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氯化锰诱导原代星形胶质细胞的过度活化
目的 探讨氯化锰(MnCl2)对于原代星形胶质细胞的影响.方法 原代分离星形胶质细胞,培养后用星形胶质细胞特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的抗体鉴定细胞,用不同剂量的MnCl2处理24 h后MTT法检测星形胶质细胞的存活率,高内涵分析仪检测细胞面积和GFAP的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS的变化.结果 原代分离的细胞鉴定为星形胶质细胞,不同剂量的MnCl2处理24 h后,星形胶质细胞的存活率随MnCl2剂量的升高呈现剂量依赖性下降,细胞面积缩小,GFAP表达增加,细胞内ROS增多.结论 MnCl2可以导致星形胶质细胞的过度活化.
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丙烯酰胺染毒小鼠海马组织结构和Caspase-3、GFAP表达的变化
目的 探讨丙烯酰胺染毒对雄性小鼠海马组织结构和Caspase-3、GFAP表达的影响。方法 健康雄性昆明种小鼠40只，随机分为正常对照组和低、中、高浓度3个剂量实验组，每组10只。对照组小鼠腹腔注射生理盐水；实验组小鼠分别代以5、30和60mg/(kg·d)丙烯酰胺水溶液腹腔注射。在10d时分别处死各组小鼠，快速取出海马，Zamboni固定液固定，石蜡包埋，常规制片，苏木素-伊红(HE)染色，Caspase-3和GFAP免疫组织化学染色，光学显微镜观察。结果 实验组小鼠海马同对照组相比显微结构未见明显改变。与对照组比较，各剂量组小鼠海马神经元Caspase-3阳性表达明显增强(P＜0.01)，但各剂量组间未见明显改变(P＞0.05)；各剂量组小鼠海马胶质细胞GFAP阳性表达明显增强(P＜0.01)，高剂量组表达较低、中剂量组增强(P＜0.05)。结论 丙烯酰胺染毒可造成小鼠海马神经元和神经胶质细胞损伤。
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NO供体/前体介入给药对MCAO大鼠脑缺血 保护作用的实验研究
目的 探讨NO供体/前体介入给药对MCAO大鼠脑缺血保护作用的实验研究.方法 于2013年3月-2014年3月在大连大学附属中山医院实验中心制作MCAO大鼠模型78只,随机分为5组,NG组18只、L-ARG组18只、GBE组18只、MCAO模型组18只、sham组6只.给药组按照处死时间分为两个亚组,每组6只.采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,缺血2 h后再通并局部介入给药,分别于再灌注3 h及24 h经行为学评价后处死动物,采用特异性抗体GFAP标记不同时间点星形胶质细胞的激活情况并检测血清NO、MDA含量.结果 给药组24 h Longa评分情况[(1.63±0.21)分、(1.66±0.19)分、(1.87±0.22)分]明显优于MCAO大鼠模型组[(2.89±0.29)分],差异有统计学意义(P<0.05).各组再灌注3 h及24 h血清NO及MDA含量,MCAO模型组、L-ARG组及GBE组明显高于Sham组(P<0.05).结论 局部介入给予NO供体NG、前体ARG可以有效抑制星形胶质细胞活化,对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用.
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补阳还五汤对脊髓损伤后胶质瘢痕及GFAP表达的影响
目的:探讨补阳还五汤对脊髓损伤(SCI)后胶质瘢痕及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法:成年雌性SD大鼠24只,随机分为假手术组、实验组和对照组,每组8只,实验组和对照组在C3～4右外侧索横断后分别以补阳还五汤和蒸馏水连续灌胃8 w,取脊髓损伤部位,行苏木素染色和GFAP免疫组化染色,对胶质瘢痕的体积、GFAP阳性细胞相对面积和相对灰度值进行测定.结果:实验组胶质瘢痕的体积小于对照组(P＜0.01);实验组GFAP阳性细胞相对面积和相对灰度值明显低于对照组(P＜0.01).结论:补阳还五汤能减少脊髓损伤后胶质瘢痕的体积,抑制星形胶质细胞的活化和增生.
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电针"足三里"穴对内脏痛大鼠延髓内脏带内c-fos和GFAP表达的影响
目的:探讨电针时内脏痛大鼠模型疼痛行为学方面的影响以及延髓内脏带中即刻早期基因c-fos和胶质原纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)在针刺镇痛中的表达及其意义.方法:雄性SD大鼠32只,随机分为空白对照组、内脏痛组、电针组和电针后内脏痛组,每组8只.将0.6%乙酸(V/V,10 mL/kg)注射入大鼠腹腔内造成内脏痛模型.电针取双侧"足三里"穴,断续波,频率50 Hz,强度2～5 V,持续30 min.观察并计算各组动物的疼痛指数(visceral pain index,VPI)后处死动物,延髓切片进行抗Fos蛋白或抗GFAP单一或双重标记的免疫组织化学染色,观察并记数c-fos和GFAP在中枢延髓内脏带内的表达.结果:内脏痛组和电针后内脏痛组出现典型的扭体反应,其中内脏痛组更明显,而空白对照组和电针组大鼠行为学无变化.各组c-fos阳性神经元、GFAP阳性星形胶质细胞表达主要位于延髓内脏带内孤束核、迷走神经背侧运动核.除了空白对照组,内脏痛组、电针组和电针后内脏痛组中c-fos和GFAP表达明显增高;3组之间比较c-fos和GFAP表达内脏痛组高,电针后内脏痛组其次,电针组低(P＜0.01).结论:电针"足三里"穴对内脏痛模型大鼠的疼痛具有良性调节作用,其机制可能与其调节延髓内脏带内免疫阳性神经元和星形胶质细胞的功能活动有关.
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清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响
目的:探讨清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响.方法:参照Longa法复制大鼠脑缺血模型,清开灵有效组分干预,免疫组化分析缺血脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酸性钙结合蛋白(S-100β)表达的组间与时效特征.结果:脑缺血后GFAP、S-100β表达增强.用药可增强缺血12h GFAP、S-100β的表达,促进星形胶质细胞的激活,对受损神经元发挥保护作用;至缺血24h,除珍珠母水解液组外,其余用药组促进GFAP、S-100β表达的作用减弱.结论:清开灵有效组分促进星形胶质细胞活化的作用具有明显时效性和相对特异性,黄芩苷、栀子苷的作用在于促进星形胶质细胞的反应性增生,而胆酸、珍珠母水解液则表现为对星形胶质细胞功能活化的促进作用.
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电针对甲状腺区切口痛大鼠颈段脊髓胶质细胞活性的影响
目的:观察电针(electroacupuncture,EA)不同穴位对甲状腺区切口痛大鼠颈段脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞活性的影响,探讨针刺镇痛行甲状腺手术的机制.方法:Wistar雄性大鼠60只随机分为正常组、模型组、扶突组、合谷-内关组、足三里-阳陵泉组,每组12只.除正常组外,余组沿大鼠颈中线做长约1.5 cm的纵行切口,制作甲状腺区切口痛模型.扶突组、合谷-内关组、足三里-阳陵泉组于造模后4h、24 h、48 h分别电针双侧“扶突”、“合谷”“内关”穴、“足三里”“阳陵泉”穴,1次/d,连续3 d;正常组、模型组不予其他处理.采用热辐射测痛仪测量大鼠切口部位热痛阈;用荧光定量RT-PCR、蛋白免疫印迹法(WB)分别检测各组大鼠干预后颈段(C2-C6)脊髓小胶质细胞活化标记物(Iba1、CD11b)及星形胶质细胞特异性标记物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)基因及蛋白的表达.结果:干预结束后,与正常组相比,模型组大鼠颈部的热痛阈值明显降低(P＜0.05),C2-C6脊髓内Iba1、CD11b及GFAP mRNA与蛋白表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01);与模型组相比,扶突组和合谷-内关组大鼠的热痛阈值显著升高(均P＜0.05),足三里-阳陵泉组大鼠的热痛阈值变化不明显(P＞0.05),扶突组Iba1、CD11b、GFAP基因和蛋白的表达较模型组降低(均P＜0.05),合谷-内关组大鼠脊髓中Iba1 mRNA、CD11b蛋白、GFAP mRNA和蛋白表达明显低于模型组(均P＜0.05),足三里-阳陵泉组脊髓Iba1、CD11b和GFAP蛋白与模型组相比差异无统计学意义(均P＞0.05);足三里-阳陵泉组大鼠C2-C6颈段脊髓内Iba1 mRNA、CD11b mRNA与蛋白表达均明显高于扶突组(P＜0.01,P＜0.05),Ibal mRNA、CD11b蛋白表达水平高于合谷-内关纽(P＜0.05),GFAP mRNA与蛋白表达均明显高于扶突穴组与合谷-内关组(均P＜0.05).结论:电针“扶突”或“合谷”“内关”可缓解大鼠颈部急性切口痛,该作用可能与其下调脊髓内小胶质细胞和星形胶质细胞的活性密切相关.
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脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型
目的:建立机械性损伤引起星形胶质细胞反应性增生的体外培养模型.方法:体外分离培养新生Wistar大鼠脊髓的星形胶质细胞,培养至16d进行划伤实验,分为划伤组和对照组(未划伤);每组有7个时间点,分别为划伤后0、2h、6h、12h、24h、48h、72h.用免疫组织化学的方法进行染色,观察划伤组和对照组星形胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达, 并且进行半定量图像分析.结果:从划伤后2h～72h,同对照组相比,划伤组星型胶质细胞明显增生,细胞内GFAP的表达明显增高.结论:星形胶质细胞反应性增生的体外培养划伤模型能模拟脊髓组织受到机械损伤后,胶质细胞反应性增生及细胞内GFAP表达升高的过程.
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补肾益脑灸法通过Wnt信号通路影响围绝经期抑郁症大鼠海马神经发生
目的:基于Wnt信号通路观察补肾益脑灸法对围绝经期抑郁症大鼠海马神经干细胞分化标记物表达的影响并探讨其治疗机制.方法:60只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、假手术组、西药组和艾灸组5组,采用去势和慢性不可预见刺激结合制备围绝经期抑郁症大鼠模型.连续治疗28 d,观察大鼠一般情况变化、动情周期、体质量及糖水消耗实验结果,运用ELISA法检测海马组织中的GFAP、Tuj-l、GSK-3β、β-catenin,RT-PCR法检测海马组织中的GSK-3βmRNA、β-catenin mRNA表达.结果:遣模后其他组较空白组表现出抑郁行为,而治疗后抑郁行为好转,西药组、艾灸组及假手术组较模型组海马组织中GFAP、GSK-3β及GSK-3βmRNA的表达量增加,Tuj-1、β-catenin及β-catenin mRNA表达量有所减少.结论:补肾益脑灸法可以通过调节海马Wnt通路GSK-3β、β-catenin的表达调控海马神经干细胞的定向分化,对围鲍经期抑郁症起到治疗作用.
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黄连解毒汤及其有效部位调控星形胶质细胞网络对MCAO大鼠丘脑损伤的保护
目的:观察黄连解毒汤水提物及3个有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)对中动脉栓塞(MCAO)大鼠丘脑的保护作用.方法:线栓法建立MCAO大鼠模型,雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、黄连解毒汤水提物(800 mg·kg-1)、总生物碱组(44 mg.kg-1)、总黄酮组(50 mg.kg-1)、总环烯醚萜组(80 mg· kg-1),连续ig给药7d,每天给药1次.HE染色观察丘脑病理学改变;高效液相-色谱荧光法检测丘脑谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量;免疫荧光单标染色法检测丘脑谷氨酸脱羧酶(GAD65)的表达;免疫荧光双标染色法检测星形胶质细胞纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)表达.结果:中动脉栓塞7d大鼠丘脑部分神经元变性,和假手术组相比,丘脑Glu,GABA含量降低(P＜0.05),GAD65表达减弱(P＜0.05),GFAP,Cx43表达增强(P＜0.01).黄连解毒汤水提取物及3个部位均可不同程度减轻丘脑神经元变性程度.总黄酮可明显上调丘脑GAD65表达,降低GFAP,Cx43蛋白表达,差异较模型组明显(P＜0.01),促进丘脑Glu,GABA含量恢复至正常水平.黄连解毒汤水提取物、总生物碱组、总环烯醚萜组大鼠丘脑Cx43蛋白表达较模型组明显上调(P＜0.01),水提物组大鼠GAD65表达也较模型组明显增高(P＜0.05).黄连解毒汤水提取物、总生物碱组、总环烯醚萜组大鼠丘脑GFAP蛋白表达较模型组没有显著性差异,GABA含量明显低于假手术组(P＜0.05).结论:中动脉栓塞后,丘脑可出现神经细胞变性,递质氨基酸含量减少,星形胶质细胞异常活化,GFAP,Cx43蛋白表达异常.黄连解毒汤总黄酮可减轻脑缺血后丘脑神经细胞损伤,其作用与抑制星形胶质细胞异常活化,调节GFAP,GAD65蛋白表达关系密切.
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大鼠脑缺血对癫痫敏感性和脑内胶质原纤维酸性蛋白免疫反应的影响
本实验采用改良栓线法制备大鼠右侧大脑中动脉(Middle cerebral artery,MCA)缺血再灌注模型,腹腔注射阈下剂量(35mg/kg*2d)戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)制备慢性癫痫点燃模型.通过观察大鼠的行为,来检测其癫痫敏感性的改变.分别用硫堇染色、免疫细胞化学方法观察PTZ点燃脑缺血大鼠的相应脑区的神经病理学改变及脑内胶质原纤维酸性蛋白(glia fibrillary acidic protein ,GFAP)免疫反应活性(immunoreactivity,IR)的变化.结果显示:脑缺血后大鼠癫痫敏感性明显增强(P＜0.05).右背侧海马CA1、CA3区锥体细胞、额叶皮质神经元不同程度的脱失(P＜0.05)并出现大量GFAP免疫反应阳性的星形胶质细胞,且细胞体积变大,突起变长变粗,免疫染色强度明显增强(P＜0.05),提示脑缺血大鼠癫痫敏感性增强,可能与海马及额叶皮质的神经元脱失及星形胶质细胞活化增生有关.
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P38MAPK在大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成早期对GFAP、vimentin表达的调控作用
目的 探讨在大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质瘢痕形成早期,p38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)对神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及波形蛋白(vimentin)表达的影响.方法将大鼠随机分为假手术组(sham group)、模型组(modelgroup)、P38 MAPK特异性激动剂anisomycin组(anisomycin group)和P38 MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB203580group).脊髓夹伤模型制作成功后即分别在损伤区硬脊膜下注射0.9％氯化钠溶液、anisomycin和SB203580各10 μL,假手术组只打开椎板暴露脊髓,不做其他处理.于术后第1、3、7及14天利用BBB评分评定大鼠后肢运动功能,用Western blot和免疫荧光标记技术检测GFAP和vimentin表达.结果术后第14天,模型组BBB评分显著低于假手术组(P＜0.01);SB203580组大鼠BBB评分显著高于模型组(P＜0.05)但仍低于假手术组(P＜0.01),而anisomycin组则显著低于模型组(P＜0.05).术后第7和14天,模型组GFAP、vimentin的表达显著高于假手术组(P＜0.01);SB203580组GFAP、vimentin的表达均显著低于模型组(P＜0.05)但仍高于假手术组(P＜0.05),而anisomycin组GFAP、vimentin的表达均显著高于模型组(P＜0.05).结论SCI后胶质瘢痕形成早期P38 MAPK可调控GFAP、vimentin的表达,抑制P38 MAPK可降低GFAP、vimentin的表达,减轻大鼠SCI后胶质瘢痕形成,促进神经功能的恢复.
关键词： 脊髓损伤 p38丝裂原活化蛋白激酶 GFAP 波形蛋白 -
IL-1β通过JAK2-STAT3促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成
目的 探讨IL-1β促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成的机制.方法 将大鼠随机分为模型组(采用钳夹脊髓的方法 建立SCI模型)、假手术组(sham group)、IL-1β特异性抑制剂组(IL-1RA)、IL-1β组(IL-1β)及IL-1β+JAK2-STAT3特异性抑制剂组(IL-1β+AG490).假手术组只打开椎板,不作其他处理.在术后相应时间点(术后8及12 h和1、3、7及14 d)进行大鼠后肢BBB评分,用Western blot、免疫荧光和免疫组化技术检测GFAP、vimentin、p-STAT3的表达变化.结果 p-STAT3(术后第8 h和第12 h)及GFAP、 vimentin(术后第7和第14天)表达趋势:模型组显著高于假手术组(P<0.01),IL-1RA组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β+AG490组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β组均显著高于模型组(P<0.05).术后第14天,BBB评分模型组显著低于假手术组(P<0.01),IL-1RA组显著高于模型组(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.01);IL-1β组显著低于模型组(P<0.05).结论 IL-1β可通过JAK2-STAT3促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成,抑制IL-1β或JAK2-STAT3可减弱胶质瘢痕形成,促进脊髓神经功能恢复.
关键词： 脊髓损伤 IL-1β JAK2-STAT3 GFAP Vimentin -
大鼠脑内星形胶质细胞对低血压的反应及其与神经元的关系
目的观察大鼠血压降低后脑内星形胶质细胞(AS)和神经元的反应及其相互关系. 方法硝普钠静脉注射制作瞬间低血压模型,用抗Fos、抗GFAP和抗TH三重标记免疫组织化学方法,观察GFAP和Fos表达和分布规律及其与TH阳性神经元的关系. 结果在脑内血压调节相关区域均出现GFAP和Fos表达,两者部位一致,且有亚核分布特点;在延髓和蓝斑等部位Fos或TH 单标,或Fos与TH双标阳性神经元周围有GFAP阳性纤维包绕,形成3种形式的复合体样结构. 结论 AS对血压变化反应敏感,并具机能定位特异性,推测星形胶质细胞可能与神经元共同参与脑内的信息处理.
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C-FOS、GFAP表达与心理应激脑机制的研究
近年研究发现在心理应激源影响下,神经元C-FOS在边缘系统和感觉中枢区域有广泛的表达[1,2].已有研究证明星形胶质细胞(GFAP)能敏感地对多种刺激(如伤、疼痛等)起反应.本文运用免疫组化ABC方法,观察大鼠应激后,GFAP、C-FOS的反应变化.
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星形胶质细胞瘤中Prx1、Prx6和GFAP的表达情况及其与肿瘤恶性程度的关系研究
目的 探讨星形胶质细胞瘤中Prx1、Prx6和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况及其与肿瘤恶性程度的关系.方法 采用回顾性研究选取2011年9月至2015年9月收治64例星形胶质细胞瘤患者作为研究对象,另外选取同期接受治疗的需行手术切除的正常脑组织患者23例作为正常对照组.采用SP法与RT-PCR试验对星形胶质细胞瘤与正常脑组织中Prx1、Prx6、GFAP的表达情况及其与恶性程度的相关性;Prx1、Prx6和GFAP的mRNA表达水平及其与恶性程度的相关性进行检测分析.结果 Prx1、Prx6的阳性表达情况为:Ⅳ级胶质瘤>Ⅲ级胶质瘤>Ⅱ级胶质瘤>正常脑组织;GFAP阳性表达情况:正常脑组织>Ⅱ级胶质瘤>Ⅲ级胶质瘤>Ⅳ级胶质瘤,两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05);不同恶性程度胶质瘤与GFAP阳性率、Prx1及Prx6阳性率之间的相关性系数分别为r 1=0.726、r 0.689、r 3=-0.541,P均<0.05.由此可以看出,GFAP阳性率与胶质瘤恶性程度呈负相关,Prx1及Prx6阳性率与胶质瘤恶性程度呈正相关.Prx1 mRNA、Prx6 mRNA的表达水平为:Ⅳ级胶质瘤>Ⅲ级胶质瘤>Ⅱ级胶质瘤>正常脑组织;GFAP表达水平为:正常脑组织>Ⅱ级胶质瘤>Ⅲ级胶质瘤>Ⅳ级胶质瘤,两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05);不同恶性程度胶质瘤与GFAP mRNA、Prx1 mRNA及Prx6 mRNA表达水平之间的相关性系数分别为r 1=0.665、r 2=0.639、r 3=-0.501,P均<0.05.由此可以看出,GFAP mRNA表达水平与胶质瘤恶性程度呈负相关,Prx1 mRNA及Prx6 mRNA表达水平与胶质瘤恶性程度呈正相关.结论 星形胶质细胞瘤中Prx1、Prx6表达水平较高,GFAP表达水平较低,GFAP阳性率与胶质瘤恶性程度呈负相关,Prx1及Prx6与胶质瘤恶性程度呈正相关.Prx1、Prx6及GFAP可作为临床判定星形胶质细胞瘤的恶性程度的重要标志物.
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益智治呆方通过干预神经胶质细胞治疗老年痴呆症的大鼠实验研究
目的 观察益智治呆方对 β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织星形胶质细胞蛋白(GFAP)表达及对乙酰胆碱酯酶、过氧化氢酶活性的影响,分析益智治呆方治疗老年痴呆症患者的具体作用途径.方法 选取30只大鼠,平均分成对照组(脑内注射5μl生理盐水)、模型组(脑内注射Aβ1-42,10μg/5μl)以及AD模型联合益智治呆方组(治疗组,脑内注射Aβ1-42,10μg/5μl).建模成功后治疗组采用益智治呆方0.5 mg/(kg·d)灌胃,对照组和模型组采用等量生理盐水灌胃.持续喂养之后取脑组织分析病理改变状况,使用免疫染色法检测Aβ 标记部位与神经细胞毒性,应用Western blot进行GFAP检测.分析三组大鼠行为学结果 .结果治疗组大鼠以及模型组大鼠脑组织切片当中的海马中央还有皮质中线旁注射区,存在大小不同的Aβ1-42阳性颗粒;神经细胞标记抗体染色之后,在模型组大鼠以及治疗组大鼠注射使用Aβ的脑组织海马区以及皮质区能够发现神经细胞的大小不够均匀,同时少数神经细胞出现变形,细胞带明显出现损伤,细胞数量显著下降,治疗组大鼠的病变程度与模型组对比要轻,同时对照组大鼠无上述变化(P<0.05).治疗组大鼠在使用益智治呆方进行治疗之后,显著降低了神经元的损伤程度,同时降低GFAP表达水平.造模之后模型组大鼠的反应显著下降,电击次数显著上升(P<005),治疗组大鼠逃避反应更加敏感,电击次数显著下降(P<005).结论 通过应用益智治呆方,能够有效降低Aβ 模型鼠GFAP表达水平,保护神经细胞,减轻脑组织损伤程度.
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计算机图像分析与人工计数方法在癫痫脑组织GFAP免疫组化中的对比研究
目的 对比计算机图像分析与人工计数阳性细胞方法 在检测GFAP阳性细胞中应用,探讨计算机图像分析代替人工计数的可行性及优缺点.方法 应用正常组、癫痫组以及灵芝孢子粉组三组大鼠切25μ厚冰冻切片,常规GFAP免疫组化染色.人工计数GFAP阳性细胞,同时用Image-Pro PIus分析图片的积分光密度,对比各组间差异以及两种方法 之间的相关性.结果 两种方法 都能检测出各组问存在差别,结果 具有相关性.结论 用人工计数方法 和计算机图像处理结果 具有正相关关系,其得出的结论 也一致,在某些可代替人工技术方法 用于免疫组化分析.
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实验性大鼠颅脑损伤后GFAP的表达研究
目的:通过建立针刺颅脑损伤动物模型,研究颅脑损伤后星形胶质细胞随损伤时间的变化规律.方法:采用针刺法复制大鼠脑挫伤模型,造成右顶叶局限性脑挫伤,于伤后不同时间将其处死,取脑组织,用免疫组化方法及图像分析技术检测脑组织中GFAP的含量变化,并与正常对照组进行比较.结果:GFAP随损伤时间会出现规律性变化,呈现上升后下降的趋势,伤后3天表达达高,伤后21天时基本恢复正常.且各时间段双侧大脑表达无明显差异.结论:在针刺法致脑损伤模型中星形胶质细胞参与了颅脑损伤后的修复过程,其标志性蛋白GFAP随损伤时间会出现规律性改变.
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海人酸致痫大鼠脑内白蛋白、S100B及GFAP动态表达的研究
目的 通过测定海人酸(kainic acid,KA)致痫大鼠不同时间点脑脊液及脑组织中白蛋白、S100B蛋白及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达量,探讨白蛋白、S100B蛋白和GFAP表达量变化与癫痫的关系.方法 经SD大鼠侧脑室注射KA制备癫痫大鼠模型,对照组注射生理盐水.各模型组于造模后6h、24 h、3d和7d四个时间点,对照组于注射生理盐水后6h,分别采用ELISA方法测定脑脊液白蛋白和S100B蛋白水平,以免疫组化法检测脑组织中白蛋白、S100B和GFAP表达,HE染色观察海马CA3区细胞及结构变化.结果 (1)脑脊液:模型组6h时白蛋白水平高于对照组(P＜0.05),模型组其余时间点与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);其中,模型组7d、3d时白蛋白水平低于6h时(均P＜0.05).模型组6h、24 h、3d和7d4个时间点脑脊液S100B水平均高于对照组(均P＜0.05);模型组4个时间点间两两比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),其中以模型组3d时高.(2)脑组织:模型组24 h及模型组6h侧脑室室管膜白蛋白表达均高于对照组(均P＜0.05),3d和7d时与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组四个时间点两两比较,模型组3d、7d时均低于模型组6 h(P＜0.05),模型组7d时亦低于其他2个模型组(均P＜0.05).模型组4个时间点海马区S100B表达均高于对照组(均P＜0.05);模型组四个时间点两两比较,模型组24 h、3d和7d时均高于模型组6h时(P＜0.05),且模型组7d时低于模型组3d时(P＜0.05).模型组3d、7d时海马区GFAP表达均高于对照组(均P＜0.05),其余时间点与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);模型组四个时间点两两比较,模型组3d、7d时均高于模型组24 h与6h时(均P＜0.05),且7d时亦高于3d时(P＜0.05).(3)HE染色显示,模型组6h时海马CA3区神经元排列紊乱、分散,细胞多形性改变,部分细胞核深染;24 h时细胞由圆形改变为多形性改变;3d和7d时,核深染的细胞数增加,细胞排列层次减少、紊乱,细胞坏死.结论 癫痫发作后脑脊液中白蛋白、S100B及脑组织中白蛋白、S100B及GFAP表达增高.
