首页 > 文献资料
-
音猬因子在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的观察音猬因子( Shh)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2008年1月至2012年12月在武汉市第五医院手术治疗的乳腺癌患者的乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织各46例。采用实时荧光定量 PCR法和免疫组织化学染色检测乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中 Shh mRNA和Shh蛋白的表达,并探讨Shh蛋白与乳腺癌临床病理特征的关系。计数资料比较采用χ2检验,计量资料比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果乳腺癌组织中Shh mRNA表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织(1.54±0.47比0.60±0.38,t=-12.02,P=0.000),Shh蛋白阳性表达率也明显高于癌旁正常乳腺组织[69.6%(32/46)比17.4%(8/46),χ2=25.48,P=0.000],并且其表达水平与乳腺癌的临床分期密切相关,患者临床分期越晚,Shh蛋白表达水平越高[Ⅲ期+Ⅳ期：Ⅰ期+Ⅱ期：77.8%(28/36)比4/10,χ2=5.28,P=0.022]。结论 Shh信号在乳腺癌组织中被激活。 Shh异常表达可能与乳腺癌的发生、发展相关,其可以作为一个潜在的肿瘤标志物应用于临床。
-
谷氨酸激活神经干细胞SHH通路机制的研究
目的 探讨谷氨酸通过N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)激活SHH通路促进神经干细胞增殖的机制.方法 将5只3日龄SD大鼠断头取脑分离神经干细胞(NSC);将NSC分为5组:正常组、谷氨酸刺激组、Conantokin-R组、SHH-shRNA组和shRNA对照组;通过Real-time RCR、Western Blotting、CCK-8检测NSC在NMDAR1受到抑制及SHH被shRNA下调情况下受到谷氨酸刺激后SHH、Nestin的表达变化及细胞增殖能力的变化;采用单因素方差分析中的LSD法进行统计分析.结果 与正常组相比,谷氨酸刺激组和shRNA对照组SHH和Nestin的mRNA和蛋白表达明显上升(均P＜0.05),Conantokin-R组SHH和Nestin的mRNA和蛋白表达无明显变化(均P＞0.05).SHH-shRNA组SHH的mRNA和蛋白表达明显下调(均P＜0.05),Nestin的mRNA和蛋白表达无明显变化(均P＞0.05).结论 谷氨酸通过NMDAR1介导激活SHH通路.
-
高原驻训人员返回平原前后体内氧代谢和SHH信号通路的变化及意义
目的 研究平原部队官兵在高原驻训6个月后返回平原的过程中,体内氧代谢与SHH信号通路的变化情况.方法 选择从平原(海拔200m)进入高原(海拔3960m)驻训的男性官兵80人,年龄20～30(22.3±2.9)岁,在高原驻训6个月后返回平原.在进驻高原前、高原居留6个月及返回平原后第2天,采集空腹静脉血标本,采用分光光度比色法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量,采用ELISA法检测血清SHH的含量,实时定量PCR检测外周血白细胞中SHH mRNA的转录水平,Western blotting检测细胞内SMO和细胞核蛋白GLI2的表达.结果 进驻高原后,血清SOD活性显著降低(P＜0.05),MDA含量显著升高(P＜0.05).外周血SHH蛋白和mRNA表达水平,以及外周血白细胞SMO和细胞核GLI2表达水平在高原驻训时显著高于进驻高原前和返回平原后,但返回平原后仍显著高于进驻高原之前(P＜0.01).结论 高原暴露对体内氧代谢及SHH信号通路具有明显影响,高原低氧环境是激活SHH信号通路的原因之一.
-
白藜芦醇调控猬信号对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响
目的：探讨白藜芦醇（Res）减轻输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化（RlF）的分子机制。方法将48只 SD 大鼠随机分为假手术组（n ＝16）、单侧输尿管梗阻（UUO）模型组（n ＝16）和模型+Res 组（n ＝16）。模型+Res 组于手术当天 ig 给予 Res 20 mg·kg-1，每天1次，分别于梗阻术后第7和14天取其梗阻侧肾组织，用 HE 和 Masson 染色观察肾小管上皮细胞形态变化和 RlF 程度；ELlSA 检测肾组织中猬信号起始蛋白猬蛋白质（SHH）含量；免疫组织化学染色检测 SHH，smoothened（Smo），patched-1（Ptch1）和Gli1、增殖细胞核抗原（PCNA）以及细胞外基质（ECM）成分Ⅲ型胶原蛋白表达；实时荧光定量 PCR 技术检测 Smo，Ptch1和 Gli1 mRNA 的表达。结果 HE 和 Masson 染色显示，UUO 模型大鼠术后 RlF 程度随着梗阻时间延长而加重，Res 治疗能减轻上述纤维化病变；免疫组织化学染色结果显示，与假手术组比较， UUO 模型大鼠肾组织Ⅲ型胶原的表达显著升高（P﹤0.05），并且与细胞增殖相关的 PCNA 也明显高表达（P﹤0.05）；Res 治疗后Ⅲ型胶原和 PCNA 表达水平降低（P﹤0.05）；UUO 模型大鼠肾组织 SHH，Smo 和Gli1表达升高（P﹤0.05），Ptch1表达降低（P﹤0.05），且均可被 Res 逆转（P﹤0.05）。结论 Res 可有效缓解输尿管梗阻所致的 RlF，其机制可能为 Res 下调 SHH 信号活性，抑制细胞增殖，阻碍 ECM 成分合成，进而减轻其在肾间质的累积而改善纤维化。
-
脊髓神经元sonic hedgehog信号通路在小鼠吗啡耐受中的作用
目的 评价脊髓神经元sonic hedgehog(SHH)信号通路在小鼠吗啡耐受中的作用.方法 清洁级健康雌性昆明小鼠,体重20～25 g,8～10周龄.采用皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,连续7d的方法制备吗啡耐受模型.实验Ⅰ 小鼠48只,采用随机数字表法分为2组:正常对照组(C组,n=8)和吗啡耐受组(M组,n=40).于吗啡注射前1d和注射结束后1、3、5、7和14d时测定热痛阈.M组注射结束后各时点热痛阈测定后2h时、C组于后一次热痛阈测定后2h时随机处死8只小鼠,取L4-6脊髓组织.实验Ⅱ 小鼠48只,采用随机数字表法分为6组(n=8):SHH抑制剂环巴胺+吗啡耐受组(CP+M组)、环巴胺溶媒+吗啡耐受组(D1+M组)、SHH激动剂SAG+吗啡耐受组(SAG+M组)、SAG溶媒+吗啡耐受组(D2+M组)、吗啡耐受+环巴胺组(M+CP组)、吗啡+环巴胺溶媒组(M+D1组).于吗啡注射前15 min时,CP+M组腹腔注射环巴胺10 mg/kg,SAG+M组腹腔注射SAG 5 mg/kg.M+CP组吗啡给药结束后1～3d时腹腔注射环巴胺10 mg/kg,1次/d.于吗啡注射前、每天第1次吗啡注射后30 min、吗啡给药结束后1～3d时测定热痛阈.后一次热痛阈测定结束后2h时处死,取L4-6脊髓组织.采用Western blot法检测脊髓SHH信号通路相关蛋白SHH、ptch1、smo、gli1和gli3的表达水平.结果 实验Ⅰ 与C组比较,M组热痛阈于吗啡注射结束后1、3d时降低(P＜0.05),5～14d时差异无统计学意义(P＞0.05),吗啡注射结束后1～5d时脊髓SHH、smo和glil表达上调,l和3d时ptch1表达上调,7d时gli3表达上调(P＜0.05).实验Ⅱ 与D1+M组比较,CP+M组热痛阈升高,脊髓SHH、ptch1、smo、gli1表达下调,gli3表达上调(P＜0.05);与D2+M组比较,SAG+M组热痛阈降低,脊髓SHH、ptch1、smo、gli1表达上调,gli3表达下调(P＜0.05);M+CP组与M+D1组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).与首次吗啡注射后30 min时比较,CP+M组热痛阈于吗啡注射第3～7天及吗啡给药结束后1～3d时热痛阈降低(P＜0.05).结论 小鼠吗啡耐受形成的部分机制与脊髓神经元SHH信号通路激活有关,而维持机制与其无明显关系.
-
脊髓Sonic hedgehog信号通路在大鼠神经病理性痛中的作用
目的 评价脊髓Sonic hedgehog(Shh)信号通路在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 健康雄性SD大鼠72只,8周龄,体重250～ 300 g,采用随机数字表法,将其分为2组(n=36):假手术组(S组)和神经病理性痛组(NP组),采用坐骨神经分支选择性损伤法制备大鼠神经病理性痛模型.分别于术前、术后1、4、7、14、21d时采用up-down法测定机械缩足反应阈(MWT).于术后1、4、7、14、21 d时MWT测定结束后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用Western blot法测定Shh、Patched (Ptch)、Gli1及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;采用实时荧光定量PCR法测定Shh、Ptch及Gli1的mRNA表达;采用免疫组化法测定术后7d时脊髓组织Shh及GFAP表达.结果 与S组比较,NP组术后各时点MWT降低,脊髓组织Shh、Ptch、Gli及其mRNA表达和GFAP表达上调(P＜0.05).Shh主要表达于脊髓背角神经元的胞质及星形胶质细胞周围间隙.结论 脊髓Shh信号通路参与了大鼠神经病理性痛的形成和维持.
-
Hedgehog信号通路在肝细胞癌发生发展中的作用
Hedgehog(Hh)信号通路存在于多种动物体内,对调节胚胎发育及胚胎形成后分化起重要作用,其异常激活参与多种恶性肿瘤的发病过程.近年来研究发现Hh信号通路传导异常可导致肝细胞癌(HCC)发生,并与肿瘤侵袭、转移相关.深入探讨Hh信号通路与HCC的关系,将有助于进一步揭示HCC的发病机制,为HCC的防治提供新的可能途径及作用靶点.
-
胰腺癌SMO靶标治疗研究启示:从中药中发现新药
跨膜蛋白Smoothened(SMO)是音猬因子(sonic hedgehog homology,SHH)信号转导通路的主要成员,在SHH通信过程里发挥桥梁作用.在多种肿瘤组织中均可以检测到SHH的异常表达,胰腺癌干细胞SHH信号的表达明显高于普通胰腺癌细胞.SHH信号与肿瘤干细胞的自我复制,肿瘤血管和基质形成密切相关.使用以环巴胺、GDC-0449等SMO拮抗剂可以抑制SHH信号的异常转导,有效阻止肿瘤的生长和转移.目前已有多种SMO拮抗剂作为抗肿瘤药物进入Ⅰ期或Ⅱ期临床试验,已经有以SMO拮抗剂治疗胰腺癌的Ⅰ期临床试验.作为经典的SMO拮抗剂,环巴胺是从传统药用植物中提取出来的生物碱,这可能为中医药研究者提供思路,从中药中研发更加有效的SMO拮抗剂.
-
Hedgehog信号通路异常对人结肠腺癌多药耐药性的影响
目的:探讨Hedgehog (Hh)信号通路与人结肠腺癌细胞多药耐药的关系.方法:以结肠腺癌敏感细胞株HCT-8和多药耐药细胞株HCT-8/VCR为研究对象,采用Hh信号通路激动剂SAG及抑制剂GANT61进行干预.实验分为4组:HCT-8组、HCT-8/VCR组、HCT-8+SAG组(3 nmol/L SAG干预48 h)以及HCT-8/VCR+GANT61组(5 μmol/L GANT61干预48 h).采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞耐药性及存活率.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别从基因和蛋白水平检测p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及Hedgehog信号通路相关蛋白Smo和Gli1的表达.结果:HCT-8/VCR组Smo、Gli1和P-gp基因及蛋白表达高于HCT-8组(P＜0.05); HCT-8+SAG组24和48 h时的细胞存活率及Smo、Gli1、P-gp基因和蛋白表达水平均高于HCT-8组(P＜0.05); HCT-8/VCR+GANT61组24和48 h时的细胞存活率及Smo、Gli1、P-gp基因和蛋白表达均低于HCT-8/VCR(P＜0.05).结论:人结肠腺癌细胞多药耐药性与Hh信号通路异常激活有关.
-
SHH蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义
目的：探讨胚胎发育信号通路蛋白SHH在胰腺癌组织及其临床意义。
方法：用免疫组化法检测45例胰腺癌组织与30例胰腺良性病变组织中SHH的表达，并分析SHH表达与胰腺癌患者临床病理特征及预后的关系。
结果：胰腺癌组织中的SHH蛋白阳性表达率明显高于胰腺良性病变组织（66.67%vs.0.00%， P<0.05）。胰腺癌组织中的SHH蛋白的阳性表达与是否患者的淋巴节转移、肿瘤分化程度、TNM分期明显有关（均P<0.05）。SHH表达阳性表达胰腺癌患者与SHH表达阴性患者的3年生存率及中位生存时间差异均无统计学意义（26.67%vs.20.00%；18.4个月vs.15.6个月，均P>0.05）。
结论：SHH在胰腺癌组织中的阳性表达率增高，其阳性表达可能与患者的疾病进展有关，但与患者的远期预后关系尚不明确。 -
缺氧状态下人视网膜色素上皮细胞中音猥因子与血管内皮生长因子表达的关系
目的 观察缺氧状态下人视网膜色素上皮(hRPE)细胞中音猥因子(Shh)与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系.方法 传代培养hRPE细胞,取对数生长期3～6代细胞用于实验.将hRPE细胞分为正常对照组、缺氧实验组及环巴明抑制组.缺氧实验组加入100 μmol/L CoCl2,环巴明抑制组于制作缺氧状态前lh加入20μnnol/L的环巴明进行预处理.3组细胞培养4、8、12、24 h.采用荧光定量聚合酶链反应检测3组hRPE细胞中Shh、VEGF mRNA表达.采用酶联免疫吸附法检测正常对照组、缺氧实验组细胞培养上清液中Shh、VEGF蛋白表达.采用Pearson相关性分析法分析缺氧实验组hRPE细胞中Shh、VEGF mRNA表达与蛋白表达之间的关系.结果 正常对照组可见少量Shh、VEGF mRNA及蛋白表达.缺氧实验组Shh、VEGFmRNA及蛋白表达较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(F=178.364、183.732、77.456、91.572,P＜0.01).环巴明抑制组Shh、VEGF mRNA表达较缺氧实验组明显降低,差异有统计学意义(F=68.745、121.834,P＜0.01).相关性分析结果显示,缺氧实验组hRPE细胞中Shh蛋白表达与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.942,P＜0.05);Shh mRNA表达与VEGF mRNA表达呈正相关(r=0.970,P＜0.01).环巴明抑制组hRPE细胞中Shh mRNA表达与VEGF mRNA表达无相关性(r=0.915,P＞0.05).结论 缺氧状态下hRPE细胞中Shh与VEGF表达呈正相关.
