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四种植物化学物预防性调节血脂作用快速评价
目的 建立小鼠急性高血脂模型,并快速评价芒果苷、荷叶碱、熊果酸和芍药苷这4种植物化学物的调节血脂作用.方法 雄性昆明小鼠按体重随机分为空白对照组、高脂模型组、辛伐他汀组(20mg/kgBw)、芒果苷组(300mg/kg)、荷叶碱组(1Smg/kg)、熊果酸组(300mg/kg)和芍药苷组(300mg/kg),连续灌胃13天后,除空白对照组外,全部腹腔注射75％蛋黄乳荆,每只0.5ml.摘除眼球取血,检测血脂.结果 与空白对照组比较,高脂模型组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(Tc)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高;与高脂模型组比较,辛伐他汀可显著降低血清TG、TC和LDL-C水平,并且可显著升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平.荷叶碱和熊果酸可以显著降低血清TG、TC和LDL-C水平,芒果苷可以显著降低血清TG水平,而芍药苷对血脂各项指标无显著影响.结论 成功建立了小鼠急性高血脂模型;荷叶碱、熊果酸和芒果苷具有不同程度的调节血脂作用.
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HPLC法测定脂定宁中荷叶碱的含量
目的:建立脂定宁丸中荷叶碱的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定,YWG-C18色谱柱(4.6mm×250mm;10μm);流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(45.0:53.2:1.2:0.59),流速1mL·min-1;检测波长270nm.结果:荷叶碱的线性范围为0.144-0.720μg(r=0.9996);平均回收率为102.34%,RSD为1.84%(n=6).结论:本方法简便、快速、准确,可作为脂定宁丸的质量检测方法.
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配伍何首乌对荷叶碱在Beagle犬体内药代动学的影响
目的:研究Beagle犬灌胃给予荷叶生物碱部位配伍何首乌二苯乙烯苷部位后荷叶碱的药动学特征,并与Beagle犬单独灌胃荷叶生物碱部位后荷叶碱的药动学参数进行对比,为荷叶制剂研制和临床应用提供实验依据.方法:Beagle犬灌胃给予荷叶生物碱部位0.15g/kg配伍何首乌二苯乙烯苷部位0.46g/kg后,定时取血,RP-HPLC法测定血浆荷叶碱药物浓度,采用DAS软件计算药动学参数.结果:配伍何首乌二苯乙烯苷部位后,荷叶碱在Beagle犬体内药动学过程符合二室开放式模型;通过对配伍前后荷叶碱在Beagle犬体内的各药带动力学参数比较,结果表明,t1/2kα、t1/2α、Tmax和Cmax在两组中差异不大;配伍后荷叶碱的t1/2β(0.582h)小于单独灌胃荷叶生物碱部位后t1/2β(0.850h).结论:配伍前后的药动学参数研究表明,配伍何首乌二苯乙烯苷部位后,不影响荷叶碱在Beagle犬体内的吸收、分布过程,但在一定程度上会加快荷叶碱在Beagle犬体内的消除.
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星点设计-效应面法优选荷叶中荷叶碱与荷叶黄酮的提取工艺
目的:优化荷叶中2类有效成分的醇提工艺.方法:采用星点设计,以荷叶碱,荷叶总黄酮的提取率为指标,对2种指标进行归一化处理,采用效应面法优化荷叶的提取工艺条件.结果:确定优提取工艺为75%～80%乙醇,提取时间120～180 min,加醇量20～25倍,提取2次,荷叶碱和荷叶总黄酮提取率的实际值与预测值的偏差分别为5.53%～6.02%.结论:采用星点设计-效应面法优选荷叶的醇提工艺,实际值与预测值吻合度高,预测性良好,是可行的.
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高效液相色谱同时测定荷叶药材及其生物碱部位中4种生物碱的含量
目的:建立测定荷叶药材及其生物碱部位中4种生物碱类成分2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、荷叶碱和莲碱含量的高效液相色谱方法.方法:采用Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.1%三乙胺水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,检测波长270 nm.结果:2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、荷叶碱和莲碱的线性范围分别为0.110～0.658 μg(r=0.999 5),0.021～0.126μg(r=0.999 5),0.103～0.618μg(r=0.999 8),0.086～0.514μg(r=0.999 5),荷叶生物碱部位平均加样回收率(n=6)分别为101.5%,99.14%,99.21%,98.41%;荷叶药材平均加样回收率(n=6)分别为99.53%,100.5%,97.51%,100.1%.结论:3批样品测定结果表明,该方法简便准确,可用于荷叶药材及其生物碱部位中4种生物碱类成分的含量测定.
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荷叶药材中荷叶碱生物药剂学分类系统研究
荷叶碱为中药荷叶Nelumbinis Folium中的主要药效活性成分,具有降血脂、抗炎、抗氧化等生物活性.目前关于荷叶碱的药代动力学及生物利用度报道的结果存在较大差异.该实验利用多种生物药剂学评价模型,对中药材中荷叶碱进行生物药剂分类学研究(biopharmaceutical classification system,BCS).其中,荷叶碱平衡溶解度采用了理想溶液模型、Apelblat模型、多项式模型(经验模型)进行测定及关联性评价;渗透性采用油水分配系数logP,分布系数logD以及细胞和组织表观渗透系数研究.荷叶碱溶解度受环境pH影响在酸性条件下属于BCS Ⅰ类;近中性及碱性环境下,BCS分类结果出现差异.以外翻肠囊法所得肠组织表观渗透系数荷叶碱渗透性较差,为BCSⅣ类.进一步证明动物种源及环境酸碱度对中药活性成分荷叶碱口服生物利用的影响.
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高效液相色谱法同时测定荷丹片中荷叶碱丹参酮ⅡA补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 采用高效液相色谱法同时测定荷丹片中荷叶碱、丹参酮ⅡA、补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法 采用50%乙醇超声提取,在色谱柱Agilent SB-Aq C18(4.6 mmx250 mm,5μm)上进行分离,柱温为25%,流动相:A相为水-乙腈--三乙胺--冰醋酸(355:30:9:3.9);B相:乙腈,梯度洗脱:0～11 min,30%B～20%B,11～18 min,20%B～20%B,18～30min,20%B～70%B,30～40 min,70%B～70%B,流速:1ml/min,双波长检测:245 nm(检测补骨脂素和异补骨脂素),270 nm(检测荷叶碱和丹参酮ⅡA).结果 样品中4种成分得到良好分离,荷叶碱在13.028～103.28μg/ml(r=0.9999)、丹参酮ⅡA在1.124～11.24μg/ml(r=0.9999)、补骨脂素在6.630～66.30μg/ml(r=0.9999)、异补骨脂素在6.385～63.85μg/ml(r=0.9999)范围内都呈良好线性关系;荷叶碱、丹参酮ⅡA、补骨脂素和异补骨脂素的回收率分别为95.13%、100.14%、99.76%、101.41%;RSD分别为1.07%、1.84%、1.80%、1.86%,样品溶液在12 h内稳定.结论 该方法简单准确,专属性强,重复性好,可作为复方荷丹片的常规质量控制方法.
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LC-MS/MS法研究荷叶生物碱在太鼠体内的组织分布
目的:建立荷叶碱(NF)、氮-去甲荷叶碱(N-NF)和2-羟基-1-甲氧基阿朴啡(HMA)的LC-MS/MS分析方法,对其在大鼠的组织分布进行研究.方法:通过给大鼠静脉注射荷叶总生物碱10 mg·kg-1后,采用LC-MS/MS方法测定各组织中主要生物碱成分NF,N-NF和HMA的含量.结果:给大鼠静脉注射总生物碱后,3个主要生物碱成分NF,N-NF和HMA能迅速(5 min)分布到各组织,其中在肝脏、肺、脾脏和肾脏等组织中具有较高的浓度,6h后显著下降.结论:建立的方法简便易行、准确可靠,可用于大鼠体内NF,N-NF和HMA的组织分布研究;NF,N-NF和HMA在大鼠体内分布快且广泛,并在体内维持较长时间.
关键词： 组织分布 LC-MS/MS 荷叶碱 氮-去甲荷叶碱 2-羟基-1-甲氧基阿朴啡 -
荷叶碱对人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制
目的 研究荷叶碱对人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制.方法 采用CCK-8法观察荷叶碱对人肝癌细胞株HepG2生长增殖的影响;Hoechst33258染色观察HepG2细胞凋亡形态的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和周期的影响;Western Blot检测HepG2细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 荷叶碱对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的生长具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;Hoechst 33258染色可见实验组细胞固缩,凋亡小体形成,蓝色荧光加深;流式结果表示,荷叶碱可使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率随药物浓度的增大亦呈增长趋势;Western Blot结果表明,荷叶碱以浓度梯度抑制NF-КB蛋白,Bcl-2蛋白的表达,促进Bax蛋白的表达.结论 荷叶碱可抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,并在一定的范围内呈剂量、时间依赖性.荷叶碱可将人肝癌细胞株HepG2阻滞于G0/G1期,诱导其发生凋亡,凋亡机制可能与调节相关蛋白NF-КB、Bcl-2、Bax的表达有关.
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荷叶碱大鼠肠道吸收特性研究
目的 用肠管外翻模型研究荷叶碱在大鼠不同肠段的体外肠吸收特征.方法 在不同肠段(十二指肠、空肠、回肠和结肠)的肠管外翻模型中分别加入10、20和40μg ·mL-1的荷叶碱,在不同时间点取样,采用Agilent 1100型高效液相色谱仪测定肠囊内药物浓度,计算荷叶碱的吸收参数来分析其在肠道的吸收特征,比较不同肠段对荷叶碱通透能力的差异.结果 37℃下,不同浓度的荷叶碱在台氏液中2.5 h内稳定,方法学考察均符合生物样品的测定要求.荷叶碱在大鼠不同肠段中的吸收在一定浓度内无饱和现象,十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收速率常数依次为(0.0144±0.005 4)、(0.019 6±0.0033)、(0.0215±0.0044)、(0.0178±0.0032)min-1.结论 荷叶碱在大鼠不同肠段的转运为一被动扩散过程,不同肠段的吸收具有线性吸收的特征,吸收速度依次如下:回肠、空肠、结肠和十二指肠.
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市售荷叶药材及炮制品饮片质量评价的研究
目的 综合考察市售荷叶药材及炮制品饮片质量.方法 用HPLC法测定15批荷叶药材及炮制品饮片中荷叶碱含量,并考察样品中水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物等理化试验项目.结果 荷叶药材样品中荷叶碱含量大部分不符合药典规定,炮制品饮片荷叶丝中荷叶碱含量略有下降,荷叶炭中荷叶碱损失殆尽,其他各项理化试验结果也显示,炮制加工对其各项指标影响较大.结论 本试验为荷叶药材及炮制品饮片综合质量评价体系的建立提供理论和试验依据.
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HPLC法测定不同市售荷叶药材中4种生物碱类成分的含量
目的 建立测定荷叶药材中4种生物碱类成分2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、荷叶碱和莲碱含量的高效液相色谱方法,并测定不同市售荷叶药材中4种成分的含量.方法 采用HypersilC18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.1%三乙胺水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35 ℃,检测波长270 nm.结果 2-羟基-1-甲氧基阿朴啡、原荷叶碱、荷叶碱和莲碱的线性范围分别为0.109 6～0.657 6μg(r=0.999 5),0.021 0～0.126 0μg(r=0.999 5),0.103 0～0.618 0μg(r=0.999 8),0.085 6～0.513 μg(r=0.999 5),平均加样回收率(n=6)分别为99.5%,100.5%,97.5%和100.1%.30批市售品中4种生物碱类成分的含量分别为:2-羟基-1-甲氧基阿朴啡0.010%～0.076%,原荷叶碱0.002%～0.120%,荷叶碱0.008%～0.249%,莲碱0.008%～0.067%.结论 30批市售荷叶药材中4种生物碱类成分含量变化较大,其中原荷叶碱和荷叶碱的含量变化更为明显,应将4种生物碱同时纳入荷叶药材的质量控制.
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荷叶碱提取工艺的优化
目的 对荷叶中荷叶碱的提取工艺进行优选.方法 以荷叶碱的提取率为指标,单因素考察醇提次数,正交试验优选荷叶碱的提取工艺.结果 荷叶碱的佳提取工艺为75%乙醇,14倍量,提取两次,每次1.5 h.结论 通过优选的提取工艺,荷叶碱的提取率可以达到90%左右,工艺稳定,进一步开发相关产品,明确其减肥降脂机理,为系统研究荷叶碱奠定了基础.
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荷叶减肥有良效
荷叶为睡莲科多年水生草本植物莲的叶片,味略带苦涩.据测定,荷叶主要含有莲碱、荷叶碱、杏黄罂粟碱、桷皮素、荷叶黄酮甙等成分.中医历来称荷叶性平,把它作为清暑、利湿、止血的中药.
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荷叶碱对胰岛素抵抗小鼠的干预研究
目的 研究荷叶碱对饮食诱导的胰岛素抵抗小鼠模型的干预作用及其机制. 方法 以高脂饮食诱导24周的胰岛素抵抗小鼠为模型,分析荷叶碱对肥胖、血糖、胰岛素及稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数的影响,同时探讨其改善胰岛素抵抗的机制.结果 经过24周的高脂饮食,模型小鼠形成了明显胰岛素抵抗:肥胖(t=8.1274,P＜0.01)、高血糖(P＜0.05)、高胰岛素血症及HOMA-IR指数(t=10.215 4,P＜0.01;t=7.2897,P＜0.01).荷叶碱有效降低了体重(t=3.750 9,P＜0.01)及高糖血症(t=5.236 9,P＜0.01).血清胰岛素水平及HOMA-IR指数也分别降低了60.2％和66.8％ (t=6.870 3,P＜0.01;t=5.185 6,P＜0.01).荷叶碱通过上调肝组织中IR、IRS1、Glut2及Glut4 mRNA表达改善了糖代谢、提高了胰岛素敏感性(P＜0.05),但对IRS2影响不大(t=0.6261,P＞0.05).结论 荷叶碱降低了肥胖、高血糖及高胰岛素血症,缓解了胰岛素抵抗,这一作用可能与调控胰岛素信号通路、活化葡萄糖转运信号通路有关.
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荷叶中荷叶碱提取工艺的研究
荷叶为睡莲科植物莲 Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶,具有清热利湿,升发清阳,降脂减肥、止血散瘀等作用.<本草纲目>载:"荷叶服之,令人瘦劣,单服可以消阳水浮肿之气."今用荷叶配方生产降脂减肥茶者颇多.
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复方血脂宁配伍对主要活性成分溶出变化规律的影响
目的 研究复方血脂宁在不同配伍条件下6种主要活性成分(橙黄决明素、红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷、大黄素、二苯乙烯苷、荷叶碱及槲皮素)在水提液中的量变化,并采用Kohonen maps模型对成分量变化明显的中药进行数据分析,进而初步探究中药配伍对活性成分的溶出变化规律.方法 对复方中的不同味药分别配伍,采用UPLC法研究6种主要活性成分在配伍前后的量变化;对数据进行分析,进一步选取配伍后量变化明显且趋势存在差异的荷叶作为研究对象,采用有监督的Kohonen maps模型分析不同配伍方式对荷叶中7种化学成分的影响.结果 配伍后6种活性成分的量变化规律不同:荷叶碱、橙黄决明素、大黄素的量以降低为主,二苯乙烯苷的量降低,槲皮素的量升高,红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷无明显规律;与山楂配伍对荷叶中7种化学成分的影响较大,趋势多为溶出增加.结论 复方血脂宁不同配伍组合对活性成分溶出的影响不同,山楂与荷叶配伍后对荷叶所含成分溶出度的影响较大.
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pH区带逆流色谱法分离制备荷叶中生物碱
目的 建立对荷叶生物碱进行分离的pH区带逆流色谱方法.方法 溶剂系统为叔丁基甲醚-甲醇-水(4:1:5),上相添加三乙胺(10mmol/L)作为固定相,下相添加盐酸(5mmol/L)为流动相进行洗脱,在主机转速800 r/min、体积流量1.5 mL/min、检测波长254nm条件下进行分离制备.结果 从2.18 g荷叶提取物中一次分离得到N-去甲荷叶碱110 mg、O-去甲荷叶碱420 mg、荷叶碱310 mg和莲碱190 mg 4种生物碱,质量分数均大于98%:各化合物通过HPLC、MS和1H-NMR 进行了化学结构鉴定.结论 pH区带逆流色谱法是一种快速高效的分离纯化荷叶生物碱的方法.
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制备高效液相色谱分离纯化荷叶碱
目的研究制备型高效液相色谱Pep-HPLC分离纯化荷叶碱的方法.方法荷叶提取物经1%盐酸水溶液提取后,用氯仿萃取.萃取液蒸干,以流动相溶解.用Prep-HPLC分离制备.收集液浓缩到一定体积析出针状晶体,即得荷叶碱.结果该方法所得产品经MS、IR、UV、1H-NMR和HPLC图谱鉴定,与文献、对照品比较,确定为荷叶碱,质量分数大于98%,制备收得率大于49%.结论本法生产周期短,产品质量高,方法简便,生产费用低,荷叶碱产品可以用作分析方法的对照品.
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UPLC法同时测定荷丹片中8种指标成分
目的 建立UPLC法同时测定荷丹片中荷叶碱、补骨脂素、异补骨脂素、丹参酮ⅡA、丹参素、番泻苷A、番泻苷B、熊果酸8种指标成分的量.方法 采用UPLC法,Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),甲醇-乙腈(40∶60,A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,体积流量0.6 mL/min,梯度洗脱:0～4.0 min,90％ B:4.0～6.0 min,90％～80％B:6.0～9.0min,80％～70％B:9.0～10.5min,70％～60％B; 10.5～12.0min,60％～50％B,12.0～16.0min,50％～10％ B:分段变波长测定:0～4.0 min为215nm,4.0～12.0 min为270 nm,12.0～16.0 min为340 nm;柱温40℃;进样量1μL.分别对线性关系、精密度、重复性、稳定性及加样回收率进行考察.结果 被测定的8种指标成分分别在选定的范围内线性关系良好;精密度良好,RSD均小于3.0％;重复性良好,RSD均小于3.0％;在室温条件下24 h内稳定;平均加样回收率在99.21％～101.91％,RSD均小于3.0％.结论 本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于荷丹片的质量控制.
