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b型流行性感冒嗜血杆菌疫苗的现状及展望
b型流行性感冒嗜血杆菌(Haemophilus Influenzae Type B,Hib)感染,是全球性的公共卫生问题,主要引起儿童肺炎和脑膜炎,严重危害儿童的健康.Hib疫苗的诞生为Hib感染性疾病的预防开辟了一条新的道路.现对Hib结合疫苗的多聚核糖基核糖醇磷酸盐糖链、载体蛋白的种类和特点、不同Hib结合疫苗的免疫原性和安全性,以及联合疫苗的发展作了综述,以期为预防接种和临床操作提供参考.
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粉尘螨两种溶性抗原糖蛋白的组分与糖链研究
目的研究水溶性和尿素溶性粉尘螨糖蛋白的组分及结合糖链的构成. 方法用粉尘螨脱脂干粉提取水溶性抗原(Der fA)和尿素溶性抗原(Der fU),经SDS-PAGE,Western blot,免疫染色,胶体金染色和糖定性检测两种抗原糖蛋白的组分,并用9种HRP-植物血凝素进行结合糖链鉴定. 结果 Der fA显示4条蛋白带,分别为18 ku、30 ku、50 ku和58 ku,Der fU显示2条蛋白带(46 ku、58 ku),其中58 ku糖蛋白检测阳性.Der fA存在α-甘露糖(α-Man)、N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAC)、α-葡萄糖(α-Glc),不存在寡糖(Oligosaccharide)、岩藻糖(α-Fuc)、β-半乳糖(β-Gal)、β-半乳糖-乙酰氨基半乳糖(β-Gal-GalNAC)及唾液酸(AS);Der fU只存在α-甘露糖,不存在其它7种糖链和唾液酸. 结论α-甘露糖是粉尘螨优势糖蛋白,其次是N-乙酰葡萄糖胺和α-葡萄糖.
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人防御素研究进展
自然界中存在一类具有抗菌作用的多肽,称为抗菌肽(antibiotic peptide).防御素(defensin)就是其中一类,人防御素(human denfensin,HD)是一类被研究的广泛、不含糖链的碱性阳离子多肽,其主要存在于血液、肠道及表皮细胞中,具有广谱高效的杀菌作用和独特的作用机制,不易使微生物产生抗药性.
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空肠弯曲菌蛋白糖基化系统及利用该系统在大肠杆菌中表达糖蛋白的研究进展
蛋白质糖基化是蛋白质翻译后的一种重要加工过程,其种类主要有N-糖基化和O-糖基化.N-糖基化是指寡糖链连接在蛋白的天冬酰胺β-酰胺氮上,O-糖基化是指寡糖链连接在蛋白的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的羟基的氧原子上.自从1976年在古细菌中发现S-层糖蛋白以来,已经在古细菌和细菌中发现70多种糖基化蛋白[1-2],并且大部分属于O-糖蛋白,是细菌鞭毛或纤毛的组成成分[3].人体内超过一半的蛋白质是糖基化蛋白质[4],糖基化蛋白质的糖链在机体的正常生理活动中具有重要功能和作用[5].蛋白质药物的糖基化可以增强蛋白质药物的生物活性、延长其半衰期、增加其溶解性、改善其免疫原性等,目前70%的治疗性蛋白质药物均是糖蛋白[6-7 ].生产糖蛋白的首选宿主是中国仓鼠卵巢细胞,生产效率低,成本高,部分蛋白糖链具有免疫原性;另外,毕赤酵母表达系统和昆虫细胞也可以用来生产糖蛋白,但这两种表达系统生产的糖蛋白的糖链为高甘露糖型或含有杂糖,具有较强的免疫原性.大肠杆菌表达系统是应用广泛的经典表达系统,该系统缺乏真核细胞所特有的蛋白质翻译后的糖基化修饰过程,一直以来该系统只能表达非糖基化蛋白质.然而,近10年来发现空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)中存在糖蛋白,把空肠弯曲菌中存在的蛋白糖基化相关基因转化到大肠杆菌中则能够在大肠杆菌中表达带有糖链的目的蛋白.本文对空肠弯曲菌中存在的糖基化系统和利用该系统在大肠杆菌中表达带有糖链的目的蛋白的研究进展进行综述.
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C型凝集素糖基识别结构域的结构功能研究进展
蛋白质与蛋白质糖链的相互作用在固有免疫和适应免疫中发挥重要作用,涉及病原微生物的识别和免疫细胞之间的相互作用,参与这种作用的分子称为凝集素分子(lectins),其中依赖钙离子的(C-type)凝集素家族(lectin family)为其主要成员.
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卵巢上皮癌患者ABO血型抗原表达异常与血清糖链蛋白水平的关系
ABO血型抗原是在红细胞、内皮细胞、上皮细胞表面糖蛋白或糖脂类蛋白上发现的复杂的碳水化合物结构.A、B血型抗原的决定簇,糖蛋白和糖脂上的寡糖在ABO基因编码的糖基转移酶作用下,将特异性糖基转移到一种前体物质(H)产生A和B抗原.
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胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白成核活性及糖链结构的比较
目的 比较胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白促成核活性,并分析其糖链结构特点.方法 进行胆固醇结晶生长试验,检测胆石症病人和正常人相对分子质量为33 500的泡蛋白成核时间,并计算其促成核活性.采用HRP凝集素探针介导的Western-Blot印迹法分析不同来源泡蛋白糖链的结构特点.结果 胆石症病人来源的33 500泡蛋白具有明显的促成核活性,其平均成核时间为(3.75±0.66)d,成核活性为0.303±0.075;而正常人来源者则仅具较弱的促成核活性,平均成核时间为(8.38±0.86)d,成核活性为0.677±0.086,两者比较,差异显著(P＜0.05).胆石症病人来源的33 500泡蛋白DSA(+)、ConA(-),属于复杂型多天线聚糖;而正常人来源者为ConA(+)、DSA(-)的二天线糖链.结论 胆石症病人来源的33 500泡蛋白较正常人来源者具有更强的促成核活性,两者糖链结构特点亦有明显不同,提示泡蛋白促成核活性的改变可能由于其糖链结构特点的变化引起.
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胆汁泡蛋白促成核作用及其主体活性成分的分析
目的分析33.5×103泡蛋白促成核活性以及多肽、糖链改变对其活性的影响. 方法制备人工模拟胆汁,在偏光显微镜下观察结晶成核生长过程,计算成核活性;酶法水解蛋白多肽与糖链结构,通过结晶生长试验检测33.5 ×103泡蛋白促结晶生长作用以及糖链水解、多肽降解产物的活性改变. 结果 33.5 ×103泡蛋白具有强促成核活性,成核活性强达0.310,在不同模拟胆汁体系中,成核活性基本相同;其结晶生长试验活性指数It、Ig、Ic分别为0.57、1.52及1.63(P<0.05).糖苷酶切、肽链酶解后其成核活性均几乎丧失. 结论 33.5×103泡蛋白可能参与成石过程,其中多肽、糖链调节其成核活性.
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牛胎球蛋白研究进展
牛胎球蛋白是胎牛或新生牛血清中的一种主要蛋白,它是一种α糖蛋白.本文主要介绍了牛胎球蛋白糖链的分析方法,以及牛胎球蛋白的制备方法、活性、应用和结构.牛胎球蛋白是一种典型糖蛋白,对其质量分析方法进行研究可为糖蛋白类药物的质量控制提供参考.
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新型癌抗原125化学发光免疫试剂盒的制备
目的 制备新型癌抗原125(CA125)化学发光免疫试剂盒,并进行验证.方法 用1株针对CA125蛋白特异性位点的单克隆抗体作为包被抗体,1株针对CAl25分子糖链的碱性磷酸酶(ALP)标记单抗和另1株针对蛋白特异性位点的ALP标记单抗分别作为酶标抗体,采用双抗体夹心法,金刚烷增敏化学发光体系作为酶底物制备试剂盒,检测CA125,并对试剂盒进行验证.结果 新型CA125试剂盒检测灵敏度达0.1 U/ml,测定范围在0.1～430 U/ml之间,与传统CA125试剂盒一致;与CA199、CA153和CA50糖蛋白无交叉反应;精密性和准确性良好.与传统CA125试剂盒比较,检测结果有显著性差异,特别是在卵巢癌标本检测方面,糖链单抗酶标抗体制备的试剂盒与普通抗体酶标抗体制备的试剂盒检测结果的比值与其他标本两者的比值之间差异具有统计学意义.结论 已制备了新型CA125化学发光免疫试剂盒,其与传统试剂盒检测标本结果的比值更适用于对卵巢癌进行特异性诊断.
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细胞膜表面糖链结构与肿瘤转移的关系
连接在天冬酰胺上的N-糖链,连接在丝氨酸和苏氨酸上的O-糖链,连接在丝氨酸上的糖胺聚糖,连接在脂类物质上的糖脂等糖基化修饰在真核细胞表面普遍存在,并调节了细胞的各种功能,它们不仅参与生命活动中正常的生理生化活动,而且于疾病的发生发展密不可分.肿瘤细胞表面糖基异常化,如糖链在表达水平上的差异以及特殊糖链结构的出现,均与肿瘤细胞的侵袭和转移有密切关系.本综述主要介绍了肿瘤细胞糖基化的改变:一些主要的糖基化结构如β1,6分支和唾液酸的表达的增加会使某些肿瘤细胞的迁移能力增强.同时对引起这种变化的作用机制进行了介绍,提出一些潜在的抗肿瘤研究靶点,为肿瘤糖生物学的深入研究提供参考.
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α1-酸性糖蛋白糖链检测对慢乙肝相关肝硬化的早期诊断及其临床应用
为探讨α1-酸性糖蛋白(AGP)糖链改变对乙型肝炎相关肝硬化的诊断与临床应用价值,我们研究了239例慢性乙型肝炎及乙型肝炎肝硬化患者,所有患者进行肝功能、血常规、B超、FibroScan等检查,同时测定血清α1-酸性糖蛋白(AGP)特定糖链改变指标LecT-Hepa,分析其对乙肝肝硬化的诊断价值.结果显示LecT-Hepa与FibroScan值呈正相关(r=0.556,P＜0.001).AGP值随慢性乙型肝炎和肝纤维化的进展而升高,在ALT正常组和升高组中分布无明显差别(P=0.160),研究结果显示LecT-Hepa不受肝脏炎症程度的影响,是比较可靠的早期评估慢性乙型肝炎肝硬化的无创性标志物,具有较好的临床应用价值.
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胆管癌胆管胆汁中糖蛋白糖链结构变化及其酶学机制
目的:研究胆管癌胆汁中糖蛋白糖链结构的变化及其酶学机制,探讨胆汁中糖蛋白成份及其糖链结构的改变在良恶性胆道病变中的鉴别诊断价值.方法:运用各种生化技术将一组恶性胆道病变(胆管癌27例、胆囊癌9例、壶腹癌5例)和20例良性胆道病变所致梗阻性黄疸病人胆管胆汁中的蛋白分离出来,进行糖蛋白定性.采用制备好的HRP标记凝集素探针(DSA-HRP、WGA-HRP、LCA-HRP、ConA-HRP)分别对良恶性胆管胆汁中的糖蛋白的糖链结构进行检测和分析.将已分离、纯化和鉴定好的GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的适受体底物与上述胆管癌、胆囊癌组织及良性胆管组织的酶液进行反应,再以HPLC测定组织中GnT-Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的活力.结果:良恶性胆道病变的胆汁中糖蛋白的糖链结构存在明显差异,胆管癌胆汁中糖蛋白的糖链结构的变化主要表现为天线数和核心岩藻糖的明显增多,还可能伴有平分型GlcNAc的增多.GnT-Ⅴ、Ⅳ、Ⅲ的活力在胆管癌和胆囊癌癌组织中明显高于良性对照组,尤以GnT-Ⅴ、Ⅲ活力增高更明显.结论:胆管癌胆汁中的糖蛋白及其糖链结构的变化可能对胆管癌的定性诊断有一定价值.胆管癌组织中糖基转移酶活力的改变是胆汁中糖蛋白糖链结构变化的酶学机制.
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凝集素染色分析胆汁成核活性蛋白的研究
目的探讨促成核蛋白中糖链的结构与类型及其在胆石形成中的作用.方法凝集素探针介导的点印迹法分析相对分子质量为33 500的泡蛋白糖链组成与结构、筛选出强结合凝集素,并借助透射电镜观察泡蛋白参与模拟胆汁泡聚集、融合的微观过程.通过结晶生长试验检测33 500泡蛋白及其脱糖基产物的促成核活性.结果33 500泡蛋白糖链为DSA强结合、ConA(-),属复杂型多天线聚糖.HRP-DSA标记泡蛋白糖链可直接反映泡蛋白促胆汁泡聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的动态过程.33 500泡蛋白具有明显的促成核活性,其成核时间指数、结晶生长速度指数及结晶终浓度指数分别为0.57,1.52及1.63(P<0.05),脱糖基后其成核活性几乎完全丧失.结论糖链影响33 500泡蛋白促成核活性,提示其可能参与成核效应蛋白的致石作用过程.
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糖链对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响
应用以大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)为配基的亲和色谱从赤子爱胜蚓中分离了蚯蚓纤溶酶,亲和介质Sepharose-4B对蚯蚓纤溶酶的吸附量为0.04 ms/g,以糖苷酶A去除固定在SBTI上的蚯蚓纤溶酶的糖链.辣根过氧化物酶标记的刀豆凝集素(ConA-HRP)亲和印迹和Schiffs染色结果表明.蚯蚓纤溶酶的糖链已基本去除,去除糖链后蚯蚓纤溶酶的活性降低约30%.
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促成核泡相糖蛋白的分离、纯化及理化性质研究
目的提纯胆汁泡相糖蛋白并研究其理化性质.方法应用超速离心法结合高效液相层析(HPLC)分离纯化胆汁泡相糖蛋白,体外观察成核活性,并检测泡相糖蛋白的相对分子质量和化学组成.结果胆汁泡相糖蛋白Mr约为33 500,具有较强的促成核功能,成核活性达0.31.泡相糖蛋白由多肽和寡糖组成,糖-肽键为N-连接方式,其中多肽Mr约为21000,含153个氨基酸,包括97个极性氨基酸和56个非极性氨基酸.糖链约占总蛋白含量的37.3%,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖.肽链N-末端氨基酸序列为H2N-天冬-天冬酰胺-丝-谷氨酰胺-组-精-酪-缬-苯丙-异亮氨酸.结论胆汁泡相糖蛋白是一种新的促成核活性因子,在胆固醇性结石的早期发生阶段可能起重要作用.
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胆管癌胆汁糖蛋白及其糖链结构的初步研究
目的寻找对胆管癌具有诊断价值的特异性标志物。方法应用SDS?PAGE分析41例恶性胆道病变(胆管癌27例、胆囊癌9例、壶腹癌5例)和20例良性胆道病变病人胆管胆汁中蛋白成分的差异。应用糖蛋白定性试验分析差异蛋白是否为糖蛋白。采用制备好的HRP标记凝集素探针(DSA-HRP、WGA-HRP、LCA-HRP、ConA-HRP)对分离出的差异糖蛋白的糖链结构进行初步分析。结果胆管癌胆汁中存在4种差异较明显的蛋白，相对分子质量分别为：75×103、63×103、52×103、27×103。前3种为糖蛋白，后一种为非糖蛋白。胆管癌胆汁中分离出的3种差异糖蛋白中糖链结构的变化，主要表现为天线数和核心岩藻糖的明显增多，还可能伴有平分型GlcNAc增多。结论胆汁中某些糖蛋白及其糖链结构的变化可能对鉴别胆道良恶性病变有一定价值。
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胆宁片对胆汁33.5 kDa泡蛋白糖链结构的影响
目的 探讨胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白糖链结构的影响.方法 按随机序贯原则将胆石症患者分成治疗组(10例)和对照组(10例),治疗组术后第3天口服胆宁片治疗,对照组术后则不服用.取手术当天(外参对照组)及术后第3、10天的T管胆汁,通过蔓陀螺凝集素探针(DSA)介导的Western印迹法分析两组患者胆汁中33.5kDa泡蛋白糖链天线数目的变化情况.结果 治疗组术后3d的胆汁33.5kDa泡蛋白糖链Western印迹染色条带亮度降低;治疗组术后10 d与外参对照组的33.5kDa泡蛋白糖链条带DSA结合率糖链显著下降(P＜0.05).结论 33.5kDa泡蛋白糖链天线数目变化的时间(用药后7 d)要早于文献报道的变化时间(14 d),进一步证实了33.5kDa泡蛋白糖链数目的增加导致泡蛋白含量及促成核活性改变的推测.
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血清碱性磷酸酶红腰豆凝集素结合率测定在肝癌诊断中的意义
目的 观察血清碱性磷酸酶L型红腰豆凝集素(L-PHA)结合率测定在肝癌诊断中的意义.方法 采用凝集素亲和层析法测定50例正常人、103例原发性肝癌、22例肝硬化、36例慢性肝炎、18例急性肝炎和13例消化道肿瘤患者的血清碱性磷酸酶L-PHA结合率.结果 原发性肝癌患者血清碱性磷酸酶L-PHA结合率(16.01±5.42)%明显高于正常对照组(7.50±2.53)%(P<0.01),且与肿瘤大小、AFP水平呈显著性正相关(P<0.01).肝硬化、慢性肝炎和消化道肿瘤组轻度增高,而急性肝炎组未见显著性改变.结论血清碱性磷酸酶L-PHA结合率测定有助于原发性肝癌的实验诊断.
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凝集素亲和沉降法检测碱性磷酸酶糖链结构
目的建立一种简便的糖蛋白糖链分析方法--凝集素亲和沉降法. 方法用凝集素亲和沉降法分别检测血清碱性磷酸酶的L-PHA、LCA和DSA 凝集素结合率.结果批内CV值分别为4.1%、2.3%和3.4%,批间C V值分别为5.7%、3.8%和4.3%,与凝集素亲和层析法测定结果的相关系数分别为0.985 、0.980和0.978.并用此法对30例健康者和57例不同肝病患者血清碱性磷酸酶L-PHA、LC A和DSA凝集素结合率进行了测定.结论表明凝集素亲和沉降法简便、快速、可成批检测,适合临床实验室使用.
