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2.3前列腺素E2合酶和环氧合酶-2与反流性食管炎的关系研究
目的检测反流性食管炎组织中mPGES和COX-2的表达,探讨二者在食管炎组织中的作用.方法39例经临床和内镜确诊的反流性食管炎患者病变处活检组织及20例正常对照组的食管活检组织,应用鼠抗人COX-2单克隆抗体及兔抗人mPGES多克隆抗体进行免疫组化染色,采用北航计算机图像分析系统作半定量分析.
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脑星形细胞肿瘤中PTEN、血管内皮细胞生长因子表达与微血管密度
一、材料和方法1.材料:人星形细胞肿瘤标本43例(患者中男28,女15)取自南通医学院附属医院病理科1987~2000年存档的手术标本.患者年龄14~69岁,平均年龄40.4岁,按WHO胶质瘤分级标准,Ⅰ级3例(均为毛细胞型),Ⅱ级18例(原浆型14例,纤维型4例),Ⅲ级12例(肥胖型3例,间变型9例),Ⅳ级10例(为胶质母细胞瘤),均经病理诊断证实为星形细胞肿瘤.即用型兔抗人PTEN、第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)多抗和鼠抗人血管内皮细胞生长因子(VEGF)单抗,EDTA抗原修复液及SABC试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司.
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酶联免疫法测定脂蛋白脂酶的建立与应用
脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)是参与血浆脂蛋白代谢的一个关键酶,LPL基因突变,导致LPL缺乏或活性降低,均可表现出不同程度的脂蛋白代谢紊乱,动脉壁上的LPL与动脉粥样硬化的发生发展有一定的相关性[1].LPL在体内分布广泛,研究不同组织细胞中LPL的表达有助于探索LPL生理功能及致病机理.然而LPL含量较低,难以用一般的化学法检测.Kimura等[2]曾用抗LPL的单克隆抗体建立了酶联免疫吸附试验检测LPL,但未广泛应用.我国在应用免疫学方法测定LPL方面也未见有报道.为探寻一种简便、快速、灵敏的检测LPL的方法,制备了兔抗人和鸡抗人LPL多克隆抗体,拟建立ELISA双抗夹心法测定LPL的方法.
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青蒿琥酯诱导胃癌细胞发生胀亡及其机制研究
众多研究报道青蒿素及其衍生物具有抗多种肿瘤细胞的作用,并且还具有毒性低,不存在交叉耐药,可以逆转肿瘤细胞的多药耐药等优势[1].本研究为了阐明青蒿琥酯诱导胃癌细胞SGC-7901发生胀亡并且探讨其机制,为临床胃癌的治疗提供新的调控靶点.材料与方法一、材料人胃腺癌细胞株SGC-7901由上海生命科学研究所提供;青蒿琥酯购自桂林南药股份有限公司,国药准字H10930195,批号LA100703;PrimeScript RT reagent Kit、SYBR Premix Ex TaqTM购自日本Takara公司;兔抗人calpain2多克隆抗体购自美国abcam公司;兔抗人p-P38多克隆抗体购自美国CST公司.
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RNA干扰封闭AKT2增加人肝癌细胞对吉西他滨敏感性的研究
细胞凋亡的抑制可参与恶性肿瘤的进展和化疗药物耐药性的产生.因而诱导肿瘤细胞凋亡已成为目前治疗恶性肿瘤的一项重要生物学策略.AKT2在体外培养的细胞中及体内均有阻止细胞凋亡的作用.为了探讨靶向封闭AKT2蛋白在肝细胞癌治疗中的意义和价值,我们建立AKT2表达减少的稳定细胞株SMMC7721-AKT2-shRNA,观察其对药物敏感性的变化.材料与方法1.主要试剂:兔抗人AKT2多克隆抗体购自CST公司、兔抗人bax多克隆抗体、兔抗人bcl-2多克隆抗体均购自SantaCruz公司;吉西他滨(Gem)购自Lilly公司;Supersilencing质粒购自上海吉玛制药有限公司;人肝癌细胞株SMMC7721苏州大学附属第一医院血研所提供.
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抵抗素在肥胖及2型糖尿病患者脂肪组织中的表达
为探讨抵抗素(resistin)与肥胖和2型糖尿病的关系,进一步研究抵抗素的作用,本实验运用Western Blot技术,测定抵抗素在人皮下脂肪及大网膜指肪组织中的表达.以我院接受腹部手术的部分患者为研究对象(n=11),将其分为肥胖组(n=3)、糖尿病组(n=5)、对照组(n=3),分别取皮下脂肪及大网膜脂肪组织各1 g,提取脂肪组织内的蛋白,用Western Blot方法测定其中抵抗素的表达,应用激光光密度扫描仪测定各蛋白条带的光密度.兔抗人抵抗素(51-108)IgG由Phoenix Pharmaceticals公司生产.用散点图分别描绘抵抗素在肥胖组、糖尿病组与对照组中的表达,在男女中的表达及在腹部皮下脂肪与网膜脂肪中的表达,观察其变化趋势.
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兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白在造血干细胞移植病人预处理中的应用及护理
兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白(ATG)是一种选择性免疫抑制剂,作用于T淋巴细胞,使淋巴细胞衰竭,它可识别器官排异反应时出现在绝大多数T细胞表面的活性物质.ATG用于造血干细胞移植前的预处理阶段,加强免疫抑制,预防和治疗器官的排异反应,治疗移植物抗宿主病(GVHD).
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兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白治疗小儿重型再生障碍性贫血的护理
小儿重型再生障碍性贫血(SAA)是因骨髓造血组织显著减少,引起造血组织衰竭,发生全血细胞极度减少的一类贫血,此病进展迅速,病死率高.我科于2004年3月-2006年8月在常规治疗基础上,用兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白治疗小儿重型再生障碍性贫血6例,取得满意效果.现将护理介绍如下.
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凝血因子ⅩⅢ在病毒性肝炎患者血浆中的变化
本文采用了兔抗人因子ⅩⅢ亚基(ⅩⅢ-a)和兔抗人因子ⅩⅢb亚基(ⅩⅢ-b)抗血清借电免疫扩散法测定了21名正常人及103例瞒毒性肝炎患者血浆因子ⅩⅢ亚基水平,结果发现血浆因子ⅩⅢa亚基抗原(ⅩⅢ-a:Ag)及b亚基抗原(ⅩⅢ-b:Ag)在各组肝炎患者血浆中均有显著下降.其中7例死亡者中有2例肝硬化ⅩⅢ-a:Ag和ⅩⅢ-b:Ag与正常组比较分别为29.8%和44.7%,5例重型肝炎为33.4%和68%,并伴有凝血酶原时间延长和不同程度的出血现象.这些结果表明了ⅩⅢ-a:Ag和ⅩⅢ-b:Ag值的测定对诊断和估计肝病的严重程度以及了解凝血系统的状态具有实用价值.
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免疫荧光染色、超高倍相差显微仪鉴别血尿的方法对比
肾性血尿与非肾性血尿的区别对临床诊断和治疗有重要价值.检查尿中红细胞形态已经被作为肾性与非肾性血尿的一个常用诊断指标.尿中异形红细胞达到三种以上,同时变异率70%以上代表肾性血尿(非均一性血尿),而红细胞形态一致则说明标本是非肾性血尿(均一性血尿);但是,这种方法有时受到尿液标本的理化性质影响.一些研究表明,尿的渗透压、pH值、离子比等因素都可影响红细胞的形态和大小.我们认为,尿中红细胞上的Ig染色,是鉴别肾性与非肾性血尿的一个很好的方法;用荧光标记的兔抗人Ig抗体(抗IgA抗体,抗IgG抗体)对尿中红细胞上Ig染色(简称免疫荧光染色)的方法来区别肾性与非肾性血尿,同时和超高倍相差显微仪尿沉渣形态学检查(简称形态学检查)结果相比较.
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解整合素金属蛋白酶9在胆管癌细胞中的表达及临床意义
解整合素金属蛋白酶(ADAM)是依赖锌离子的基质金属蛋白酶(MMP)超家族的一员[1],是一类含有解整合素和金属蛋白酶结构域的Ⅰ型跨膜蛋白.近年来有研究证实ADAM9蛋白在肝癌、乳腺癌、结肠癌、甲状腺癌、前列腺癌等恶性肿瘤中均有表达[2].本研究旨在探讨ADAM9在胆管癌细胞中的表达及临床意义.一、材料和方法1.材料:一抗为兔抗人ADAM9多克隆抗体(购自北京博奥森生物技术有限公司),免疫组织化学二抗试剂盒以及二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购白武汉博士德生物工程公司.
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TPX2-siRNA对裸鼠体内移植瘤生长及TPX2表达的影响
我们通过建立裸鼠食管鳞癌细胞EC9706的移植瘤模型,观察TPX2干扰前后对移植瘤的影响和肿瘤组织中TPX2的表达水平.一、材料与方法1.材料:人食管癌细胞株EC9706(中国医学科学院肿瘤医院惠赠).裸鼠:BALB/c裸小鼠15只,雄性,4周龄,体质量16~20 g[中国科学院动物所,SCXK(京)2009-0004].TPX2兔抗人多克隆抗体(由德国 Ulrike Bauer惠赠).免疫组织化学试剂盒(北京中山生物技术有限公司).TPX2与β-肌动蛋白(β-actin)引物(北京奥科生物技术有限责任公司),逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(大连TaKaRa公司).
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脑胶质瘤干细胞的培养和鉴定
肿瘤干细胞和肿瘤的发生、进展和预后密切相关[1].我们应用脑胶质瘤细胞株U251,证实人脑胶质瘤干细胞的存在.一、材料与方法1.材料:人脑胶质瘤细胞株U251(购自中国科学院细胞库).DMEM/F12培养基(Hyclone),EGF(Peprotech),FGF(Peprotech),LIF(Millipore),1327(Invitro-gen),鼠抗人Nestin单抗(中杉金桥),鼠抗人MAP2单抗(Sigma),鼠抗人PE-CD133单抗(eBioscience),兔抗人GFAP单抗(BIOSS),逆转录试剂盒(Toyobo),SYBR Green mix(Toyobo),等.
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立体定向建立大鼠C6脑胶质瘤模型
我们采取不同细胞数C6单细胞悬液建立模型,探讨各种接种细胞数量的优劣.一、材料和方法1.材料:雄性Wistar大鼠65只,体重200~250g;大鼠胶质瘤C6细胞系由华中科技大学附属协和医院杨林博士后惠赠.苏木素-伊红(HE)染色试剂、兔抗人C-erbB1蛋白多克隆抗体和S-100B蛋白多克隆抗体及SABC试剂盒购于武汉博士德公司.
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D-二聚体及FDP的测定
D-二聚体(D-dimer)是反映已交联的纤维蛋白被纤溶酶降解的特异性分子标志物,为纤维蛋白降解产物中的小片段,是血栓已被溶解的直接证据。FDP是纤维蛋白或纤维蛋白原被纤溶酶降解的产物,也是综合反映纤溶亢进的指标[1]。D-dimer水平的升高,标志机体凝血和纤溶系统的双重激活,是继发性纤溶亢进的敏感和特异指标;FDP反映机体纤溶活性的总水平[2]。近年来两项指标在临床上广泛应用,如在弥漫性血管内凝血(DIC)、肿瘤、肺部感染、糖尿病肾病、冠心病等疾病的诊断、疗效判定和预后估计方面的应用已有报道。例如,由于FDP的敏感性较高,但缺乏特异性,而D-dimer虽敏感性较低,但特异性较高,两者配合,可提高对DIC诊断的敏感性和特异性[3]。近我们开展了将该两项指标用于矽肺早期诊断的研究,探讨它们与矽肺纤维化病变过程的关系。然而关于两项指标的测定方法已有许多文献报道,现将近年来所选用的各种检测方法作一综述,为在不同实验条件下因地制宜地选择实验方法提供依据。1FDP的检测方法关于FDP的检测方法,已有较多文献报道供参考,所以在具体实验中应根据实验条件、样本来源、敏感度要求等具体因素来选择适宜的方法,现介绍几种常用的方法。1.1ELISA法FDP免疫学检测时,国内原来一直用多克隆抗体来检测,其亲和力、特异性及抗原结合谱随抗原纯度、不同免疫动物个体和采血次数多寡而变化,使试剂难以标准化,直接影响结果的准确性[4]。单克隆抗体(McAb)可克服以上缺点,已有较多文献报道[5,6]。因此双抗体夹心ELISA法由于它的高敏感性和无放射性伤害,已愈来愈多地应用于临床检测[7]。McAb夹心ELISA法测定人纤维蛋白(原)降解产物碎片E与兔抗人FDP抗体检测FDP比较,其敏感性好,同时显示了McAb特异性强,能单独选择性作用于FDP的碎片E,且无放射性伤害,McAb的线定量范围明显宽于兔抗人FDP抗体,说明DN20McAb在临床检测中优于相应的抗血清法[8]。ELISA法检测FDP时可受多种因素影响,所以保证试剂的稳定性、用具清洁和固定专人操作是至关重要的。
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兔抗人IgG免疫血清的制备
目的 制备教学用兔抗人IgG免疫血清.方法 采集健康人IgG血清,用混合免疫法免疫健康家兔,45d后产生免疫血清,并用双向免疫扩散试验检测其效价.结果 制备出效价高于1∶16的兔抗人IgG免疫血清.结论 采用混合免疫法可在较短期内制备出高效价兔抗人免疫血清,是一种既简便经济又理想的教学用免疫血清制备的新方法.
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兔抗人IgG免疫血清的制备
目的 制备教学用兔抗人IgG免疫血清.方法 采集健康人IgG血清,用混合免疫法免疫健康家兔,45d后产生免疫血清,并用双向免疫扩散试验检测其效价.结果 制备出效价高于1∶16的兔抗人IgG免疫血清.结论 采用混合免疫法可在较短期内制备出高效价兔抗人免疫血清,是一种既简便经济又理想的教学用免疫血清制备的新方法.
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人瘢痕组织中钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶的表达
1 对象与方法1.1 主要试剂和仪器兔抗人钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(CASK)多克隆抗体、兔抗人β肌动蛋白单克隆抗体、辣根过氧化物盒标记的山羊抗兔多克隆抗体、增强型化学发光(ECL)试剂盒(美国Santa Cruz公司),二辛丁酸试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司),聚偏二氟乙烯膜(美国Millipore公司).酶标仪(奥地利Anthosht公司),电泳仪、凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司).