芒果苷的急性毒性和遗传毒性研究

芒果苷又名知母宁,是从知母中提取的四羟基吡酮类黄酮化合物.目前研究表明芒果苷具有抗氧化、抗菌抗病毒、降血糖、降血脂、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性和药理作用,具有良好的临床应用价值[1-6].近年来肥胖、糖尿病、心脑血管疾病以及恶性肿瘤的发病率逐年快速上升,严重威胁人类健康[7-9].植物化学物在上述慢性病的防治方面有着疗效稳定、无毒或低毒、价格低廉等优势,植物化学物芒果苷作为药品或保健品投入临床应用是否安全至关重要,因此本实验对芒果苷的急性毒性和遗传毒性进行评价,以明确芒果苷的应用是否安全.

四种植物化学物预防性调节血脂作用快速评价

目的 建立小鼠急性高血脂模型,并快速评价芒果苷、荷叶碱、熊果酸和芍药苷这4种植物化学物的调节血脂作用.方法 雄性昆明小鼠按体重随机分为空白对照组、高脂模型组、辛伐他汀组(20mg/kgBw)、芒果苷组(300mg/kg)、荷叶碱组(1Smg/kg)、熊果酸组(300mg/kg)和芍药苷组(300mg/kg),连续灌胃13天后,除空白对照组外,全部腹腔注射75％蛋黄乳荆,每只0.5ml.摘除眼球取血,检测血脂.结果 与空白对照组比较,高脂模型组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(Tc)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高;与高脂模型组比较,辛伐他汀可显著降低血清TG、TC和LDL-C水平,并且可显著升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平.荷叶碱和熊果酸可以显著降低血清TG、TC和LDL-C水平,芒果苷可以显著降低血清TG水平,而芍药苷对血脂各项指标无显著影响.结论 成功建立了小鼠急性高血脂模型;荷叶碱、熊果酸和芒果苷具有不同程度的调节血脂作用.

正交试验优化知母中芒果苷的提取工艺

知母为百合科知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)的干燥根茎,具有清热泻火、生津润燥之功效~([1]).其主要功效成分为芒果苷和甾体皂苷,研究表明芒果苷具有多方面的生理活性和药理作用~([2～4]).

芒果苷对L6细胞葡萄糖消耗的影响及其作用机制研究

目的 观察芒果苷对L6细胞葡萄糖消耗的影响,并探讨其分子机制.方法 以芒果苷干预L6肌管细胞,葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,western-blot方法检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达量及其急性转位作用,免疫共沉淀(IP)联合western-blot方法检测AKT激酶活性.结果 芒果苷处理可激活L6细胞的AKT激酶(与对照组比,P=0.001),提高L6细胞的葡萄糖消耗(P=0.011或P=0.000)且呈剂量-反应关系(P=0.000),上调GLUT4的蛋白表达量(P=0.001或P=0.000)并促进GLUT4在细胞内发生急性转位(P=0.005,P=0.001或P=0.026),使该蛋白由胞浆经细胞骨架转位至细胞膜.结论 芒果苷可促进L6细胞的葡萄糖消耗量,调节GLUT4的表达及其在细胞内的急性转位,激活AKT激酶活性,因此,芒果苷具有潜在的辅助降血糖作用.

芒果苷对心肌缺血再灌注损伤TNF-a、MPO的影响

目的 观察芒果苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤(Ml/R)TNF-a、MPO的影响.方法 50只SD大鼠随机分为5组即假手术组、缺血再灌注模型组、芒果苷10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg剂量组.假手术组给予等容量的生理盐水腹腔注射,完成模型全部操作只穿线不结扎.芒果苷10、20、40 mg/kg剂量组分别给予相应剂量芒果苷腹腔注射21天,末次给药后一小时用于实验.采用左冠状动脉前降支结扎40 min,再灌120 min建立在体大鼠MIR模型.放免法检测心肌组织肿瘤坏死因子(TNF-a)含量;检测心肌组织髓过氧化酶(MPO)观察中性粒细胞(PMN)浸润.苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理改变,透射电镜观察心肌超微结构的改变.结果 与模型组比较,芒果苷各剂量TNF-a和MPO含量显著降低(P<0.01或P<0.05).结论 芒果苷对MI/R有保护作用.芒果苷可减轻心肌组织中性粒细胞浸润、抑制炎症因子释放.

滋阴丸中盐酸小檗碱和芒果苷提取工艺的考察

目的：探究采用高效液相法测定中药复方滋阴丸中盐酸小檗碱和芒果苷的含量并优化其提取工艺。方法以水作为提取溶剂，通过正交实验，以高效液相色谱法测定盐酸小檗碱和芒果苷的含量为指标，考察提取溶剂体积、提取时间以及提取次数对提取效果的影响，优选出佳的提取工艺。结果用标准曲线法定量得盐酸小檗碱和芒果苷的平均加样回收率分别为99.2％和101.2％，相对标准偏差RSD为1.5％和2.2％。由正交试验可得滋阴丸复方经9种提取工艺提取后，以芒果苷和盐酸小檗碱为指标进行评价，15倍水溶解，提取2次，每次1 h，可以达到佳的提取效果。结论此法简便、迅速、准确，不经分离可直接测定中药复方滋阴丸中盐酸小檗碱和芒果苷的含量，且结果可靠，稳定性好，回收率高，为中药分析提供一种可靠的方法。

340 五层龙属植物的多酚成分：α-葡糖苷酶及醛糖还原酶抑制活性成分芒果苷的定量分析

338 知母水提物与活性成分芒果苷及其糖苷的抗糖尿病作用

高效毛细管电泳法测定芒果苷在百合知母汤中的含量

目的 建立高效毛细管电泳法测定百合知母汤中有效成分芒果苷的含量.方法 采用内标法,选取芦丁为内标,未涂层熔融石英毛细管柱(77 cm×75μm,有效长度70 cn)为分离通道,以12 mmol/L硼砂-甲醇(90:10)为电泳介质,分离电压20 kV,检测波长318im.结果 在上述条件下,芒果苷在20 min内得到很好的分离,在0.06～1.14 mg/ml与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为99.0％.结论 方法 简便快速、结果 准确、重复性好,可用于百合知母汤中芒果苷的质量控制.

芒果苷影响大鼠心肌缺血/再灌注损伤能量代谢的实验研究

目的 观察芒果苷预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用.方法 通过结扎冠脉30分钟再灌注2小时的方式制备心肌缺血/再灌注损伤模型,将大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、芒果苷三个剂量组(40、20、10 mg/kg),于制备模型前7天开始灌胃给药;再灌注结束后,采用比色法检测血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,染色法检测心肌梗死面积,定磷法检测心肌组织Na+-K+-ATP酶活力、Ca2+-Mg2+-ATP酶活力.结果 与模型组(36.25％)比较,芒果苷高、中剂量组的心肌梗死面积分别缩小至32.44％和32.02％(P＜0.05);与模型组(1137.26 U/L)比较,芒果苷各剂量组CK活性分别为907.31、899.20、848.65 U/L(P＜0.05或P＜0.01);与模型组(2345.82 U/L)比较,芒果苷中、高剂量组LDH活性分别为1722.54、1669.43 U/L(P＜0.05);与模型组(4.22 mmol Pi/gPro)比较,芒果苷高、中剂量组可显著升高Na+-K+-ATP酶活力为5.01、4.85 mmol Pi/gPro(P＜0.05或P＜0.01);高、中剂量组可显著升高Ca2+-Mg2+-ATP酶活力为6.12、6.19 mmol Pi/gPro(P＜0.05).结论 芒果苷预处理可保护心肌缺血/再灌注所致心肌损伤,机制可能与改善心肌组织的能量代谢有关.

高效液相色谱法同时测定白虎加桂枝汤中5个有效指标性成分的含量

目的:建立白虎加桂枝汤中芒果苷、新芒果苷、甘草酸、甘草苷、肉桂酸5个有效指标性成分的含量测定方法,为白虎加桂枝汤的颗粒研发奠定基础.方法:采用HPLC-PDA双波长同时测定,Waters xBridgeBEH C18(4.6 mm×250 μm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.01％甲酸水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温24℃,检测波长255 nm、280 nm.结果:内芒果苷、新芒果苷、甘草酸、甘草苷、肉桂酸线性范围分别为66-1 976μg(r=0.9993),70-3 487μg(r=0.999 7),30-913μg(r=0.999 5),35-1 734 μg(r=0.999 5),0.6-187 μg(r=0.999 8),加样回收率平均范围95.29％-100.17％.结论:建立了白虎加桂枝汤中5个有效指标性成分的含量测定方法,该方法简捷、稳定、准确,可为白虎加桂枝汤及其复方颗粒研制的质量控制提供评价方法.

复方酸枣仁颗粒质量标准研究

目的 通过测定芒果苷的含量,完善复方酸枣仁颗粒的质量标准.方法 采用高效液相法,对复方酸枣仁颗粒中知母中芒果苷进行含量测定,制定复方的含量限度.结果 确定复方酸枣仁颗粒的含量限度为:以每1 g含芒果苷计,不得少于0.022%.结论 复方酸枣仁颗粒质量标准选择以知母中有效成分芒果苷进行含量测定,操作方法简单、准确、有效,可用于复方酸枣仁颗粒的质量控制.

芒果叶提取物芒果苷安全性评价Ⅱ:小鼠及犬急性毒性试验

目的:观察动物24 h多次灌胃给予芒果苷的急性毒性.方法:将40只KM种小鼠随机分为给药组和对照组,6只Beagle犬随机分为给药组和对照组,均以大耐受量(MTD)法灌胃给药进行毒性试验,给药后均观察14 d.结果:小鼠给药后,其外观、行为活动、饮食等均未见明显异常,体重增长正常,试验结束时全部存活,大体解剖未见肉眼可见病理变化;犬给药后,均出现一过性灰白色粪便,给药组在给药后次日出现TBIL明显升高,发生率为1/4,但观察结束后又恢复至给药水平,其余外观、血液生化指标等均无明显异常,大体解剖未见肉眼可明显异常.结论:小鼠灌胃给予芒果苷54 g/kg未产生明显毒性反应;犬灌胃给予芒果苷MTD＞ 9.0 g/kg体重;有1/4例动物在给药次日TBIL明显升高,提示芒果苷有可能影响TBIL代谢,但能自行恢复.

芒果叶提取物芒果苷安全性评价Ⅰ:安全药理学试验

目的:观察芒果苷对神经系统、心血管系统和呼吸系统的影响,明确其一般药理活性,为后续毒理试验提供参考.方法:对小鼠一次按0.24,1.0,3.0 g/kg体重灌胃给予芒果苷后,观察其一般行为表现、姿势、步态、有无流涎、流汗、暴燥、抽搐、肌颤等变化,测定其自主活动次数、协调运动情况和阈下睡眠剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠的影响;对Beagle犬一次按0.1,0.7,4.0 g/kg体重十二指肠给予芒果苷后,观测给药后180 min内心电图、血压、呼吸的改变.结果:小鼠一般行为表现、姿势、步态未见有明显改变,也未见有流涎、流汗、暴燥、抽搐、肌颤等现象;自主活动、协调运动情况和戊巴比妥钠阈下睡眠剂量小鼠入睡率均无明显影响.犬心电图、血压、呼吸均无明显变化.结论:在本实验条件下,芒果苷对小鼠精神和神经系统,对犬心血管系统和呼吸系统均无明显影响.

芒果叶提取物芒果苷安全性评价Ⅳ:遗传、生殖毒性试验

目的:检测芒果苷是否影响遗传物质,并通过口服灌胃给予妊娠期6～15d致畸敏感期孕期大鼠芒果苷,考察其对妊娠动物、胚胎及胎仔发育的影响,观察芒果苷是否具有遗传和生殖毒性.方法:采用微生物回复突变试验、啮齿动物骨髓微核试验、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验检测芒果苷的遗传毒性.从妊娠第7天开始,连续10 d,口服灌胃受试药品0.6 mg/(kg·bw)、1.2 mg/(kg·bw)、2.4 mg/(kg·bw),观察其对各组孕鼠妊娠期毒性反应及孕鼠胚胎期各胎鼠生长发育指标致畸变的影响.结果:微生物回复突变试验中芒果苷各剂量组回变菌落数均在正常范围内未超过自发回变菌落数的2倍,骨髓微核试验中芒果苷各剂量组多染红细胞和正染红细胞比例未低于溶媒对照组的20％,染色体畸变试验中CHL细胞染色体畸变率均小于5％.芒果苷低、中、高3种不同剂量对各孕鼠及孕鼠胚胎期各胎鼠的窝胎数,胚胎形体外观、全身骨骼、各内脏重要脏器等的生长发育指标致畸变检测项目显示为阴性.结论:芒果苷无致突变性,对孕鼠胚胎期胎鼠生长发育指标未见有生殖毒性反应的致畸变影响.

芒果叶提取物芒果苷安全性评价Ⅲ:长期毒性试验

目的:通过Beagle犬长期灌胃给药,考察芒果苷的长期毒性,为临床安全用药的剂量设计提供参考.方法:芒果苷以0.2,1.0,0 g/kg剂量灌服给予Beagle犬,对照组给予0.5％ CMC-Na.给药1次/d,连续1个月.测体重、体温1次/周,并根据体重调整给药量.于给药前、给药结束和恢复结束时进行眼科检查、心电图分析、尿液分析,并采血进行血液、血液生化学、血液电解质、血凝等检测,给药结束时各组取4只犬麻醉后取骨髓涂片检查,然后放血处死,进行系统尸解和组织病理学检查.给药结束后各组剩余2只犬停药,常规喂2周,进行可逆性和延迟毒性观察.结果:在给药期间,给药犬粪便颜色加深,但粪便形状、排便次数、排便量均正常;其余外观体征、行为活动、腺体分泌、摄食情况等无明显异常.芒果苷连续给予Beagle 1犬1个月:犬体重增长正常,各给药组在各时点对对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);犬心率G波、PR间期、QRS间期、QT间期、ST段偏移量均正常,各给药组在各时点与对照组比较,心率差异无统计学意义(P＞0.05);血液学各指标均正常;血液生化学各指标均正常.无论给药前,还是给药后,各犬左右两眼曲光介质透明度、视网膜、血管、视乳头均基本正常,未见有供试品引起的明显改变.芒果苷连续给予Beagle犬1个月,与对照组比较,给药犬骨髓增生活跃,粒系细胞与红系有核细胞比例正常,粒系及红系各阶段细胞比例未见异常,淋巴系和巨核细胞系亦无特殊,属正常骨髓象;各给药组在各时点与对照组比较,骨髓各类细胞均无明显异常.芒果苷连续给予Beagle犬1个月及停药恢复2周,与对照组比较,给药犬脏器重量及系数基本正常,各给药组在各时点与对照组比较,高剂量组在给药结束时睾丸和附睾重量和系数均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:芒果苷连续给药1个月和停药恢复2周,各给药组均有一些散在病变发生,但病变特征没有共性,也未见有剂量-毒性关系,且部分改变也见于对照组,未发现在供试品剂量范围,因供试品导致的Beagle犬的特征病变和毒性靶器官,给药剂量与药时曲线下面积呈正相关,长期经口给予芒果苷于Beagle犬体内显露无蓄积倾向.Beagle犬安全剂量上限范围为4g/kg,为人临床拟推荐剂量的127倍.因此,按临床拟推荐剂量用药应是比较安全的.

芒果苷抑制哮喘小鼠气道炎症的机制

目的:观察芒果苷对哮喘小鼠气道炎症的影响,探讨芒果苷平喘的作用机制.方法:将72只4～5周SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松阳性对照组(0.001 25 g·kg-1)、芒果苷高、中、低剂量组(0.4,0.2,0.1 g·kg-1).采用卵白蛋白(OVA)致敏和激发构建小鼠哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类；肺组织病理切片HE染色观察炎性细胞浸润情况；采用ELISA法检测小鼠血清中OVA特异性IgE( OVA-sIgE)和BALF中白三烯C4(LTC4),前列腺素D2(PGD2)的含量.结果:芒果苷高、中、低剂量组BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)比例由模型组(6.57±1.44)％降低为(1.63±0.43,2.72±0.83,4.11 ±1.08)％(P＜0.01～P＜0.05)；芒果苷高、中剂量组BALF中白细胞总数由模型组( 83.25±10.19)×105/mL减少为(25.66±6.16,53.38±9.19)×105/mL(P ＜0.01)；芒果苷各剂量均可不同程度的改善肺组织的病理学改变,减轻气道炎症；芒果苷高、中、低剂量组血清中OVA-sIgE含量由模型组(0.26±0.04) ng·mL-1降低为(0.10±0.04,0.12 ±0.02,0.18 ±0.03) ng·mL-1(P＜0.01)；芒果苷高剂量组BALF中PGD2水平由模型组(74.36±22.72) ng·mL-1降低为(60.30±12.19)ng·mL-1(P＜0.05),而芒果苷中、低剂量组对PGD2的降低无统计学差异；芒果苷各剂量对LTC4水平有降低趋势.结论:芒果苷可通过减少EOS浸润、小鼠体内OVA-sIgE和PGDz含量,抑制哮喘小鼠的气道炎症,在治疗哮喘方面有潜在的应用前景.

基于肠道尿酸转运体ABCG2的芒果苷降尿酸作用机制分析

目的:探讨芒果苷对尿酸诱导的高尿酸血症小鼠血尿酸、肠道尿酸转运体三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2[ATP-binding cassette superfamily G (White) member 2, ABCG2]mRNA及蛋白表达的影响, 初步探讨芒果苷降尿酸的作用机制.方法:昆明种小鼠60只, 随机分为6组, 每组10只, 分为正常组, 模型组组, 芒果苷 (1.5, 3.0, 6.0 mg·kg-1) 组和阳性药苯溴马隆 (25.0 mg·kg-1) 组, 除正常组外, 以腹腔注射的方式给予小鼠尿酸, 诱导形成高尿酸血症模型, 同时灌胃给予芒果苷及苯溴马隆, 2周后磷钨酸法检测小鼠血尿酸, 逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR) 及蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测小鼠空肠、回肠部ABCG2 mRNA和蛋白的表达, 并采用苏木素-伊红 (HE) 染色观察小鼠回肠病理学变化.结果:与正常组比较, 模型组小鼠血尿酸显著升高, 小鼠的空部、回肠部ABCG2 mRNA明显降低, 小鼠的空部、回肠部ABCG2蛋白明显升高 (P＜0.05, P＜0.01), 病理变化不明显;灌胃给药2周后, 与模型组比较, 芒果苷 (3.0, 6.0 mg·kg-1) 组小鼠血尿酸明显下降 (P＜0.05, P＜0.01), 芒果苷 (1.5, 3.0, 6.0 mg·kg-1) 组小鼠的空部、回肠部ABCG2 mRNA表达均明显的上调, 芒果苷 (6.0 mg·kg-1) 组小鼠空肠部ABCG2蛋白明显下调, 而在小鼠回肠部, 芒果苷 (3.0, 6.0 mg·kg-1) 组的ABCG2蛋白表达明显下调 (P＜0.05) .结论:芒果苷可明显降低高尿酸血症小鼠的血尿酸水平, 并能使小鼠肠道ABCG2 mRNA和蛋白表达改变恢复至正常水平.

采用析因设计方法研究槲皮素和没食子酸对芒果苷镇咳作用的影响

目的:芒果苷、槲皮素和没食子酸都是芒果叶的主要成分,含量均超过2％.本研究探讨芒果苷分别与槲皮素、没食子酸合用时,在镇咳作用上是否存在交互影响.方法:小鼠40只,雌雄各半,随机分为生理盐水组,生理盐水+芒果苷组(0.1 g·kg-1),生理盐水+槲皮家组(0.1 g·kg-1),生理盐水+芒果苷+槲皮素组(0.1 +0.1 g·kg-1),每组10只,采用浓氨水致咳的小鼠模型研究镇咳作用,记录小鼠3 min内的咳嗽次数.采用析因方差分析判断药物间是否存在交互影响.结果:与生理盐水组比较,芒果苷组有镇咳作用(P＜0.05),槲度素组和没食子酸组则无(P＞0 05).芒果苷+槲应素组的镇咳作用明显强于芒果苷组(P＜0 01)；芒果苷+没食子酸组的镇咳作用与芒果苷组相当(P＞0.05).结论:芒果苷和槲皮素合用,有协同镇咳作用,能明显提高芒果苷的镇咳药效.芒果苷与没食子酸之间没有交互影响,两者合用,只表现出芒果苷的镇咳药效.

芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠心脏炎性损伤的协同保护作用

目的:观察芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)心肌炎性损伤的协同保护作用,为高血压病心肌炎性损伤的临床防治提供实验依据.方法:以8只正常血压大鼠(normal blood pressure rat,WKY)为空白组A,72只10周龄SHR大鼠随机分为模型组B,苯那普利(10 mg· kg-1·d 1)组C,芒果苷单用(20 mg· kg-1·d-1)组D,葛根素单用组E(20 mg· kg-1·d-1),芒果苷(20 mg·kg-1·d-1)+葛根素片(10 mg·kg-1·d-1)组F,芒果苷(20 mg·kg-1·d-1)+葛根素片(20 mg· kg-1·d-1)组G,芒果苷(20 mg· kg-1·d-1)+葛根素片(40 mg·kg-1·d-1)组H,芒果苷(10 mg·kg-1·d-1)+葛根素片(20 mg· kg-1·d-1)组Ⅰ,芒果苷(40 mg· kg-1·d-1)+葛根素片(20 mg·kg-1·d-1)组J.每天10 mL·kg-1连续灌胃,灌胃给药2个月后停药,取材前禁食12h.用显微镜观察大鼠心肌组织病理形态结构,免疫组化法检测大鼠心肌组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达,酶联免疫法检测SHR心肌组织IL-6,IL-10,TNF-α水平.结果:各组大鼠心脏组织均未见明显病理形态学改变;免疫组化和酶联免疫结果显示,与模型组比较,各组给药大鼠心肌组织IL-6,IL-10,TNF-o含量均有不同程度下降(P ＜0.05,P＜0.01).结论:芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠心脏组织病理形态学无显著影响;但可下调大鼠心脏组织异常升高的炎症因子IL-6,IL-10,TNF-α水平,具有一定的协同增效作用.