴奋效应,至1×10-7mol/L可达到大反应值,而未转染雄激素受体质粒与DHT无明显反应,FLU可以显著抑制二氢睾酮的激动效应,说明检测系统有效、特异.验证结果表明3×10-7mol/L以上2,4-DDT及3×10-7mol/L以上METH可对雄激素受体活性产生抑制作用,2,4-DDT的抑制作用强于甲氧氯.结论本试验建立的基于报告基因的体外(抗)雄激素检测系统是可行的,2,4-DDT、甲氧氯有明显的抗雄激素活性作用.
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艾烟中的可吸入颗粒物诱发体外微核的实验研究
目的:用体外微核实验检测艾烟中的可吸入颗粒物(moxa smoke condensation,MSC)是否引起染色体或有丝分裂器的损伤产生微核,进而判定艾烟致染色体损伤的遗传毒性.方法:通过四唑盐比色实验得出MSC对中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞染毒24 h的半数抑制率(half maximal inhibitory concentration concentration,IC50)为0.087 mg/mL,将体外培养哺乳动物CHO细胞系,分为溶剂对照组(阴性对照组)、阳性对照组(环磷酰胺作为溶剂)、低、中、高剂量组.低、中、高剂量组设定在艾烟致CHO细胞半数死亡浓度(IC50)上下,分别为1/8、1/4、1/2,即低剂量组(1/8 IC50 MSC)、中剂量组(1/4 IC50 MSC)、高剂量组(1/2 IC50MSC),观察3个剂量组的MSC染毒CHO细胞后染色体或有丝分裂器损伤后产生的微核是否具有剂量效应关系.结果:高、中、低剂量组的MSC所诱发的微核形成率较溶剂对照组增加,并且具有剂量效应关系,实验重复3次,可重复且有统计学意义(均P＜0.05).结论:MSC在高浓度时具有致染色体损伤的毒性,低浓度时毒性消失,遗传毒性也呈浓度依赖,艾烟的量是关键;临床应当注意控制艾烟浓度,把握好艾烟的量,尤其是临床的艾烟浓度安全标准,需进一步研究.
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艾烟中可吸入颗粒诱发染色体畸变效应的实验研究
目的 采用染色体畸变实验检测艾烟中可吸入颗粒物是否影响细胞DNA结构或改变信息的实现,进而判定艾烟的遗传毒性.方法 通过四氮唑盐比色实验得出艾烟冷凝液(MSC)对中国仓鼠卵巢细胞染毒24 h的半数抑制率IC50为0.087 mg/mL,体外培养哺乳动物中国仓鼠卵巢细胞系(CHO),体外代谢活化(S9)及非活化的情况下染毒细胞24 h,随机分为空白组、丝裂霉素C组、1/2 IC50MSC组、1/4 IC5NSC组、1/8 IC50MSC组、空白+S9组、环磷酰胺+S9组、1/2 IC50MSC+S9组、1/4 IC50MSC+S9组、1/8 IC50MSC+S9组.秋水仙胺作用于中期染色体收获细胞,制备染色体标本,观察细胞染色体畸变情况,并进行分析.结果 MSC畸变细胞率和染色体总畸变率由高到低依次为环磷酰胺+S9组＞MSC+S9组≥丝裂霉素C组＞空白+S9组＞MSC组≥空白组.结论 艾烟具有生物活性,高浓度的艾烟表现出一定的细胞毒性.
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血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达
从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)提取细胞总RNA,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法得到VEGF受体Flt-1胞外区前3个IgG样区域cDNA片段(Flt-1n3).将获得的受体基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,得到重组质粒pcDNA3.1/Flt-1n3,通过脂质体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞(CHO),用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆.经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆,细胞测活结果表明,表达产物具有抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的活性.鸡胚测活结果表明,CHO细胞表达的r Flt-1n3能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成.
关键词： 血管内皮细胞生长因子受体 中国仓鼠卵巢细胞 表达 -
过表达VMAT2的CHO细胞可抵抗rotenone和MPP+的毒性作用
目的为研究毒物鱼藤酮(rotenone)和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对野生型及过表达囊泡单胺转运蛋白(VMAT2)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的毒性作用.方法将不同浓度的MPP+、rotenone与野生型(WT-CHO)和过表达VMAT2的CHO细胞(VMAT2-CHO)共培养,通过形态学改变和MTT比色法检测细胞活力来观察毒物的毒性作用.结果VMAT2-CHO细胞活力明显增强,第5～7天VMAT2-CHO数量约为WT-CHO的3倍.0.2～2.0 mmol/L的MPP+(P＜0.05)和0.05～1.0 μmol/L rotenone(P＜0.01)作用72 h,VMAT2-CHO的存活率高于WT-CHO,细胞中毒后的形态改变不如WT-CHO明显.结论过表达VMAT2的CHO细胞对MPP+和rotenone的毒性作用有抵抗.
关键词： 单胺囊泡转运蛋白 1-甲基-4-苯基吡啶离子 鱼藤酮 中国仓鼠卵巢细胞 -
抗菌肽Defensin真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达
目的 构建家蝇幼虫抗菌肽的真核表达载体,并检测它在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的表达情况.方法 以pUCm-T/Defensin为模板,设计带His标签特异引物,扩增C-末端融合6×His标签的Defensin基因的cDNA全长编码区序列,将其克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以阳离子脂质体Lipofect AmineTM 2000转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定转染的阳性克隆细胞,以RT-PCR分析其mRNA的转录情况,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以Western免疫印迹鉴定蛋白质表达情况.结果 构建了pcDNA3.1 (+)-Defensin-His表达质粒,建立了稳定转染的CHO细胞系.RT- PCR从阳性克隆CHO细胞系中扩增出320 bp大小的目的片段,从转录水平证实pcDNA3.1(+)-Defensin-His重组细胞株表达了Defensin基因.Western免疫印迹检测可见相对分子质量为10000的阳性条带,表明Defensin-His在该细胞系中成功表达.结论 成功构建了质粒pcDNA3.1(+)-Defensin-His,并获得了稳定表达的CHO-Defensin细胞株,有利于进一步研究家蝇幼虫抗菌肽Defensin基因的生物学功能.
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二氢叶酸还原酶基因缺陷细胞株在HBsAg表达中的应用
目的利用二氢叶酸还原酶缺陷的中国仓鼠卵巢细胞（CHO-dhfr-）和携带二氢叶酸还原酶基因的质粒载体，建立高效表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的细胞系，以提高HBsAg在哺乳动物细胞中的表达产量。方法 将HBsAg基因插入pCI质粒，以脂质体方法转染CHO\|dhfr-细胞，在氨甲喋呤选择压力下，筛选HBsAg表达阳性细胞克隆。结果 所获28株单克隆化细胞系，18株表达HBsAg，产量高者为4株。结论 通过HBsAg的高效表达证明，二氢叶酸还原酶缺陷细胞株和相应载体是哺乳类动物细胞表达外源基因的有效体系之一。
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空肠弯曲菌蛋白糖基化系统及利用该系统在大肠杆菌中表达糖蛋白的研究进展
蛋白质糖基化是蛋白质翻译后的一种重要加工过程,其种类主要有N-糖基化和O-糖基化.N-糖基化是指寡糖链连接在蛋白的天冬酰胺β-酰胺氮上,O-糖基化是指寡糖链连接在蛋白的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的羟基的氧原子上.自从1976年在古细菌中发现S-层糖蛋白以来,已经在古细菌和细菌中发现70多种糖基化蛋白[1-2],并且大部分属于O-糖蛋白,是细菌鞭毛或纤毛的组成成分[3].人体内超过一半的蛋白质是糖基化蛋白质[4],糖基化蛋白质的糖链在机体的正常生理活动中具有重要功能和作用[5].蛋白质药物的糖基化可以增强蛋白质药物的生物活性、延长其半衰期、增加其溶解性、改善其免疫原性等,目前70%的治疗性蛋白质药物均是糖蛋白[6-7 ].生产糖蛋白的首选宿主是中国仓鼠卵巢细胞,生产效率低,成本高,部分蛋白糖链具有免疫原性;另外,毕赤酵母表达系统和昆虫细胞也可以用来生产糖蛋白,但这两种表达系统生产的糖蛋白的糖链为高甘露糖型或含有杂糖,具有较强的免疫原性.大肠杆菌表达系统是应用广泛的经典表达系统,该系统缺乏真核细胞所特有的蛋白质翻译后的糖基化修饰过程,一直以来该系统只能表达非糖基化蛋白质.然而,近10年来发现空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)中存在糖蛋白,把空肠弯曲菌中存在的蛋白糖基化相关基因转化到大肠杆菌中则能够在大肠杆菌中表达带有糖链的目的蛋白.本文对空肠弯曲菌中存在的糖基化系统和利用该系统在大肠杆菌中表达带有糖链的目的蛋白的研究进展进行综述.
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不同剂次重组乙型肝炎疫苗(中国仓鼠卵巢细胞)加强免疫效果评价
加强免疫是提高保护性抗体阳性率和滴度的有效途径.国内对加强免疫的必要性存在争议.如有的从免疫细胞特异的回忆反应角度进行研究,认为加强免疫似无必要[1];有的从乙肝病毒携带率与免疫后间隔时间相关性角度进行研究,认为有必要进行加强免疫[2-3],以增加免疫效果.结合当前疫苗安全有效、价廉且市场供应充足的实际,为确保避免感染后成为慢性携带者,在抗体下降到保护水平以下接触乙肝病毒后是否能避免感染这一问题尚未明确以前[4-5],本研究选择能诱导较强地体液免疫且其表达的蛋白抗原接近天然HBsAg的HepB(CHO)进行加强免疫研究,比较其免疫效果,旨在为基层采取适宜加强免疫措施提供依据.
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人骨保护素在 CHO 细胞内初步稳定表达
目的：构建人OPG的稳定表达载体，并在DHFR-型CHO细胞内稳定表达。方法用RT-PCR的方法获得人全长OPG的编码基因，并将其克隆入载体pcDNA3.1-DHFR/CT-GFP，鉴定无误后，转染DHFR-型CHO细胞，经MTX筛选获得阳性表达OPG的细胞株。结果成功构建人OPG的稳定表达载体，并获得阳性表达OPG的细胞株。结论全长人OPG基因可以在CHO细胞内成功稳定表达，这为OPG的功能研究及临床应用奠定物质基础。
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用IRES及dhfr构建哺乳动物细胞双表达载体
目的:构建同时表达抗体的重链和轻链的哺乳动物细胞双表达载体.方法:将微小RNA病毒内部核糖体进入位点(IRES),亚克隆到质粒载体pCdhfr1多克隆位点,构建了哺乳动物细胞双表达载体pCdhfr5.结果:pCdhfr5具有两处多克隆位点, 由IRES相连.能同时表达两个外源基因.把绿色荧光蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因分别亚克隆到pCdhfr5的上下游多克隆位点MCS1和MCS2构建了表达质粒pFN, 经脂质体法转染CHO细胞,筛选到同时表达新霉素磷酸转移酶和绿色荧光蛋白的表达株.结论:双表达载体的构建成功为进一步研究表达抗体全分子的CHO细胞株奠定了基础.
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稳定表达人源α2A-肾上腺素受体细胞系的建立
目的：建立稳定表达人源α2A-肾上腺素能受体（α2A-AR）的细胞系。方法将带有潮霉素B（Hygro）抗性的α2A-AR（pcDNA3.1/Hygro-HA-α2A-AR）重组质粒通过脂质体介导转染至已表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的蛋白激酶A催化亚基（PKAcat）的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞（以Hygro 200 mg·L-1进行压力筛选后，采用PKA重分布实验筛选阳性克隆），然后使用实时定量PCR验证α2A-AR受体在转录水平的表达，后以时间分辨荧光共振能量转移免疫实验检测cAMP含量以鉴定受体功能。结果 PKA重分布实验结果表明，CHO-PKAcat-α2A-AR 7号克隆反应性良好；与CHO-PKAcat-EGFP细胞相比，该细胞系α2A-AR mRNA表达水平较高（P<0.01），且多次传代能保持稳定；在α2A-AR激动剂作用后，能显著抑制forskolin引起的cAMP水平升高（P<0.01）。结论成功构建稳定表达α2A-AR的CHO-PKAcat-α2A-AR细胞系，可用于药物筛选及机制研究。
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抗人表皮生长因子受体2人源化单克隆抗体在中国仓鼠卵巢细胞中的表达、纯化及活性测定
目的 筛选得到稳定表达重组人源化抗HER2单克隆抗体(rhHER2-mAb)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)优表达株,采用旋转振荡式培养及小规模放大,测定纯化后抗体蛋白的活性和亲和力.方法 使用一次性旋转振荡生物反应器——Tube-spin对细胞株进行高通量筛选,然后使用摇瓶进行规模放大培养,利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物的纯度,夹心ELISA检测产物的表达量,MTT检测产物的活性.结果 通过比较,确定产量高的#38细胞克隆株,经过规模放大培养得到足量细胞上清液,摇瓶表达量达到( 152±20) mg·L-1.纯化后经检测目的蛋白的相对分子质量约为150×103,纯度在96％以上,与商品化的赫赛汀一致；活性检测和亲和力检测也显示其活性和亲和力与赫赛汀相当.结论 通过细胞株筛选得到高表达细胞株,经旋转振荡式放大培养,成功纯化获得抗体蛋白,与商品化药物性质一致,为大规模旋转振荡培养发酵奠定基础.
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3种中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量检测试剂盒的比较研究
目的 比较市售3种中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量ELISA检测试剂盒(货号:A、B、C)的检测效果.方法 分别使用3种试剂盒检测不同CHO细胞株表达的治疗性单抗原液、提取CHO-K1细胞培养上清蛋白和3种CHO-HCP检测试剂盒自带CHO-HCP标准品,评价3种试剂盒的检测效果.将3种试剂盒的包被板与酶标二抗系列组合后,检测标准品和提取的CHO-K1细胞培养上清蛋白分析产生差异的原因.结果 单抗样品检测中,试剂盒A、B相对于试剂盒C的检测回收率约为1.89％和15.34％;CHO-K1细胞培养上清蛋白样品检测中,试剂盒A、B、C的回收率分别为:4.05％、21.52％和35.98％;试剂盒标准品互测中,3种试剂盒检测自身标准品的回收率均在(100±15)％内;试剂盒A检标准品B、C的平均回收率分别为1.28％和7.99％.试剂盒B检测标准品A、C的平均回收率分别为55.76％和25.08％.试剂盒C检测标准品A、B的平均回收率分别为266.65％和73.31％;通过包被板和酶标二抗的系列组合的检测结果推导:微孔板包被抗体对CHO-HCP的覆盖能力方面:A＞C＞B;二抗对HCP的覆盖能力方面:B＞C＞A.结论 该企业生产的3种CHO-HCP检测试剂盒中检测效率由高到低依次为C＞B＞A.
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微囊藻毒素-LR对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响
目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的凋亡作用.方法 调整CHO细胞密度约为1×105/ml,分别用终浓度为0(对照)、1、5、10、15 μg/ml的MC-LR染毒24 h后,采用噻唑兰(MTT),法测细胞活性,计算半致死效应浓度(EC50).分别用终浓度为0(对照)、2.5 μg/ml(1/4 EC50)、5μg/ml(1/2 EC50)、10 μg/ml(EC50)的MC-LR染毒24 h后,测定活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的活力和细胞凋亡率.结果 与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均较高,线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(P＜0.05)；且随着MC-LR染毒浓度的升高,CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均呈上升趋势,线粒体膜电位呈下降趋势.结论 MC-LR暴露可诱导体外培养的CHO细胞发生凋亡.
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N-乙酰半胱氨酸和微囊藻毒素-LR联合暴露对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响
目的 研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)和微囊藻毒素-LR(MC-LR)联合暴露对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞凋亡的影响.方法 取对数生长期细胞,分别加入0(对照)、1、5、10、20、30、40、50、60、80 mmol/L的NAC溶液以及终浓度为0、1、5 mmol/L的NAC溶液+终浓度为0、2.5、5、10 μg/ml的MC-LR溶液培养24h.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测细胞活性,采用2,7-二氯荧光乙酰乙酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化,采用四氯四乙基苯并咪唑基羰花青碘化物(JC-1)荧光探针法检测线粒体膜电位的变化,采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡率.结果 1、5 mmol/L NAC单独作用对细胞活性无明显抑制作用,且细胞存活率均在80％以上;NAC与MC-LR同时作用时,细胞活性增加,ROS含量减少,线粒体膜电位升高,凋亡率减少.结论 MC-LR可诱导CHO细胞产生大量ROS从而引起细胞凋亡,抗氧化剂NAC可拮抗MC-LR诱导ROS生成导致的细胞凋亡.
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微囊藻毒素-LR对中国仓鼠卵巢细胞中过氧化氢酶活力和丙二醛含量的影响
目的 通过检测中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中过氧化氨酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量的变化研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对CHO细胞的氧化应激作用.方法 调整CHO细胞密度约为1×105/ml,分别用终浓度为0(对照)、1、5、10、15 μg/ml的MC-LR染毒24h后,采用MTT法测细胞活性,计算半致死效应浓度(EC50).调整细胞密度约为1×1 06/ml,分别用终浓度为0(对照)、2.5(1/4EC50)、5(1/2EC50)、10 μg/ml(EC50)的MC-LR染毒24 h后,测定细胞中CAT活力和MDA含量.结果 随着MC-LR染毒浓度的升高,CHO细胞活性呈下降趋势.与对照组相比,1μg/ml染毒组细胞活性降低,但差异无统计学意义；5、10、15 μg/ml MC-LR染毒组CHO细胞活性较低,差异均有统计学意义(P＜0.05),且10 μg/ml MCLR染毒组细胞活性为53.8％,接近50％,故EC5o约为10 μg/ml.与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组CHO细胞内CAT活力较低,MDA含量较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MC-LR染毒可使CHO细胞中CAT活力降低,MDA含量升高,提示其对CHO细胞有氧化损伤作用.
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MEHP对CHO细胞凋亡基因和癌基因表达水平的影响
目的 探讨邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)的细胞毒性和对凋亡基因和癌基因表达水平的影响.方法 采用4个不同剂量的MEHP对CHO细胞染毒24h后,采用荧光定量PCR检测4个凋亡基因Bcl-2、caspase-3、caspase-9,Bax及癌基因p53表达水平的改变.结果 0.5 mmol/L MEHP染毒时caspase-3、caspase-9、Bax表达水平较对照组显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);凋亡基因Bcl-2表达水平在4个剂量组均比对照组显著降低(P＜0.05或P＜0.01),在0.25与0.5 mmol/L MEHP作用下,Bax与Bcl-2比值显著降低(P＜0.05或P＜0.01),p53在0.25和0.5 mmol/L MEHP浓度下表达下降.结论 MEHP可通过激活线粒体caspase凋亡信号通路引起CHO细胞凋亡,同时可引起抑癌基因表达水平下降.
关键词： 塑化剂 邻苯二甲酸单乙基己基酯 中国仓鼠卵巢细胞 凋亡基因 癌基因 -
流式细胞仪分选非染色S期CHO细胞有助于提高聚乙烯亚胺的转染效率
目的 利用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分选获得非染色、同步化的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞,观察聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)在不同周期CHO细胞的瞬时转染和稳定转染效率.方法 悬浮培养CHO DG44细胞,应用流式细胞仪的光学参数-前向角和侧向角,在细胞主群中设置12个门,然后进行分选.分选出的各门内细胞经碘化丙啶(P1)染色进行细胞周期检测.以PEI为载体分别向含G0/G1、S、G2/M比例较高的细胞亚群和未经分选的细胞转染含绿荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)质粒,利用流式细胞仪检测瞬时转染、稳定转染效率.结果 细胞DNA含量与侧向角相关,各细胞哑群G0/G1期细胞所占比例总体上随着侧向角的增大而减小,G2/M细胞所占比例随着侧向角的增大而增多.低侧向角的细胞业群P2内G0/G1期细胞比例可达80.49%,中侧向角的细胞亚群P7内s期细胞比例可达61.14%,高侧向角的细胞亚群P13内G2/M期细胞比例町达49.88%.转染48h,GFP阳性细胞在G2/M期细胞比例较高的细胞亚群所占比例高,但瞬时转染效率,S期细胞比例较高的细胞群大于G2/M期细胞比例较高的细胞群.转染2w,稳定转染效率仍为S期细胞比例较高的细胞亚群大于其它细胞亚群及未分选的混合细胞群.结论 应用流式细胞仪的光学参数可以有效分选非诱导、无染色分别含有较高比例各周期时相的CHO细胞;PEI的转染效率与转染时细胞所处的细胞周期时相相关,且S期细胞亚群的瞬时和稳定转染效率均高于其它细胞周期亚群.
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原生动物△4-脂肪酸去饱和酶基因在卵巢细胞中的表达
目的 探讨优化、合成原生动物△4-脂肪酸去饱和酶基因,并构建其哺乳动物表达载体,将基因导入卵巢细胞(CHO)中进行初步表达.方法 目的基因经优化后人工合成全长编码区,利用双酶切连接法将其连入哺乳动物表达载体pcDNA3.1(-).采用脂质体法稳定转染CHO细胞后应用PCR和RT-PCR法检测△4-脂肪酸去饱和酶基因的整合和表达情况.结果 成功构建了△4-脂肪酸去饱和酶基因的表达载体pcDNA3.1-D4,并整合进CHO细胞基因组,实现了该基因在CHO中的表达.结论 原生动物△4-脂肪酸去饱和酶基因哺乳动物表达载体的成功构建以及△4-脂肪酸去饱和酶基因表达后的分析为下一步深入研究△4-脂肪酸去饱和酶基因的功能和转基因动物的制作打下了基础.
关键词： D4基因 表达载体 二十二碳六烯酸(DHA) 中国仓鼠卵巢细胞
