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拉米夫定联合原儿茶酸对鸭乙肝病毒的体外抑制
目的:研究原儿茶酸(PA)、拉米夫定( 3TC)单用以及联合对鸭HBV(DHBV)感染、复制不同时期的影响.方法:利用感染DHBV的鸭原代肝细胞模型,从病毒感染的不同时期研究PA、3TC单用及合用的抗病毒效果.结果:PA、3TC单用及其合用,分别于DHBV感染前,感染的同时及感染后给药,均可有效抑制DHBV对鸭原代肝细胞的感染.虽然PA与3TC合用对DHBV的预防与阻断作用与单用3TC相比没有显著差异,但对DHBV的吸附与进入,感染活性与复制能力,以及肝细胞中AST,ALT酶活的抑制能力均显著强于单用3TC组.结论:PA与3TC药物组合不仅有比二者单用更强的抗DHBV作用,而且对DHBV所致鸭原代肝细胞损伤也有更强的保护作用.
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SYBR实时定量PCR法评价药物抗鸭乙肝病毒方法的研究
先天感染鸭乙肝病毒(D-HBV)动物模型是国内外筛选抗乙肝病毒(HBV)药物、研究药物作用机理较为公认的模型[1,2],采用SYBR实时定量PCR方法筛选动物模型并定量观察用药前后血清DHBV-DNA水平变化有利于客观评价药物疗效.
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氧化苦参碱在鸭原代肝细胞中抗鸭乙肝病毒(DHBV)作用的研究
通过建立鸭原代肝细胞-DHBV感染模型研究氧化苦参碱抗DHBV的作用.分别在DHBV感染前、感染同时以及感染后给药,利用打点杂交、Southern印迹核酸杂交和荧光定量PCR方法分别检测培养细胞上清及细胞内病毒核酸,观察氧化苦参碱在病毒感染的各个环节所起的抗病毒作用.实验结果显示:1mg/mL氧化苦参碱处理细胞后,鸭原代肝细胞培养上清及细胞内的DHBV核酸明显低于病毒感染对照组,病毒抑制率达91.6%;在病毒感染同时加药对病毒的抑制率可达98.5%;感染后持续用药能使不同培养天数的鸭肝细胞内的DHBV核酸降低60.5%～96.6%;氧化苦参碱与DHBV共孵育后,可以使病毒感染力下降69.6%.结果说明氧化苦参碱可以在DHBV感染鸭原代肝细胞的多个环节,包括病毒吸附、进入细胞及细胞内复制等方面发挥抗病毒作用.
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水芹总酚酸对鸭乙肝病毒DNA的抑制作用
目的 观察水芹总酚酸对鸭乙肝病毒(DHBV)DNA的抑制作用,验证其体内抗乙肝病毒作用.方法 取造模成功雏鸭随机分成模型组、拉米夫定(50mg·kg-1·d-1)阳性药对照组、水芹总酚酸(125、250、500mg·kg-1·d-1)3个剂量组.自感染第7天灌胃给药,2次/d,共10d.分别留取感染第7天(0d)、给药5d、给药10d及停药3d的血清,斑点杂交、放射自显影测定血清中DHBV-DNA的OD值进行自身和组间比较;另取肝组织适量,10%甲醛固定,常规石蜡切片、HE染色,镜下观察肝组织病理变化.结果 水芹总酚酸用药组在5d、10d和停药3d均对DHBV-DNA具有明显的抑制作用.病理学观察用药组鸭肝小叶结构基本完整,肝细胞变性改变明显较轻,点、灶状坏死散在分布;而模型组鸭肝实质细胞明显嗜酸性变、水肿、脂肪变等改变和弥漫分布的点、灶性坏死,表现为小叶周边肝细胞坏死广泛,界板参差不齐,浸润的炎细胞向小叶内延伸,两组肝组织比较差异显著.结论 水芹总酚酸对乙肝病毒DNA具有显著的抑制作用,且具有较强的肝细胞保护作用.
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甘露消毒丹加减方体内抗DHBV病毒作用实验研究
研究甘露消毒丹加减方在鸭体内抗DHBV病毒的作用.方法:从5日龄龙岩麻鸭中筛选出先天感染DHBV的鸭子72只,分为病毒对照组,甘露消毒丹加减方大、中、小剂量组,拉米夫定组,拉米夫定加大剂量甘露消毒丹加减方组,每组12只.喂养13 d后,除病毒对照组外各组鸭子开始给药,28 d为1个疗程.于用药前、用药第7d、第14 d、第21 d和第28 d及停药后第5 d采集血样,检测各组鸭血清DHBV-DNA 0D490值.结果:甘露消毒丹加减方中、小剂量组给药后各时点血清DHBV-DNA OD490值与给药前比较,差异无统计学意义;与给药前比较,大剂量组在给药后第14 d、第21 d和第28 d血清DHBV-DNA OD490值降低(P<0.01,P<0.05);与给药前及病毒对照组各相应时点比较,拉米夫定组和拉米夫定加大剂量甘露消毒丹加减方组在给药后第7 d、第14 d、第21 d和第28 d血清DHBV-DNA OD490值降低(P<0.01,P<0.05).结论:甘露消毒丹加减方对DHBV有一定抑制作用.
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满天星积雪草苷抗鸭乙肝病毒作用
目的 研究满天星积雪草苷抗鸭乙肝病毒的作用.方法 将鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)阳性麻鸭随机分为5组:模型组,阳性对照组(拉米夫定,3TC),满天星积雪草苷高、中、低剂量组,每组10只,各组麻鸭灌胃给药14 d,于用药前、用药7、14 d及停药后3d采血,检测血清鸭乙肝病毒表面抗原/e抗原(DHBsAg/DHBeAg)、DHBV-DNA和谷丙转氨酶/谷草转氨酶(ALT/AST)给药前后的变化,并观察肝组织病理改变.结果 与模型组比较,满天星积雪草皂苷高、中剂量组,阳性对照组用药后血清中DHBV-DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平均明显降低(均P＜0.05);停药后3d,满天星积雪草皂苷高剂量组的DHBV DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平为(1.21 ±0.11)、(0.12±0.01)、(0.11 ±0.01)、(122.4 ±15.5)、(85.2±9.4),模型组为(3.05±0.15)、(0.22±0.01)、(0.17 ±0.02)、(270.4 ±16.4)、(141.9±9.8),均低于模型组(均P＜0.05),阳性对照组为(2.36±0.13)、(0.18±0.01)、(0.15 ±0.01)、(233.5±13.8)、(121.3 ±10.2),出现明显反跳现象;病理分析表明,满天星积雪草苷对肝损伤有明显改善作用.结论 积雪草苷能有效抑制HBV在体内复制,可能是满天星中一个主要的生物活性成分.
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丁香苦苷固体脂质纳米粒抗鸭乙肝病毒的实验研究
目的:研究丁香苦苷固体脂质纳米粒在鸭体内抗鸭乙肝病毒的作用.方法:采用实时荧光定量PCR方法筛选出先天感染DHBV阳性2日龄浙江麻鸭30只.将阳性鸭随机分成5组,分别是空白对照组、拉米夫定组、丁香苦苷固体脂质纳米粒低、中、高剂量组,每组6只,连续给药15天以后停药观察5天.在用药前、用药第5、10、15天及停药后第5天从腿胫静脉抽血,检测血清DHBV-DNA的含量,并检测血清的ALT、AST水平,停药5天后取肝脏组织进行病理学观察.结果:与空白对照组相比,丁香苦苷固体脂质纳米粒高、中剂量组的DHBV-DNA含量都明显下降,有显著性差异(P<0.05),ALT、AST水平也明显降低,并有减轻肝脏炎症反应的作用,作用的强弱与用药剂量相关.而丁香苦苷固体脂质纳米粒低剂量组未表现出明显的上述作用.结论:丁香苦苷固体脂质纳米粒在鸭体内具有抗鸭乙肝病毒的作用以及对DHBV引起的肝损伤具有保护作用.
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丁香苦苷抗鸭乙肝病毒的实验研究
目的:研究丁香苦苷在体内抗鸭乙肝病毒的作用.方法:采用实时荧光定量PCR方法筛选先天感染DHBV阳性3日龄浙江麻鸭30只.将麻鸭随机分为5组,分别是空白时照组、拉米夫定组、丁香苦苷高、中、低剂量组,每组6只,连续给药15天后停药观察5天.在用药前、用药5,10,15天及停药后第5天从腿胫静脉抽取静脉血,采用荧光定量PCR方法检测血清DHBV-DNA含量,停药5天后取肝脏组织进行病理组织学观察.结果:与空白对照组比较,丁香苦苷高、中剂量组的DHBV-DNA含量都明显降低,有显著性差异(P<0.05),并有改善肝脏炎症反应的作用,作用的强弱与用药剂量和用药时间相关.但是丁香苦苷低剂量组未表现出明显的上述作用.结论:丁香苦苷在鸭体内具有抗鸭乙肝病毒的作用和对DHBV引起的肝损伤具有保护作用.
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苷泰胶囊抗乙肝病毒的实验研究
目的 观察苷泰胶囊对乙肝病毒复制的抑制作用.方法 使用鸭乙肝炎病毒使1日龄的北京鸭感染,造模7d后给药(ig),使用斑点杂交法检验用药后(5、10 d)及停药5d后血清中的DHBV DNA含量;以转染的2.2.15细胞为模型,分别加入不同浓度的苷泰胶囊药液,分别以酶联免疫法及斑点杂交法检测培养上清液中的HbsAg,HbeAg及HBV DNA的水平.结果 (1)用药后10d和停药后3d鸭血清中的DHBV DNA水平显著低于给药前(P＜0.01,P＜0.05);(2)苷泰胶囊可以明显地抑制2.2.15细胞HbsAg、HbeAg的分泌(P＜0.01,P＜0.05),其半数抑制浓度分别为1 158.92μg /mL和1 794.14 μ g/mL;(3)苷泰胶囊明显地抑制2.2.15细胞HBV-DNA的复制,其半数抑制浓度为701.27 μg /mL.结论 实验结果表面苷泰胶囊对2.2.15细胞及鸭乙肝病毒感染的模型均具有一定抑制作用并呈剂量依赖性.
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拉米夫定治疗鸭乙肝停药后肝脏病理研究
目的用鸭乙肝模型研究拉米夫定对鸭乙肝病毒的抑制效率以及停药后肝脏病理变化.方法 DHBV阳性血清感染1日龄樱桃谷鸭,制备鸭乙肝模型.感染后第2周选DHBV阳性鸭进行拉米夫定治疗,以生理盐水为对照组,连续治疗3个月,于治疗前、治疗后、停药后1个月、2个月、3个月每组杀10只樱桃谷鸭,取肝脏及血清,观察血清中病毒滴度变化、肝细胞变性程度及肝脏炎性程度的动态变化.结果治疗结束时拉米夫定治疗组鸭血清中乙肝病毒滴度(8847.0±5371.9)、肝细胞变性程度(1.3±0.5)及肝脏炎性程度(3.6±1.5)均明显低于对照组(13661.8±7035.8,3.8±0.8,7.7±2.9),但与正常组(2727.4±995.4)相比,病毒滴度仍然显著升高.停药后1个月病毒滴度有所回升,其后下降.肝细胞变性程度及肝脏炎性程度仍维持较低水平.结论拉米夫定治疗鸭乙肝病毒感染具有较为明显的、迅速的效果,停药后第一个月反跳明显,提示停用拉米夫定的第一个月应加强其他抗病毒治疗.
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茵芍散体内抗DHBV实验研究
目的 观察茵芍散体内以抗鸭乙肝病毒(DHBV)的作用.方法 用PCR法筛选鸭乙肝病毒(DHBV)阳性血清,经静脉注射感染3日龄麻鸭,建立DHBV实验模型.将DHBV阳性麻鸭40只随机分为茵芍散高、中、低剂量组,拉米夫定组和模型对照组,常规饲养的同时分别给予不同剂量的药物干预.用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清DHBV DNA含量,ALT和AST水平.光学显微镜下观察肝组织病理改变.结果 茵芍散各剂量组用药后血清DHBV DNA含量显著降低(P<0.01),其疗效与剂量和治疗时间密切相关.停药7 d后,茵芍散低剂量组和阳性对照组血清DHBV DNA有反跳现象,而茵芍散中、高剂量组血清DHBV DNA没有反跳现象.结论 茵芍散有抑制DHBV DNA及降低血清转氨酶、改善肝脏炎症的作用.
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后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒模型的建立
目的：建立并验证后天感染河南樱桃谷鸭乙型肝炎病毒（ DHBV）模型。方法：筛选3日龄DHBV阴性河南樱桃谷鸭，经胫静脉注射DHBV阳性血清建立DHBV模型鸭，连续观察42 d，采用荧光定量PCR方法检测鸭血清和肝脏中DHBV DNA变化情况。 DHBV阴性鸭48只，分为正常组、模型组和3TC组，每组16只。模型组和3TC组于鸭3日龄时建模，模型组给予生理盐水2 mL/（kg· d），3TC组给予3TC 20 mg/（kg· d），连续给药10 d。 PCR检测给药5、10 d后及停药3 d后血清和肝脏中DHBV DNA含量，并进行肝脏病理学观察。结果：感染2 d后，鸭血清和肝脏中均可检测到DHBV DNA。血清DHBV DNA水平第14天达到高峰，拷贝数为7．7×109 mL-1，肝脏DHBV DNA第21天达到高峰，拷贝数达2．1×109 mL-1，42 d内均维持较高的DHBV DNA水平。与模型组比较，3TC组鸭血清和肝脏DHBV DNA拷贝数明显降低（血清：F组间＝17．625，F时间＝68．141，F交互＝134．517，P＜0．001；肝脏：F组间＝69．430，F时间＝35．330，F交互＝75．770，P＜0．001）。3TC组鸭用药10 d后，血清和肝脏HBV DNA抑制率分别为86．5％和84．9％，但停药3 d后有轻度“反弹”现象。3TC组肝组织病变较模型组有明显改善。结论：河南樱桃谷鸭后天感染DHBV较敏感，病毒在体内增殖稳定，是DHBV感染的理想动物模型。
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肝康栓抗鸭乙型肝炎病毒和改善肝脏病理的作用
[目的]用鸭乙型肝炎(乙肝)模型研究肝康栓抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)和改善肝脏病理的作用.[方法]用DHBV阳性血清感染1 d龄的樱桃谷雏鸭,制备鸭乙肝模型.将其中36只感染阳性鸭随机分成3组:肝康栓治疗组,0.85%氯化钠模型组和阿昔洛韦(ACV)对照组,每组12只,均连续给药4周.分别于给药前,给药14、28 d和停药7 d时取血清,用实时定量PCR法检测鸭血清中DHBV DNA拷贝数.于停药7 d时,处死各组雏鸭,取肝脏病理切片苏木精-伊红染色后,观察肝脏炎症情况和肝细胞变性程度.[结果]肝康栓治疗组给药14、28 d及停药7 d时鸭血清中DHBV DNA拷贝数的对数值均较给药前降低(均P＜0.01).肝康栓治疗组雏鸭肝脏的肝细胞肿胀率、空泡变率、嗜酸性变率均较同期模型组降低,差异有统计学意义(P＜0.05,＜0.01).[结论]肝康栓能有效地抑制鸭体内DHBV DNA的复制,并具有改善肝脏病理的作用.
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乙肝宁颗粒对肝损伤动物模型的保肝降酶及免疫调节作用的研究
乙肝宁冲剂是治疗慢性乙型肝炎的有效中成药，由黄芪、白芍、丹参、茵陈等组成，具有调气健脾、清热利湿、活血化瘀等作用。为进一步提高其临床疗效及质量，我们在原冲剂基础上，改进剂型，研制成无糖型乙肝宁颗粒。本研究观察其保肝、降酶、抗鸭乙肝病毒及免疫功能等作用，现报告如下。 1 材料1.1药品 乙肝宁颗粒、乙肝宁冲剂均由长沙九芝堂制药厂提供，批号分别为981109、98050B。1.2 动物 LACA纯种小白鼠、SD大鼠由湖南医科大学提供，麻鸭由上海市传染病院提供。
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蛇葡萄根提取物体内抗鸭乙型肝炎病毒的作用
用蛇葡萄(Ampelopsis sinica)根提取物治疗鸭乙肝病毒(DHBV)感染呈阳性的雏鸭,并用α-干扰素治疗组作为阳性对照.根据鸭血清中乙肝病毒表面抗原的滴度测定、结合肝组织学观察结果,发现蛇葡萄根提取物有一定抗DHBV的作用,其作用持久.
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芒果苷在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒感染的实验研究
[目的]观察芒果苷对鸭乙型肝炎病毒感染模型的抑制作用.[方法]采用1日龄北京鸭静脉注射强阳性鸭乙型肝炎病毒后,口服给予芒果苷50、100和200 mg/kg 3个剂量,每日2次,连续给药10d,于给药前、给药后第5、10天以及停药后第3天采血,分离血清,采用斑点杂交方法及放射自显影方法,观察鸭血清乙肝病毒DNA(DHBV-DNA)的动态变化.[结果]芒果苷100mg/kg、200mg/kg在给药期间对DHBV-DNA有明显抑制作用;且在停药后未见明显反跳现象.[结论]提示芒果苷有良好的抑制DHBV感染作用,且停药后不易出现反跳现象.
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PCR及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选的比较
目的比较PCR及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选的效果. 方法分别利用PCR法及Dot-blot法对先天感染DHBV筛选,并进行比较. 结果与Dot-blot法比较,PCR法有简单、快捷、敏感度高等优点,且可避免Dot-blot带来的放射性污染.但PCR法所需费用高,易因交叉污染而导致假阳性结果. 结论PCR与Dot-blot法筛选先天感染鸭乙肝的方面各有其优缺点.由于PCR法更为敏感、快捷,很有必要对其加以改进和完善.
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重庆麻鸭乙型肝炎病毒感染率流行病学调查研究
目的:调查研究重庆地区成年麻鸭鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatitis B virus,DHBV)感染率及其季节差异性,为优化DHBV研究模型奠定基础.方法:2009年春季与夏季随机采集重庆麻鸭血清560份,采用随机引物法地高辛素标记DHBV DNA探针,斑点杂交检测麻鸭血清DHBV DNA感染率.结果:重庆地区麻鸭春季DHBV感染率为1.82%,夏季DHBV感染率为5.26%,后者显著高于前者(P＜0.05).结论:重庆地区成年麻鸭DHBV感染率夏季高于春季,但均低于国内其他地区鸭DHBV感染率.
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合成寡核苷酸对病毒目标序列特异结合反应及其影响因素研究
目的观察人工合成的反义寡核苷酸(ASON)、三螺旋结构寡核苷酸(TFO)分别对人甲肝病毒(HAV)5′非编码区和鸭乙肝病毒(DHBV)-DNA X/C区目标基因序列特异结合效应及受影响因素作用的变化.方法在设定条件下,将人工合成的ASON和TFO与目标基因片断混合反应,采用电泳转移印迹技术观察特异结合产物及其产量.结果所设计的ASON与TFO能与目标基因片段直接特异结合;在结合缓冲液中,ASON与目标片段的结合佳比例是25～50∶1, TFO与目标片段的结合佳比例是600∶1; 在适加入剂量比例下,结合反应60 min即有大量TFO的复合物形成,复合物产量随作用时间延长而增加,180～240 min时结合产物完全稳定形成.但ASON的结合复合物大量形成需要180～240 min.结论本试验所设计的ASON和TFO能与HAV和DHBV的目标基因序列发生特异的结合,ASON和TFO的加入剂量和反应作用时间对特异结合产物的形成有明显影响.
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免疫无应答麻鸭抵抗鸭乙肝病毒攻击的能力评价
目的 通过病毒感染实验,观察乙肝疫苗免疫无应答的麻鸭是否能抵抗鸭乙肝病毒(DHBV)攻击.方法 将82只DHBV DNA阴性的1日龄麻鸭随机分为实验组(65只)和空白组(17只).实验组肌肉注射乙肝疫苗,空白组注射生理盐水.65只实验组动物接种疫苗后,16只未检测出乙肝表面抗体(抗-HBs)的动物全部纳入无应答组;另外从49只检测出抗-HBs的动物中随机选取16只作为应答组.应答组、无应答组及空白组均静脉注射DHBV强阳性血清0.2ml/只,观察4周.后抽血检测DHBV DNA、鸭乙肝表面抗原(DHBsAg)、鸭乙肝e抗原(DHBeAg)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT);同时取肝脏组织进行病理学检查.结果 病毒攻击后,免疫无应答组DHBV DNA阳性率为12.5％ (2/16),低于空白组(53.5％,8/15),与免疫应答组(18.75％,3/16)相比无统计学差异.无应答组乙肝表面抗原阳性率(18.75％,3/16)明显低于空白组(60％,9/15),与应答组(25％,4/16)无统计学差异.无应答组、应答组和空白组的乙肝e抗原阳性率分别为18.75％ (3/16)、12.5％ (2/16)和26.7％ (4/15),无统计学差别.三个观察组在接受病毒攻击前后的ALT及AST变化值均无统计学差异.肝脏病理学检查结果未见三组之间有明显差异.结论 麻鸭接种乙肝疫苗后,即使没有产生抗-HBs抗体,仍然能够抵抗DHBV的攻击.免疫无应答组麻鸭在接受DHBV攻击后其病毒感染率与免疫应答组便没有明显差异.
