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2.125大黄素收缩大鼠结肠平滑肌细胞信号机制研究
目的观测大黄素对结肠平滑肌细胞收缩、胞浆钙离子浓度和蛋白激酶Cα的影响,探讨大黄素发挥作用的细胞内信号转导机制.方法取Wistar大鼠远端结肠,采用含0.1%Ⅱ型胶原酶、0.01%大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液消化,收集分离的细胞供实验用.
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大豆胰蛋白酶抑制剂对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究
大豆胰蛋白酶抑制剂(Sovbean trypsin inhibitor,SBTI)具有多种药理活性,包括抗炎、抗病毒、抗肿瘤等.对结肠癌、前列腺癌、乳腺癌的研究已经证实大豆胰蛋白酶抑制剂有明显的抗肿瘤作用[1].但是目前关于大豆胰蛋白酶抑制剂对子宫内膜癌的作用却少有报道.我们于2006年5～12月通过细胞学研究发现大豆胰蛋白酶抑制剂对人子宫内膜癌细胞增殖有着明显的抑制作用,报告如下.
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四氧嘧啶型糖尿病模型小鼠糖耐量和肝糖原与大豆胰蛋白酶抑制剂的干预
背景:研究提示大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor,SBTI)对治疗糖尿病,调节胰岛素失调可能有一定效果.目的:观察SBTI 对四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖、糖耐量及肝糖原的影响.方法:采用腹腔注射四氧嘧啶方法制备小鼠糖尿病模型,将造模成功的32 只小鼠随机等分为4 组,另取正常8 只小鼠作为对照组.造模后,SBTI-L、SBTI-H 组每日分别灌胃0.27,0.80 mg/kg SBTI 溶液,格列本脲组每日灌胃优降糖0.16 g/kg,模型组和对照组每日灌胃生理盐水,持续给药2 周.给药第0,7,14 天,采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠空腹血糖和糖耐量,改良蒽酮法测定小鼠肝糖原含量.结果与结论:与模型组比较,格列本脲组、SBTI-L 组、SBTI-H 组血糖明显下降(P < 0.05),糖耐量升幅明显减小(P < 0.05),肝糖原含量明显增加(P < 0.05),且SBTI-L 组、SBTI-H 组较格列本脲组起效快,作用时间长,以SBTI-H 组效果明显.表明SBTI 有明显的降血糖、改善糖耐量、提高肝糖原含量的作用.
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大豆胰蛋白酶抑制剂对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响
目的 探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean trypsin inhibitor,SBTI)对人宫颈癌细胞(hela)体外增殖的影响.方法 选用hela细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测SBTI对细胞增殖的影响.结果 在药物浓度为0.50～10.00 g/L浓度时,随着药物浓度的增加,随着作用时间的增加,SBTI对细胞增殖的抑制率明显增强;在光镜下可以看到细胞凋亡的特征形态.结论 SBTI对hela细胞的增殖有明显的抑制作用,呈现量效,时效关系.
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糖链对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响
应用以大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)为配基的亲和色谱从赤子爱胜蚓中分离了蚯蚓纤溶酶,亲和介质Sepharose-4B对蚯蚓纤溶酶的吸附量为0.04 ms/g,以糖苷酶A去除固定在SBTI上的蚯蚓纤溶酶的糖链.辣根过氧化物酶标记的刀豆凝集素(ConA-HRP)亲和印迹和Schiffs染色结果表明.蚯蚓纤溶酶的糖链已基本去除,去除糖链后蚯蚓纤溶酶的活性降低约30%.
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急性肺损伤大鼠体内明胶酶的活性变化及大豆胰蛋白酶抑制剂的干预效应
目的 探讨急性肺损伤大鼠体内基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,MMP-9)活性的变化以及大豆胰蛋白酶抑制剂(soybean trypsin protease inhibitor,SBTI)的干预效应.方法 90只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=30)、内毒素组(LPS组,n=30)、大豆胰蛋白酶抑制剂组(SBTI组,n=30).向LPS和STBI组大鼠气管内一次性注入0.3 ml含LPS(6 mg·kg-1)的生理盐水复制ALI模型, 假手术组大鼠则在气管内一次性注入等量生理盐水.SBTI组于造模前1天腹腔注射给予100 mg·kg-1·d-1SBTI(溶于0.5 ml生理盐水),假手术组和LPS组大鼠腹腔注射等量的生理盐水,3组动物同步于气管内LPS灌注后d 1、d 3、d 7分别随机处死10只.收集肺泡灌洗液,冰浴匀浆肺组织制备匀浆液,-80℃冻存.Bradford法测定血浆蛋白含量和肺泡灌洗液中蛋白含量,计算肺通透指数;酶谱法测肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液上清中MMP-2、MMP-9酶活力及免疫组织化学方法检测肺组织MMP-2、MMP-9蛋白表达情况;并进行肺组织形态学观察.结果 酶谱法显示:与LPS组相比,SBTI组大鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液中MMP-2、MMP-9活性明显下降,在d 7活性变化明显,但MMP-9变化较MMP-2更明显.免疫组化显示MMP-2、MMP-9在LPS组肺组织细胞高表达.SBTI组大鼠肺组织MMP-2、MMP-9表达明显减弱.肺组织病理提示SBTI治疗组肺损伤病变局限且程度较轻,肺泡内渗出明显小于LPS组,PMN和红细胞渗出较少.结论 MMP-2、MMP-9在LPS诱导大鼠急性肺损伤中发挥重要的作用,SBTI通过抑制MMPs的分泌及激活,降低基底膜的降解,减轻肺水肿及炎症反应,发挥肺保护的作用.
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大豆胰蛋白酶抑制剂对大鼠胰岛分离纯化的影响
目的 探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)在大鼠胰岛分离纯化中对胰岛产量及功能的影响.方法 按胶原酶中是否加入STI将大鼠分为实验组和对照组,实验组在胶原酶消化液中按2.0 mg/ml加入STI,对照组不添加STI.2组均运用胶原酶原位灌注大鼠胰腺的方法来分离胰岛,使用Ficoll-400用非连续梯度离心法纯化胰岛,将纯化前、后获得的胰岛进行计数,并对纯化后的胰岛进行形态、功能检查.同时进行大鼠同种异体胰岛移植观察其体内功能.结果 实验组和对照组在消化后纯化前所得胰岛数量无明显差别[(624±38.2) IEQ vs (586±37.7) IEQ, P＞0.05]; 在纯化后实验组与对照组所得胰岛数量[(408±28.3) IEQ vs (189±27.1) IEQ,P＜0.05]和纯度[(93±2.4)% vs (75±2.1)%, P＜0.05]差异有统计学意义.实验组与对照组终所得胰岛的体外功能差异无统计学意义(P>0.05),体内功能实验结果差异亦无统计学意义(P>0.05).结论 使用在胶原酶中加入STI的消化液原位灌注大鼠胰腺,可以明显提高大鼠胰岛的终产量和纯度,但对胰岛的功能无明显影响.
