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金雀异黄素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究
目的 探讨金雀异黄素(genistein,GEN)诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制.方法 用0、5、10、20 μmol/L GEN处理MDA-MB-231 细胞24 h.采用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞仪测定不同浓度GEN对 MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blotting检测不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、活性半胱天冬酶8(cleaved caspase-8)、Fas、FasL蛋白表达水平.采用实时RT-PCR分析不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas、FasL基因表达水平.多组均数比较采用方差齐性检验后进行单因素方差分析.结果 在GEN作用24 h后,0、5、10和20 μmol/L组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为(3.00±1.41)%、(14.02±1.57)%、(27.5±1.52)%、(48.90±1.44)%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加(F=528.119,P=0.000).两两比较显示:各浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05).0、5、10和20 μmol/L组诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为(3.40±0.40)%、(9.34±1.34)%、(19.26±0.93)%、(27.41±1.12)%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加(F=379.573,P=0.000).两两比较显示:各浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05).Western blotting结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FADD、cleaved caspase-8、FasL蛋白表达升高(F=368.621、456.744、419.129,P均=0.000),Fas蛋白表达差异无统计学意义(F=0.800,P=0.528);与10(μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL蛋白表达降低有统计学意义(F=92.235,P=0.001).实时RT-PCR结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FasL mRNA表达升高(F=646.983,P=0.000),Fas mRNA表达差异无统计学意义(F=1.556,P=0.274);与10 μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL mRNA表达降低有统计学意义(F=52.562,P=0.020).结论 GEN通过上调Fas/FasL途径中FasL基因表达诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.
关键词： 乳腺肿瘤 细胞凋亡 金雀异黄素 MDA-MB-231细胞 Fas/FasL途径 -
基于Fas/FasL途径的金匮肾气丸对肾阳虚模型睾丸细胞凋亡的影响
目的 以“劳倦过度、房室不节”肾阳虚小鼠为模型,从Fas/FasL途径探讨肾阳虚小鼠睾丸组织细胞凋亡发生机制及金匮肾气丸的治疗作用.方法 以Colldege效应诱导雄性小鼠房室不节,用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,建立肾阳虚小鼠模型.4周后,分别用普通光学显微镜和电子显微镜进行睾丸组织的形态学观察,TUNEL法测定小鼠睾丸生殖细胞的凋亡率,利用RT-PCR检测小鼠睾丸组织Fas/FasL mRNA表达,用免疫组织化学分析Fas、FasL蛋白表达差异.结果 ①模型组小鼠睾丸组织曲细精管内支持细胞及各级生精细胞层次不清,结构破坏明显,金匮肾气丸组和睾酮组小鼠睾丸生殖细胞较模型组有一定程度改善.②在透射电镜下,模型组小鼠睾丸细胞中,可以观察到处于凋亡不同阶段的初级精母细胞,凋亡小体.③模型组TUNEL阳性细胞较正常组显著增加,主要为精原细胞和初级精母细胞,并可见精子细胞凋亡.金匮肾气丸治疗组睾丸细胞凋亡率明显低于模型组,但高于正常组,凋亡细胞类型以精原细胞和初级精母细胞为主.④模型组与正常组相比,Fas/FasL的mRNA表达量明显增高,金匮肾气丸组和睾酮组Fas、FasL mRNA表达较正常组稍高,但与模型组比较,明显降低.⑤模型组Fas在支持细胞和精原细胞及初级精母细胞高表达增多,精子细胞高表达增加明显;模型组FasL高表达细胞明显增多,在支持细胞、各级生精细胞及精子细胞、精子中均有分布,无明显定位特异性;金匮肾气丸组和甲基睾酮对肾阳虚模型小鼠的Fas/FasL均有明显的抑制作用.结论 房劳-倦劳所致肾阳虚小鼠的睾丸内生殖细胞凋亡率上升,通过Fas、FasL的外源性死亡通路引起生殖细胞凋亡.金匮肾气丸可以通过调节Fas/FasL表达,降低小鼠睾丸生殖细胞凋亡.
关键词： 肾阳虚 睾丸组织 细胞凋亡 金匮肾气丸 Fas/FasL途径 -
激活诱导的细胞死亡与细胞周期的关系
机体免疫系统的平衡有赖于细胞增殖、分化和细胞死亡之间的适当关系. 淋巴细胞中, 激活诱导的细胞死亡(AICD)是免疫系统维持稳定的一种重要机制.细胞周期参与细胞的发育分化和死亡.因此,阐明免疫细胞发生激活诱导的细胞死亡与细胞周期的关系具有重要的意义.
关键词： 细胞死亡 细胞周期 T细胞 B细胞 Fas/FasL途径
