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SYBR实时定量PCR法评价药物抗鸭乙肝病毒方法的研究
先天感染鸭乙肝病毒(D-HBV)动物模型是国内外筛选抗乙肝病毒(HBV)药物、研究药物作用机理较为公认的模型[1,2],采用SYBR实时定量PCR方法筛选动物模型并定量观察用药前后血清DHBV-DNA水平变化有利于客观评价药物疗效.
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登革Ⅱ型病毒SYBR GreenⅠqRT-PCR方法的建立
目的 建立敏感、特异、快速的检测登革Ⅱ型病毒(DENV-2)SYBR Green Ⅰ qRT-PCR方法.方法 根据GenBank上发表的DENV-2株核苷酸序列.应用Primer Express 3.0软件在保守区设计特异性引物,优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件,利用Sanger测序验证该方法的特异性和敏感性.结果 该方法与其他血清型登革病毒、流感病毒等均无交叉反应,低检出20个病毒拷贝/μl RNA.检测14份已知阳性和阴性血清,结果与预期一致.结论 本研究建立的DENV-2 SYBR Green Ⅰ qRT-PCR特异性强、敏感性高,可用于输入性DENV-2早期感染诊断.
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染料法实时荧光PCR检测慢性乙型重型肝炎患者外周血克隆特异性αβT淋巴细胞
以染料法(SYBR Green I)实时荧光PCR并结合基因熔解曲线峰形来监测慢性乙型重型肝炎(慢乙重肝)患者(健康献血者为对照)外周血T细胞受体B链基因(TCRBV)克隆特异性扩增情况,从而可能反映慢乙重肝患者对HBV感染的免疫应答状态.
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SYBR green Ⅰ实时荧光PCR结合熔解曲线检测HBV B和C基因型的研究
国内外研究表明HBV基因型与病毒的感染途径、基因突变、疾病进程、抗病毒药物疗效有一定的关系[1-3]引,了解HBV基因型分布,追溯感染源对判断预后、监测抗病毒用药疗效、选择个体化治疗方案等具有重要应用价值.目前根据全基因序列同源性>92%或S区基因序列同源性≥96%,HBV分为A~H 8个基因型,在亚洲主要是A~F[4],国内主要基因型为B和C型.
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耳鸣大鼠NMDA受体亚型1、2A、2B的表达研究
目的 研究耳鸣大鼠听皮层NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸,N-methyl-D-aspartate)受体亚型1、2A、2B(NR1、NR2A、NR2B)的表达变化,从而推测其在耳鸣的发生中可能的作用机制.方法 按照随机化原则将动物分成3组,每组9只:A组为耳鸣模型组、B组为生理盐水组、C组为空白对照组.A组通过腹腔注射水杨酸钠并用食物抑制法进行验证.造模成功后运用核酸荧光染料SYBR Green实时荧光定量PCR(Polymerase Chain Reac- tion,聚合酶链反应)方法检测NMDA受体三种亚型的表达情况.结果 NRI在A组的表达显著低于C组(P<0.05),NR2A在A组的表达则显著高于C组(P<0.05),而A、C两组之间NR2B的表达差异比较无统计学意义(P>0.05).NMDA受体三种亚型B、C两组之间表达差异比较均无统计学意义(P>0.05).A组NR2A、NR2B与NR1表达量的比值较C组均增大.结论 耳鸣大鼠听皮层NMDA受体调节亚基的调控作用增大,突触局部受体蛋白质合成改变.听皮层发生了与NMDA受体相关的可塑性变化.这可能是耳鸣产生的机制之一.
关键词: 受体亚型 N-甲基-D-天冬氨酸 耳鸣 听皮层 SYBR Green荧光定量PCR -
应用荧光定量PCR检测急性白血病微小残留病的临床意义
对于完全缓解的白血病患者,体内存在的微小残留病(MRD)是复发的主要根源?本实验是通过双链DNA结合SYBR Green I的实时PCR方法应用免疫球蛋白重链(IgH)和T细胞受体(TCR)基因重排作为ALL微小残留病的检测靶基因,实验证明: MRD可以作为预后风险的一个独立指标.SYBR Green Ⅰ实时PCR是一种更适于临床应用的简单、快速、便宜、可行,特异性好、敏感性又高的技术方法.
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急性白血病患者外周血HMGA1基因的表达
目的:检测急性白血病(AL)患者外周血高迁移率蛋白A1(HMGA1)基因表达水平.方法:采用SYBR Green I RQ-PCR检测30例AL,包括25例AML(M2~M7)和5例ALL(AL组),25例非白血病患者(对照组)外周血HMGA1 mRNA表达水平.结果:AL组HMGA1 mRNA表达明显高于对照组,ALL和AML间HMGA1 mRNA表达水平无显著差异;AML中M7的HMGA1 mRNA表达水平高于M2~M5.结论:HMGA1 mRNA在AL患者外周血高表达,其中M7水平高,可作为白血病基因治疗的新靶点及M7的鉴别诊断指标.
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脑胶质瘤干细胞的培养和鉴定
肿瘤干细胞和肿瘤的发生、进展和预后密切相关[1].我们应用脑胶质瘤细胞株U251,证实人脑胶质瘤干细胞的存在.一、材料与方法1.材料:人脑胶质瘤细胞株U251(购自中国科学院细胞库).DMEM/F12培养基(Hyclone),EGF(Peprotech),FGF(Peprotech),LIF(Millipore),1327(Invitro-gen),鼠抗人Nestin单抗(中杉金桥),鼠抗人MAP2单抗(Sigma),鼠抗人PE-CD133单抗(eBioscience),兔抗人GFAP单抗(BIOSS),逆转录试剂盒(Toyobo),SYBR Green mix(Toyobo),等.
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SYBR Green荧光定量PCR检测293A细胞UCP2基因表达方法的建立
目的:建立验证293A细胞UCP2基因表达情况的SYBR Green荧光定量PCR方法.方法:2μg 293A细胞总RNA用于逆转录,所需的反应体系为20L,其中包含2μg RNA,1mM dNTP,1U/L RNA酶抑制剂,2.5pmol/L Olig(dT)18引物,0.5U/L AMV逆转录酶.PCR佳反应条件为:95℃ 5min,95℃ 30s,60℃ 60s(40个循环),72℃延伸3min.结果与结论:根据溶解曲线分析,扩增产物中无引物二聚体的影响,说明所设计引物特异,退火温度合适.这表明本研究建立的SYBR Green荧光定量检测方法灵敏度高、定量范围广.
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2.2.15细胞上清HBVDNA定量检测方法的比较
目的拟筛选和比较2.215细胞上清中HBVDNA定量检测的方法.方法分别采用3种方法抽提HBVDNA,抽提物分别采用Taq man荧光定量、SYBR荧光定量PCR技术检测其滴度.结果直接应用上清分别采取热变性,碱裂解法抽提HBVDNA均为阴性,而应用PEG沉淀后检测结果证实细胞上清中有高拷贝的分泌性HBVDNA,Taq man荧光定量方法的敏感性高于SYBR实时定量PCR,在高拷贝时,两种方法的检测结果一致.结论PEG沉淀法是2 2.15细胞上清HBVDNA提取的有效方法,Taq man荧光定量方法敏感性高,是HBVDNA定量检查的首选方法.SYBR法简便,经济,也可用于上清HBVDNA的检测.
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两种定量聚合酶链反应模式检测乳腺癌组织中缓激肽释放酶表达的比较
本低.