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2-10 SiO2刺激PAM上清液对Ⅰ型肺上皮细胞的增殖效应
目的探讨二氧化硅(SiO2)刺激肺巨噬细胞(PAM)上清液在Ⅰ型肺上皮细胞损伤中的作用.方法分别用体积分数为5%和10%不同剂量的SiO2刺激大鼠(SD)肺泡PAM上清液作用于貂肺上皮细胞(CCL-64),采用四唑盐(MTT)比色法测定其增殖效应.结果在0、50、100、200、500μg/m1SiO2浓度范围,5%SiO2刺激的PAM上清液引起细胞增殖,500 μg/m1剂量组(0.30±0.02)与对照组(0.26±0.04)差异有显著性,并存在剂量-效应关系(r=0.975,P＜0.01).10%SiO2刺激PAM的上清液表现为细胞损伤作用,50 μg/m1剂量组(0.21±0.04)与对照组吸光度值差异有显著性.结论随着作用剂量的增加,SiO2刺激PAM分泌活性物质将加重Ⅰ型肺上皮细胞的损伤,促进矽肺纤维化的进程.
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抗纤维化短肽对大鼠矽肺纤维化MCP-1、ED-1表达的影响
目的 探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内单棱细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、ED-1表达的影响在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用.方法 气管内灌尘法制作大鼠矽肺纤维化动物模型,实验大鼠随机分为6组,包括:对照1组,时照2组和矽肺模型1组,矽肺模型2组,矽肺抗纤维化治疗组,矽肺预防治疗组.采用HE染色对矽肺纤维化病变及其变化特点进行形态学观察;采用羟脯氨酸法对矽肺大鼠肺内胶原含量进行检测;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织中MCP-1的表达与巨噬细胞(ED-1阳性)的数量.结果 抗纤维化治疗组与矽肺模型1组与2组相比,矽结节面积下降到84.28%和67.93%,羟脯氨酸含量下降到70.89%和58.18%,MCP-1蛋白表达下降到82.3%和84.1%,MCP-1阳性细胞数下降到67.4%和72.5%,ED-1蛋白表达下降到78.7%和79.3%,ED-1阳性细胞数下降到54.4%和66.8%;预防治疗组与矽肺模型2组相比,矽结节面积下降到61.13%,羟脯氨酸含量下降到60.27%,MCP-1蛋白表达和阳性细胞数分别下降到85.2%和86.3%,ED-1蛋白表达和阳性细胞数分别下降到87.2%和74.9%.结论 AcSDKP具有拮抗矽肺纤维化的作用,这可能与其抑制巨噬细胞在肺内的浸润、聚集,减轻了尘性肺泡炎的程度相关.
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熊果酸对矽肺大鼠TNF-α和胶原合成的调节作用
目的 观察熊果酸对矽肺大鼠TNF-α含量和胶原合成的调节作用.方法 75只Wistar雄性大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、熊果酸组,每组25只.模型组与熊果酸组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型.熊果酸组自注射SiO2第二天灌胃熊果酸40mg/kg,对照组以同样方法灌注等量生理盐水,共连续28天.动物分别在注射SiO2后第7、14、28天处死.ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量,应用羟脯氨酸试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量,Western blot法检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).熊果酸组TNF-α含量与模型组相比均显著降低(P＜0.05).模型组肺组织中总胶原蛋白含量与同期对照组比较明显增加(P＜0.05).熊果酸组与模型组相比,总胶原含量明显下降(P＜0.05).熊果酸组与模型组大鼠肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原表达与总胶原蛋白含量变化一致.结论 熊果酸可以减少矽肺纤维化过程中TNF-α和胶原蛋白的产生.
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HO-1、NF-κB在矽肺纤维化中作用机制的实验研究
目的 观察血红素加氧酶-1 (HO-1)及核转录因子kappa B(NF-κB)在大鼠矽肺纤维化中的作用机制及相互关系.方法 实验动物采用Wistar大鼠60只,体重180～220 g,雌雄不拘,适应性饲养1周后,随机分为4组,分别为对照组(A组)和染尘模型组(B组)、染尘+HO-1抑制剂组(C组)、染尘+HO-1诱导剂组(D组),每组15只.采用气管暴露法滴注二氧化硅悬液制造大鼠矽肺模型.建模28 d后HE染色观察各组大鼠肺组织病理结构,采用Western blot法检测各组肺组织HO-1和NF-κB蛋白含量,采用荧光定量PCR法检测各组肺组织HO-1和NF-κB mRNA的表达.结果 Western blot检测结果显示HO-1、NF-κB蛋白含量,对照组明显低于其他各组(P＜0.05),C组较B组明显降低,而D组较B组表达量明显升高(P＜0.05).RT-PCR检测各组HO-1 mRNA相对表达量分别为2.25±0.38、1.81±0.74、7.75±0.56,C组较B组表达明显降低,而D组较B组表达显著升高(P＜0.05);NF-κB mRNA相对表达分别为3.06±0.42、6.15±0.37、1.39±0.14,C组较B组表达明显升高,而D组较B组表达显著降低(P＜0.05).结论 HO-1、NF-κB共同参与了大鼠矽肺纤维化的形成过程,通过对其干预可以改变大鼠矽肺纤维化的程度,可为矽肺纤维化的诊断与治疗提供新途径.
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细胞因子拮抗剂在矽肺纤维化治疗中的应用
矽肺是吸入含有游离二氧化硅粉尘所致的以肺弥漫性纤维化为主的全身性疾病,是危害严重的职业病之一.目前对矽肺纤维化的病理机制仍然不甚明了,治疗上也无特效药物和疗法,传统的抗炎、免疫抑制剂疗法并没有显著效果,极易遗留并发(后遗)症.
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N-乙酰-L-半胱氨酸对矽肺模型大鼠肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶2、9表达的影响
在SiO2粉尘引起的矽肺纤维化过程中,肺泡巨噬细胞具有重要作用.基质金属蛋白酶(MMP)是降解细胞外基质的主要酶类.肺泡巨噬细胞分泌的MMP-2和MMP-9能够降解肺泡基膜,从而启动肺间质纤维化[1].目前,阻断肺泡巨噬细胞氧化损伤对其分泌MMPs影响的研究尚不多见.本研究以N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)为抗氧化剂,应用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,探讨NAC对矽肺纤维化模型大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2和MMP-9表达的影响.
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矽肺患者肿瘤坏死因子、超氧化物歧化酶、T淋巴细胞亚群检测与石棉肺对比研究
近年来,细胞因子及自由基损害所致矽肺纤维化的实验研究较多.我们检测了临床矽肺患者的肿瘤坏死因子(TNF-α)、红细胞超氧化物歧化酶(SOD)、T淋巴细胞亚群CD4、CD8、CD4/CD8的改变,并与石棉肺患者进行对照研究.
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矽肺纤维化细胞分子机制研究的进展
矽肺是由于长期吸入大量游离SiO2引起的肺进行性纤维化疾病.目前,对矽肺纤维化的研究已进入到细胞、细胞因子和信号转导等领域.通过调控参与肺纤维化的效应细胞、细胞因子,特别是干预介导肺纤维化的重要信号转导分子将给肺纤维化治疗带来新的希望.
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γ-干扰素治疗大鼠实验性矽肺的疗效观察
γ-干扰素(IFN-γ)是一种较强的免疫调节剂,可抑制细胞外基质的分泌和胶原合成,促进胶原降解.本实验采用IFN-γ早期预防性治疗大鼠矽肺纤维化,进行疗效观察,为肺纤维化治疗提供实验依据.
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矽宁对大鼠生殖与子代发育的影响
矽宁(盐酸替络欧)是乙胺芴酮类衍生物。动物实验结果表明，该药急、慢 性毒作用低，具有明显抑制矽肺纤维化病变进展的作用，是一种高效低毒的抗矽肺新药 ［1］。为观察矽宁是否具有生殖毒性，为安全合理用药提供科学依据，我们就矽宁对 大鼠生殖毒性及仔鼠发育的影响进行了研究。 一、材料与方法 1.实验动物及处理：矽宁为淡黄色粉末(纯度99%，中国预防医学科学院劳动 卫生与职业病研究所提供),用前以蒸馏水配成相应浓度。健康SD大鼠(浙江省实验动物中 心提供),雄性鼠龄为5～6周，体重120～150 g；雌性鼠龄为6～7周，体重150～200 g。大 鼠随机分为4组(每组雌雄各30只)。 根据矽宁亚急性实验结果［2］，按1/20、1/40、1/80 LD50设3个给药组,分别 给矽宁58.3、29.3、14.6 mg/kg。对照组给蒸馏水。每日灌胃1次，按每公斤体重10 ml给药 。大鼠自给药日起，每周称重1次。妊娠母鼠以交配日的体重值为基准，每隔3 d称重1次， 调整给药量。雄鼠于交配前9周(63 d)始，至交配日为止连续给药；雌鼠于交配前2周(14 d) 开始至交配期见阴栓后7 d为止连续给药。 2.观察指标：(1)一般情况观察：记录进食量、饮水量、体重变化、活动、死亡情况。(2)生 殖毒性指标：雄鼠观察交配成功率，处死后摘取睾丸、附睾称重；雌鼠观察受孕率，处死后 取子宫并称重，观察子宫及卵巢外观，检查黄体数、着床数、胎盘重、吸收胎、早死胎、晚 死胎，记录存活胎鼠性别、体重、身长、尾长，并观察外观骨骼畸形。 3.统计学处理：所有数据均以SPSS WIN软件，用单因素方差分析、t检验及χ2检 验进行统计学处理。 二、结果 1.一般情况：灌药期间，58.3、29.3 mg/kg组亲代雄鼠各死亡5只，亲代雌鼠4 个 剂量组均死亡1只，为灌药期间相互抓咬后受伤死亡，死鼠经解剖未见脏器有异常。58.3 mg /kg组给药后可见两性大鼠均出现进食量减少、体重增长缓慢的情况，与对照组相比，差异 有显著性(P<0.05)；29.3、14.6 mg/kg剂量组进食量、体重随灌药天数增加出现下 降趋势，但与对照组的差异未见显著性(P>0.05)。 2.雄性大鼠授精率：58.3、29.3、14.6 mg/kg组和对照组使雌鼠妊娠的雄鼠数分别为4、14 、18、18只(58.3、29.3 mg/kg组各有25只大鼠,14.6 mg/kg和对照组各有30只大鼠),亲 代雄性授精率分别为16%、56%、60%、60%,经χ2检验，亲代雄性授精率4个组之间差 异有显著性，58.3 mg/kg组大鼠授精率低(χ2=14.28,P=0.00)； 3个给药组分别与对照组进行两两比较，仅58.3 mg/kg组与对照的差异有显著性(χ2=9.24,P=0.00)；29.3 mg/kg组 χ2=0.09;14.6 mg/kg组χ2=0.00,P均>0.5。
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矽肺纤维化发展过程中差异基因MMP-12功能的实验研究
目的 构建基质金属蛋白酶-12(MMP-12)基因小干扰RNA片段(siRNA)表达质粒,探讨MMP-12基因在矽肺纤维化发展过程中的功能.方法 利用RNA干扰技术,将构建的MMP-12-siRNA表达质粒转染大鼠肺成纤维细胞(FB),筛选出佳干扰基因序列.实验分为3组:对照组(C),加未经SiO2粉尘刺激的肺泡巨噬细胞(AM)培养上清液;SiO2刺激组(S),加经SiO2粉尘刺激的AM培养上清液;转染组(T),首先将筛选出的含佳干扰基因序列的质粒转染FB,基因沉默后,再加经SiO2粉尘刺激的AM培养上清液.运用免疫细胞化学法检测各组中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的表达情况.结果 经条件上清培养液刺激后,S组FB中各时段Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原表达均比C组增加,S组Ⅰ型胶原蛋白为0.360 8±0.006 9～0.694 3±0.007 3,C组为Q.240 9±0.005 8～0.257 8±0.009 0,差异均有统计学意义;Ⅲ型胶原蛋白为0.198 9±0.027 8～0.412 9±0.010 8,差异亦均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);T组FB中Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的表达均比S组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 利用RNA干扰技术将MMP-12-siRNA表达质粒转染FB,可沉默MMP-12基因的表达,并可减少Ⅰ及Ⅲ型胶原蛋白的沉积,证实MMP-12基因在矽肺纤维化的发展中起重要作用.
关键词： 矽肺纤维化 成纤维细胞 基质金属蛋白酶-12 RNA干扰技术 胶原 -
益气养阴、化痰活血法对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1和羟脯氨酸含量的影响
目的:观察益肺化纤方对矽肺纤维化的干预作用及可能作用机制.方法:96只健康雄性SD大鼠随机分为6组:生理盐水对照组(A组)、矽肺模型组(B组)、中药干预组(C组,D组,E组)、汉防己甲素组(F组).B、C、D、E、F组分别一次性气管灌注SiO2(二氧化硅)混悬液0.5mL,A组等量生理盐水.2周后,对照组、中药干预组分别每天1次给予生理盐水和不同剂量中药,F组隔日1次给予50mg/kg相同量的汉防己甲素.2周后取材检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、羟脯氨酸(HYP).剩余大鼠继续上述方法4周.结果:①与对照组比,模型组及干预组不同时间点肺组织TGF-β1、HYP含量,血清TGF-β1含量显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).②与模型组相比,干预组不同时间点肺组织TGF-β1、HYP含量,血清TGF-β1含量显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).③与汉防己甲素组比,高剂量中药组肺组织TGF-β1含量较汉防己甲素组均降低,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论:益肺化纤方可能通过降低羟脯氨酸含量、抑制转化生长因子-β1过程减轻矽肺纤维化.
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槲皮素对矽肺纤维化大鼠巨噬细胞和核因子-κB 的影响
目的：观察槲皮素对矽肺纤维化大鼠巨噬细胞(AM)和核因子-κB (NF-κB)信号通路的影响。方法90只 SPF 级 Wistar 雄性大鼠,随机分为对照组(NS 组)、模型组(M 组)、槲皮素组(Que 组),每组30只。M 组与 Que 组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入 SiO 2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺纤维化模型；NS 组以同样方法注入生理盐水0.2~0.3 ml。3组分别在注射 SiO 2后第1、3、7、14、21、28天处死动物。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清后,应用血细胞计数板计数 AM 总数,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,免疫组织化学法检测肺组织中 NF-κB 表达。结果 M 组自第1天开始 BALF 中 AM 总数均不同程度增高,于第3天达高峰,第28天降至正常 NS 组水平。Que 组 AM 总数各时间点与 M 组对应时间点比较均降低,第1、3、7、14、21天差异有统计学意义(P <0.05)。与 NS 组比较,M 组大鼠血清中的 TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P <0.05)；Que 组 TNF-α含量各时间点均升高,与同时期 M 组、NS 组比较,差异有统计学意义(P <0.05)。M 组大鼠肺组织中 NF-κB 蛋白表达高峰在第7天,各时间点均高于 NS 组及 Que 组,两两比较差异均有统计学意义(P <0.05)。Que 组大鼠肺组织中 NF-KB 的表达较模型组减少,但高于 NS 组,各时间点两两比较,差异有统计学意义 (P <0.05)。结论槲皮素通过抑制 NF-κB 通路减少大鼠炎症细胞、炎症介质TNF-α等释放,减轻炎症反应过程,缓解肺纤维化过程。
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TNF-α在矽肺纤维化发病机制中的作用研究
矽肺是由于在生产过程中长期吸入游离二氧化硅(石英)含量过高的粉尘而引起的以肺组织纤维化为主的疾病。大量研究表明，矽肺纤维化的形成并非单一因素作用效应，而是多方面、多因素、多环节综合作用形成的病理结局。目前公认的矽肺肺纤维化发病机制学说主要涉及矽尘毒性学说、自由基学说、肺内细胞学说、细胞因子网络学说等[1]。其中致病过程中细胞因子间相互作用形成的网络系统受到国内外学者的广泛关注，在已证实与肺纤维化相关的炎症细胞因子中，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)被广泛认为是肺纤维化形成和发展的关键性细胞因子，我们主要对 TNF-α在矽肺纤维化发病机制中的作用进行简要阐述。
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TNF-α在矽肺纤维化发病机制中的作用研究
矽肺是由于在生产过程中长期吸入游离二氧化硅(石英)含量过高的粉尘而引起的以肺组织纤维化为主的疾病。大量研究表明，矽肺纤维化的形成并非单一因素作用效应，而是多方面、多因素、多环节综合作用形成的病理结局。目前公认的矽肺肺纤维化发病机制学说主要涉及矽尘毒性学说、自由基学说、肺内细胞学说、细胞因子网络学说等[1]。其中致病过程中细胞因子间相互作用形成的网络系统受到国内外学者的广泛关注，在已证实与肺纤维化相关的炎症细胞因子中，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)被广泛认为是肺纤维化形成和发展的关键性细胞因子，我们主要对 TNF-α在矽肺纤维化发病机制中的作用进行简要阐述。
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连接蛋白与肿瘤发生和矽肺纤维化的关系
以细胞间的间隙连接(gap junction,GJ)为途径的细胞间直接的信息交流,称为间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC).GJIC在胚胎发育、细胞分化和生化控制等生物过程中起重要作用.肿瘤是一种增殖失控和分化紊乱的疾病,早在60年代,Stoker和Lowenstein就提出GJIC在肿瘤抑制中起作用.随着对GJIC研究的深入,以及间隙连接蛋白的分离及其基因的克隆,GJIC的分子基础-连接蛋白基因表现出肿瘤抑制基因的特点.本文就连接蛋白的结构与分布,以及所表现出的肿瘤抑制特性进行讨论,并对连接蛋白的正常功能性表达与矽肺纤维化发生的关系作一展望.
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矽肺模型大鼠血清中细胞因子消长规律的探讨
目的 检测矽肺模型大鼠血清中细胞因子IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β的规律,探讨细胞因子在肺纤维化过程中的作用.方法 60只雄性Wistar大鼠随机分成对照组和实验组,每组30只；实验组经气管灌注1ml游离二氧化硅粉尘悬液( 100 mg/ml),对照组同法灌注等量生理盐水；分别于第1、7、14、21、28天,各组6只大鼠心脏取血,处死,并取肺组织.肺组织行HE染色,观察肺部炎症、纤维化等病理变化；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β的含量.结果 染尘大鼠血清IL-1含量均高于对照组,但不同时间,差别不明显；染尘第1、7、14天的IL-8含量均高于对照组,随着染尘时间增加,IL-8含量则渐回归正常；染尘第1、7天；TNF-α含量低于对照组；第14、21、28天TNF-α含量则高于对照组(P＜0.05),染尘不同时间TNF-α含量也不同(F=30.724,P=0.001)；血清TGF-β的波动则较明显,如染尘第1、7天其含量高于对照组,第14天则低于对照组,第21、28天又高于对照组(P＜0.05),染尘不同时间的TGF-β含量也不同,差异具有统计学意义(F =33.236,P=0.001).结论 细胞因子IL-1、IL-8、TNF-α、TGF-β在染尘不同时间血清中的含量不同,其分泌的变化可能与染尘大鼠肺纤维化发生、发展有关.
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纤溶酶原激活物在大鼠矽肺纤维化中的作用机制
建立大鼠矽肺模型及对照,分别取不同时间点处死大鼠,免疫组化检测肺组织中uPA、PAI-1蛋白表达.与对照组比较,矽肺模型组uPA表达随时间延长呈增强趋势,第1周达高峰,此后逐渐减弱,但仍较对照组明显.PAI-1第1天起即可见阳性表达,且随染尘时间延长强度逐渐增强,持续至第4周.模型组肺内多种细胞uPA、PAI-1表达增加,矽肺纤维化中可能存在uPA/PAI-1比例的失衡,导致细胞外基质(ECM)积聚而影响矽肺纤维化的发生发展.
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益肺降纤方对实验性矽肺大鼠的干预作用
目的:研究益肺降纤方抗实验性大鼠矽肺纤维化的作用.方法:将40只大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、高剂量组.用非暴露式气管内注入法造模后,于15、30、60天处死动物,测定的动物肺系数,肺组织病理变化及肺组织羟脯氨酸(HYP)含量.结果:低剂量组、高剂量组与模型组比较,肺系数明显降低(P＜0.05),病理肺泡炎及肺纤维化明显减轻.肺组织HYP含量明显降低(P＜0.05).结论:益肺降纤方低剂量组、高剂量组均可在不同程度上改善实验性大鼠矽肺纤维化,其中以高剂量组为优.
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矽肺大鼠肺内淋巴管增生与纤维化进程的关系
[目的]探讨矽肺发病过程中肺内淋巴管增生与纤维化进程的关系. [方法] 56只Wistar大鼠随机分为矽肺模型组和对照组,模型组又按动物处死时间分为1、7、14、28、42和56d 6个亚组,每组8只大鼠.采用墨汁-硝酸银染色观察淋巴管增生情况,实时荧光定量PCR方法检测VEGFR-3 mRNA转录水平,免疫组化法、比色法检测肺组织中Ⅰ型胶原表达及羟脯氨酸含量. [结果]与对照组相比,矽肺大鼠肺组织中Ⅰ型胶原从染尘后1d、羟脯氨酸含量从染尘后7d即开始升高(P＜0.05或P＜0.01);从染尘7d开始发现增生的淋巴管,且随着染尘时间的延长,淋巴管增生呈现先增多后减少的趋势;VEGFR-3 mRNA表达在染尘后7d开始增加(P＜0.01).Pearson相关性分析显示在染尘早期,即28d以前,Ⅰ型胶原含量、羟脯氨酸含量与VEGFR-3水平呈正相关(r=0.9744,P=0.0256;r=0.9985,P=0.0015),染尘28d后Ⅰ型胶原含量、羟脯氨酸含量与VEGFR-3水平呈负相关(r=-0.9751,P=0.0249;r=-0.9744,P=0.0257). [结论]矽肺大鼠发病过程中出现肺组织淋巴管增生,其增生程度与矽肺纤维化具有相关性.
关键词： 矽肺纤维化 淋巴管增生 血管内皮生长因子受体-3 Ⅰ型胶原 羟脯氨酸
