邻苯二甲酸单丁酯暴露对小鼠植入后胚胎发育的影响

目的 研究植入前暴露邻苯二甲酸单丁酯(DBP)对孕早期胚胎植入和发育的影响. 方法 在孕1.5d、2.5d、3.5d给孕鼠灌胃300 mg·kg-1·d-1的DBP,然后于7.5d、8.5d、9.5d统计子宫植入点数、活胎数量、吸收胎数量和胚胎长度,并使用全胚免疫荧光染色的方法检测nestin蛋白的表达. 结果 DBP暴露显著降低了胚胎长度(P＜0.05);降低了妊娠率(P＜0.05);也降低了植入点数和胚胎数,但差异不显著;但显著提高胚胎吸收率(P＜0.05).利用神经干细胞特征性标志物nestin检测DBP对神经系统发育的影响发现,DBP处理组胚胎头部荧光强度明显低于对照组. 结论 孕早期DBP暴露降低了胚胎妊娠率,延缓了胚胎的发育,并降低了头部神经细胞的分化能力.

银杏叶对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后Nestin蛋白表达的影响

目的:研究银杏叶提取物(GbE)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后Nestin蛋白表达的影响.方法:72只7d龄SD大鼠制备HIBD模型,随机分为GbE治疗组、生理盐水(NS)治疗组和假手术组,应用免疫组化的方法观察GbE对脑组织Nestin 表达的影响.结果:脑组织Nestin的表达在NS治疗和GbE治疗3d开始增高,7d达到高峰,GbE治疗组与假手术组和NS治疗组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:GbE可提高HIBD大鼠脑组织Nestin的表达,具有诱导神经干细胞增殖的作用.

慢病毒介导的Nestin基因沉默抑制人食管癌ECA109细胞增殖

目的：通过体外实验探讨沉默巢蛋白（ Nestin）基因对人食管癌ECA109细胞增殖能力的影响及可能机制。方法合成Lenti-Nestin慢病毒载体，实验设blank组、scrambled组和Lent-Nestin组，转染ECA109细胞，建立稳定沉默Nestin基因的细胞系Lenti-Nestin；用qRT-PCR和Western blot检测Nestin、c-myc和cyclin D1 mRNA和蛋白表达；CCK-8法检测细胞增殖能力；平板集落实验检测细胞的集落形成。结果稳定沉默Nestin的细胞系构建成功；与blank组和scrambled组相比，Lent-Nestin组中Nestin mRNA（ P＜0.01）和蛋白（ P＜0.05）水平明显降低；细胞增殖能力明显降低（ P＜0.01），集落形成能力显著下降（ P＜0.05）；沉默Nestin表达后，c-myc、cyclin D1表达明显受到抑制（ P＜0.05）。结论沉默Nestin基因表达可抑制人食管癌ECA109细胞的增殖能力，其可能通过调控c-myc、cyclin D1表达参与其中。

胃肠间质瘤68例免疫组化研究

目的 观察68例胃肠间质瘤(GISTs)的免疫组化标记特点,寻找GISTs免疫组化诊断更为理想的组合标记物.方法 采用免疫组化SP法对肿瘤中CD117、CD34、α-SMA、NSE、nestin、HCD等的表达进行检测.结果 ①68例GISTs中,CD117、CD34、nestin及HCD 蛋白的阳性率分别为94.12%(64/68)、75(51/68)、97(66/68)、77.94%(53/68).②CD117、CD34、nestin、HCD表达阳性率间无显著差异(P＞0.05).结论 在GISTs的诊断中,CD117、CD34、nestin及HCD联合应用是免疫组化诊断的更为理想的组合.

肿瘤干细胞标志物CD133和Nestin在卵巢癌中的表达及意义

目的：探讨肿瘤干细胞标志物CD133和Nestin在卵巢癌中的表达，并研究其与临床病理参数及预后的相关性。方法采用免疫组化法检测20例正常卵巢组织与50例上皮性卵巢癌组织，检测其中CD133及Nestin的表达水平，并分析其与临床病理因素之间的关系。结果①CD133和Nestin在正常卵巢组织和卵巢上皮性癌中的阳性表达率分别为10.0％、62.0％及10.0％、76.0％（ P <0.05）。②CD133及Nestin在卵巢癌组中的表达水平与其FⅠGO分期及病理分级有关，在Ⅲ～Ⅳ期、低分化组（G3）比Ⅰ～Ⅱ期、高中分化（G1、G2）组表达率高（ P <0.05）。③Spearman相关性分析显示CD133表达与Nestin的表达呈正相关（ r =0.363，P <0.05）。结论 CD133与Nestin在卵巢上皮性癌中高表达，可能促进了卵巢上皮癌的发生、发展，并可能作为卵巢癌干细胞标志物用于判断卵巢上皮性癌的预后。

单核细胞趋化蛋白-1对大鼠脑内神经干细胞的诱导作用

目的：探讨外源性单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对体内神经干细胞的作用。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠64只分为空白组(n=4)、对照组(n=30)和实验组(n=30)。空白组不做处理，对照组大脑皮层微量定向注射PBS液，实验组注射MCP-1。注射后3 d、5 d、7 d、14 d、21 d分别取对照组和实验组大鼠各6只灌注取脑。免疫组织化学法观察脑内不同部位nestin阳性细胞的分布。结果实验组皮质区、海马区nestin阳性细胞矫正累积吸光度随时间延长而显著增加(P<0.001)。对照组和空白组之间无显著性差异(P>0.05)。结论外源性MCP-1可以促进MCP-1富集部位的nestin阳性细胞的数量增多。

电刺激小脑顶核对成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后脑内Nestin表达的影响

目的 探讨电刺激小脑顶核(FNS)对成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后脑内不同部位、不同时间点Nestin表达的影响.方法 采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型.180只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、假手术组(SC组)、局灶脑缺血/再灌注组(I/R组)、局灶脑缺血/再灌注+假FNS组(I/RFs组)、局灶脑缺血/再灌注+FNS组(I/RF组),每组36只,并根据再灌注时间的不同又分为1 d、3 d、7 d、14 d、21 d和28 d 6个亚组(n=6).缺血时间均为1 h,于再灌注后立即刺激对侧小脑顶核1 h.应用免疫组织化学技术检测缺血侧侧脑室、海马Nestin阳性细胞的动态表达.结果 局灶脑缺血/再灌注后不同时间点Nestin阳性细胞在缺血侧侧脑室区、海马齿状回的表达均有增加,呈单峰变化趋势,7 d达高峰(P＜0.01),14 d后逐步下降(P＜0.01),而FNS后,Nestin阳性细胞数量增加更加明显(P＜0.05,P＜0.01),7 d达到高峰(P＜0.01),14 d后仍维持在较高水平(P＜0.01),且Nestin阳性细胞形态也发生明显变化.结论 FNS可促进局灶脑缺血/再灌注后脑内Nestin阳性细胞数量增加.

干细胞标记物CK15和Nestin在皮肤附属器肿瘤诊断中的意义

目的探讨干细胞标记物CK15和Nestin在皮肤附属器肿瘤诊断和鉴别诊断中的意义。方法收集211例皮肤附属器肿瘤病例，Eli Vosion法免疫组织化学标记CK15和Nestin，观察各例肿瘤CK和Nestin的表达情况，重点观察阳性细胞的类型和分布。对照观察正常皮肤组织。结果113例毛分化肿瘤均显示CK15阳性，多数类型的毛分化肿瘤也不同程度的表达Nestin，其阳性位置多在形成毛角化区域。13例皮脂腺分化肿瘤，其基底样增殖细胞表达CK15，不表达或极少表达Nestin。85例汗腺肿瘤CK15和Nestin表达各不相同，具有阳性表达的不同肿瘤，阳性表达部位也各有特点。乳头状汗腺腺瘤中顶泌汗腺分化区域CK15、Nestin阴性，部分恶性肿瘤CK15、Nestin表达缺乏规律性。结论毛囊干细胞标记物CK15是毛分化、皮脂腺分化皮肤附属器肿瘤的特异性标记物，干细胞标记物Nestin在这些肿瘤的表达方式可以作为肿瘤成分分化特点的参考。多数汗腺分化肿瘤的CK15、Nestin表达形式具有其分化方向正常组织的特点，可以作为鉴别诊断的依据，但是否能作为鉴别顶泌汗腺分化的肿瘤与外泌汗腺分化的肿瘤依据还需要深入研究。

大鼠肝卵圆细胞的分离与鉴定

目的:分离、培养和鉴定大鼠卵圆细胞.方法:以3'-me-DAB刺激卵圆细胞迅速增生,改良梯度离心法分离、培养大鼠卵圆细胞,观察其形态及增值特点并进行细胞免疫组织化学鉴定.结果:改良的梯度离心的方法能够有效地分离大鼠肝卵圆细胞,卵圆细胞胞体为卵圆形,代谢缓慢,具有干细胞的特点,可以形成集落,并且表达OV6、CD34及Nestin.结论:改良梯度离心法分离的细胞具有干细胞的特点,可以表达卵圆细胞特异性的表面标记OV6、造血干细胞表面标记CD34和神经中间丝蛋白Nestin,具有横向分化的可塑性,为进一步实验研究提供参考依据.

胃肠道间质细胞瘤CD117、Nestin和Ki-67表达及其临床意义

目的 探讨CD117、Nestin、Ki-67在胃肠道间质细胞瘤中的表达及其与临床意义之间的关系.方法 应用免疫组织化学S-P法检测27例胃肠道间质细胞瘤切片中CD117、Nestin 和Ki-67的表达情况,并分析上述免疫组织化学指标与患者生物学行为之间的相关因素和良恶性之间的鉴别.结果 CD117和Nestin的阳性表达率分别为88.9%和92.6% ,Ki-67增殖指数< 1%、1%～5%和> 5%的例数分别为6例、9例和12例;CD117、Nestin和Ki-67在不同性别、年龄、组织学分型之间均无统计学意义;良性,潜在恶性,恶性的病例分别为6例、9例和12例,CD117和Nestin 的阳性表达率在不同的肿瘤分级之间无统计学意义,而Ki-67增殖指数在不同的肿瘤分级之间存在显著性差异(P＜0.01).结论 CD117和Nestin在胃肠道间质细胞瘤中呈高表达,对胃肠道间质细胞瘤的诊断具有重要的意义,但不能作为判断胃肠道间质细胞瘤肿瘤分级的指标;而Ki-67的增殖指数是判断胃肠道间质细胞瘤肿瘤分级和预测预后的可靠指标之一.

胸膜孤立性纤维瘤的诊治

目的 探讨胸膜孤立性纤维瘤的诊断和治疗方法.方法 回顾性分析2002年至2007年10例胸膜孤立性纤维瘤病人的临床和病理资料.10例中男3例,女7例.术前行超声引导下粗针穿刺活检明确诊断2例.全组均行手术治疗,其中3例行胸腔镜手术切除.结果 组织病理学报告,良性和恶性肿瘤各5例;恶性肿瘤CD34表达阳性率较低(3/5例),其中CD34阴性者nestin表达均阳性.失访1例,其余9例随访6～35个月,平均17.3个月,复发1例,死于脑转移1例.结论 超声引导下粗针穿刺结合免疫组化检查是术前明确诊断的一种较好方法.对于较小带蒂的肿瘤,胸腔镜手术是佳手术方法.CD34阴性,同时nestin表达阳性可能是胸膜孤立性纤维瘤的一个恶性指标.

Previous studies have shown that proliferation of endogenous neural precursor cells cannot alone compensate for the damage to neurons and axons. From the perspective of neural plastici-ty, we observed the effects of functional electrical stimulation treatment on endogenous neural precursor cell proliferation and expression of basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor in the rat brain on the infarct side. Functional electrical stimulation was performed in rat models of acute middle cerebral artery occlusion. Simultaneously, we set up a placebo stimulation group and a sham-operated group. Immunohistochemical staining showed that, at 7 and 14 days, compared with the placebo group, the numbers of nestin (a neural precursor cell marker)-positive cells in the subgranular zone and subventricular zone were increased in the functional electrical stimulation treatment group. Western blot assays and reverse-transcription PCR showed that total protein levels and gene expression of epidermal growth factor and basic ifbroblast growth factor were also upregulated on the infarct side. Prehensile traction test results showed that, at 14 days, prehension function of rats in the functional electrical stimulation group was signiifcantly better than in the placebo group. These results suggest that functional electrical stimulation can promote endogenous neural precursor cell proliferation in the brains of acute cerebral infarction rats, enhance expression of basic fibroblast growth factor and epidermal growth factor, and improve the motor function of rats.

Nestin+neurons have been shown to express choline acetyltransferase (ChAT) in the medial septum-diagonal band of Broca in adult rats. This study explored the projection of nestin+neu-rons to the olfactory bulb and the time course of nestin+neurons in the medial septum-diagonal band of Broca in adult rats during injury recovery after olfactory nerve transection. This study observed that all nestin+neurons were double-labeled with ChAT in the medial septum-diagonal band of Broca. Approximately 53.6%of nestin+neurons were projected to the olfactory bulb and co-labeled with fast blue. A large number of nestin+neurons were not present in each region of the medial septum-diagonal band of Broca. Nestin+neurons in the medial septum and vertical limb of the diagonal band of Broca showed obvious compensatory function. The number of nestin+neurons decreased to a minimum later than nestin-/ChAT+neurons in the medial sep-tum-diagonal band of Broca. The results suggest that nestin+cholinergic neurons may have a closer connection to olfactory bulb neurons. Nestin+cholinergic neurons may have a stronger tolerance to injury than Nestin-/ChAT+neurons. The difference between nestin+and nestin-/ChAT+neurons during the recovery process requires further investigations.

This study was designed to investigate whether the Notch pathway is involved in the develop-ment of diffuse spinal cord astrocytomas. BALB/c nude mice received injections of CD133+and CD133? cell suspensions prepared using human recurrent diffuse spinal cord astrocytoma tissue through administration into the right parietal lobe. After 7–11 weeks, magnetic resonance imaging was performed weekly. Xenografts were observed on the surfaces of the brains of mice receiving the CD133+ cell suspension, and Notch-immunopositive expression was observed in the xenografts. By contrast, no xenografts appeared in the identical position on the surfaces of the brains of mice receiving the CD133? cell suspension, and Notch-immunopositive expres-sion was hardly detected either. Hematoxylin-eosin staining and immunohistochemical staining revealed xenografts on the convex surfaces of the brains of mice that underwent CD133+ astro-cytoma transplantation. Some sporadic astroglioma cells showed pseudopodium-like structures, which extended into the cerebral white matter. However,it should be emphasized that the sub-cortex xenograft with Notch-immunopositive expression was found in the fourth mouse received injection of CD133? astrocytoma cells. However, these ifndings suggest that the Notch pathway plays an important role in the formation of astrocytomas, and can be considered a novel treat-ment target for diffuse spinal cord astrocytoma.

谷氨酸激活神经干细胞SHH通路机制的研究

目的 探讨谷氨酸通过N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)激活SHH通路促进神经干细胞增殖的机制.方法 将5只3日龄SD大鼠断头取脑分离神经干细胞(NSC);将NSC分为5组:正常组、谷氨酸刺激组、Conantokin-R组、SHH-shRNA组和shRNA对照组;通过Real-time RCR、Western Blotting、CCK-8检测NSC在NMDAR1受到抑制及SHH被shRNA下调情况下受到谷氨酸刺激后SHH、Nestin的表达变化及细胞增殖能力的变化;采用单因素方差分析中的LSD法进行统计分析.结果 与正常组相比,谷氨酸刺激组和shRNA对照组SHH和Nestin的mRNA和蛋白表达明显上升(均P＜0.05),Conantokin-R组SHH和Nestin的mRNA和蛋白表达无明显变化(均P＞0.05).SHH-shRNA组SHH的mRNA和蛋白表达明显下调(均P＜0.05),Nestin的mRNA和蛋白表达无明显变化(均P＞0.05).结论 谷氨酸通过NMDAR1介导激活SHH通路.

人胚神经干细胞的体外培养及鉴定

目的 探讨人胚神经干细胞的体外培养和诱导分化的条件.方法 从药物流产的12周到16周的人胚胎海马组织中分离神经干细胞,在EGF、bFGF和LIF联合作用下使其稳定增殖,并用10%的胎牛血清诱导其贴壁分化,应用免疫荧光染色方法行Nestin、NSE、MAP-2、GFAP和GalC免疫荧光染色,对神经干细胞及其分化的细胞进行鉴定.结果 体外培养的神经干细胞增殖成神经干细胞球并传代,鉴定为Nestin染色阳性细胞,并可诱导分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞.结论 利用无血清培养技术和特定生长因子,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的人胚神经干细胞.

Oct-4和Nestin在肺癌中共表达的临床意义

目的 研究Oct-4和Nestin共表达在肺癌中的临床意义.方法 收集320例确诊肺癌患者的肿瘤组织标本,采用PCR和免疫组织化学法检测肿瘤干细胞和非肿瘤干细胞中干细胞相关基因的表达差异.结果 体外实验显示,与非肿瘤干细胞相比,肿瘤干细胞,尤其是高表达Oct-4和Nestin的肿瘤干细胞致瘤性明显增强.更重要的是,320例中的42例(13.13％)肿瘤组织呈Oct-4和Nestin表达阳性.单因素分析和多因素分析提示,Oct-4和Nestin的表达与起病年龄、淋巴结转移情况密切相关(P＜0.05).结论 Oct-4和Nestin在肺癌的发展中起到重要的调节作用,Oct-4和Nestin或许可作为判断肺癌预后的重要指标.

电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构Nestin与Brdu表达的影响

目的:通过观察电针对脑缺氧缺血新生大鼠海马结构中神经上皮干细胞蛋白(Nestin)与5-溴-2-脱氧脲嘧啶(Brdu)表达的影响,了解电针对脑缺氧缺血后神经发生水平的干预,为电针穴位疗法的临床应用提供实验依据.方法:100只7日龄健康Wistar大鼠,体重12～15 g,随机分为4组:空白对照组、模型判定组、缺氧缺血组与缺氧缺血后电针治疗组,各组动物(除空白对照组外)分别结扎左侧颈总动脉,然后将动物置于8%O<,2>～92%N<,2>混合气中2 h后取出.模型判定组动物在缺氧缺血48 h后处死,制备脑组织切片.脑缺氧缺血后电针组在缺氧缺血后恢复2 d,开始刺激"百会"和"大椎"两穴.24 d后除模型判定组外,各组动物分别取左侧脑组织制作标本,行Nestin与Brdu免疫组化染色.结果:脑缺氧缺血后电针组海马CA1区Nestin免疫阳性细胞数高于正常对照组及脑缺氧缺血组(P<0.05).脑缺氧缺血后电针组齿状回Brdu免疫阳性细胞数高于正常对照组及高于脑缺氧缺血组(P<0.05).结论:电针穴位治疗可明显提高(加强)脑缺氧缺血后海马结构神经发生的水平(能力).

Nestin和Ki67在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨Nestin及Ki67在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 对2007年1月～2009年1月邯郸市中心医院妇科60例卵巢癌患者及20例卵巢正常患者的病理资料进行回顾性分析,采用免疫组化SP法检测卵巢上皮性癌标本及正常组织中Nestin及Ki67的表达,分析并比较正常卵巢组织及不同病理类型、FIGO分期、残余肿瘤直径的卵巢组织中Nestin及Ki67的表达情况.结果 ①卵巢上皮性癌标本中Nestin和Ki67阳性表达率(38.5％、76.7％)明显高于正常卵巢组织(5.0％、15.0％),两者相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).②组织分化程度高级别的卵巢癌组织中Nestin及Ki67阳性表达率明显高于低级别者(P＜ 0.05);FIGO分期越高、残余肿瘤直径越大,Nestin、Ki67阳性表达率越高(均P＜0.05).③Nestin与Ki67在卵巢癌中的表达无明显相关性(r=0.176,P=0.13).结论 Nestin与Ki67的表达与卵巢癌的发生、发展有密切关系,对Nestin与Ki67的检测可用于判断卵巢上皮性肿瘤的恶性程度及其预后.

Nestin增强部分肝切除小鼠模型肝再生增殖能力的研究

目的 探讨巢蛋白(nestin)基因过表达对小鼠部分肝切除后肝再生增殖能力的影响及其可能的分子机制.方法 应用荧光定量PCR、Western blot和免疫组化的方法检测转基因小鼠肝脏中外源基因nestin的表达情况.使用Brdu标记法比较转基因小鼠和野生型小鼠肝脏在不同状态下(静息状态、肝叶切除后24 h、肝叶切除后72 h)肝细胞增殖能力的差异.结果 荧光定量PCR、Western blot和免疫组化证实转基因小鼠肝脏中存在nestin 的高表达状态.在静息状态下,野生鼠和nestin过表达的转基因鼠肝脏BrdU标记率几乎为零,两者无明显差异;但在肝大部切除的情况下,nestin过表达的转基因鼠有更多的细胞进入增殖状态,增殖能力较野生鼠明显增强,差别具有统计学意义(24 h:t =2.996,P=0.024;72 h:t =2.915,P=0.027).结论 nestin过表达对静息状态下的肝脏增殖无影响,但可增加损伤修复情况下肝脏的再生增殖能力.表明nestin过表达对静止期细胞作用不明显,但在一些病理或刺激状态下nestin可以通过促进DNA的合成而加速细胞的分裂增殖.