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南方红豆杉不同组织总RNA提取方法研究
目的:从南方红豆杉不同组织中提取高质量的总RNA.方法:以南方红豆杉幼叶、嫩茎和种子为材料,采用Trizol法、CTAB法、热酚法、改良热酚法和天根RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法5种方法进行比较分析.结果:Trizol法基本未提取到南方红豆杉不同组织的RNA;CTAB法提取的RNA浓度较高,但OD260/OD280大于2.1,RNA降解严重;热酚法提取的RNA浓度较高,OD260/OD280均小于1.8,蛋白质和酚类物质等残留严重,质量较低;改良热酚法和试剂盒法28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带清晰,完整性好,OD260/OD280均在1.8～2.1范围内,纯度高.结论:Trizol法、CTAB法和热酚法均不适用于南方红豆杉总RNA提取,而改良热酚法和试剂盒法可提取到质量较好的南方红豆杉总RNA.
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提取金荞麦愈伤组织总RNA的一种有效方法
目的:建立金荞麦愈伤组织总RNA提取方法.方法:采用CTAB法结合LiCl沉淀的改良方法提取RNA,紫外分光光度检测、0.8%非变性琼脂糖凝胶电泳检测,RNA的反转录等评价RNA质量.结果:提取的总RNA 28S和18S条带清晰,且A260/A280在1.9～2.0,以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(500bp～5 kb).结论:该方法提取出的总RNA质量能满足RT-PCR等分子生物学操作的要求,且简单、有效、经济,可用于金荞麦愈伤组织总RNA的提取.
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一种党参高质量总RNA的提取方法
目的 建立提取高质量党参叶片总RNA的有效方法.方法 以山西陵川(药材生产管理规范)GAP基地栽培党参为材料,分别用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法提取党参总RNA,通过紫外光谱分析和甲醛变性凝胶电泳对提取的总RNA进行鉴定.结果 3种方法提取的RNA差异有统计学意义;Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法所提总RNA完整性较差,且有小分子盐类杂质,不能满足进一步的分子生物学研究;采用CTAB法提取的总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值约为2.0,A260/A230＞2.0,电泳28 S、18 S条带清晰,比值为1.5～2.0,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,可以满足下游分子生物学实验要求.结论 改良CTAB法提取的总RNA完整性好、纯度高,是一种提取高质量党参叶片总RNA的有效方法.
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党参根组织RNA提取的研究与优化
目的:建立党参根组织高质量总RNA的提取方法.方法:针对党参根组织多糖含量高的特点,比较了CTAB-LiCl,CTAB-PVP,改良Trizol法3种总RNA的提取方法.结果:CTAB-LiCl法无法提取得到总RNA,CTAB-PVP法提取的总RNA有多糖等杂质污染,改良Trizol法提取的总RNA无DNA及其它杂质污染,党参根组织的产量为120.8 μg·g-1,A260/A280在1.8 ～2.0间,A260/A230大于2.0.结论:改良Trizol法操作简单,提取时间短,提取的RNA可以用于后续分子生物学研究.
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长期冻存和新鲜胃癌组织总RNA提取方法的比较
背景:目前两种可靠、应用广的高通量RNA分离技术是基于异硫氰酸胍-酚︰氯仿的RNA分离技术和基于硅胶柱的RNA分离技术.在临床应用非常有限的组织材料时,有必要对RNA分离技术的可重复性和可靠性分别进行先期评价.目的:系统比较采用硅胶柱法和Trizol法从冻存、新鲜胃癌组织中分离总RNA的效果.方法:硅胶柱法和Trizol法分别提取长期-80 ℃冻存的(2年以上)和新鲜胃癌组织总RNA,紫外分光光度法比较RNA纯度,琼脂糖凝胶电泳分析28 S和18 S吸光度比值,进一步通过实时反转录-聚合酶链反应对扩增距mRNA polyA尾端不同大小片段的Ct值进行比较,间接判断不同大小mRNA的拷贝数及完整性.结果与结论:硅胶柱技术和Trizol方法在总RNA提取的纯度方面都表现很好.然而在RNA完整性方面,基于硅胶柱技术的提取方法要好于Trizol法,因为其核糖体RNA形式完好而且更好地保持了不仅短的及中等大小片段,对于较大的mRNA片段也保持更好.另外,与新鲜组织相比,长时间冻存对胃癌组织总RNA提取的影响很小.
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改进异硫氰酸/酚/氯仿一步法制备烟曲霉总RNA
目的:高质量地提取烟曲霉总RNA,为从转录水平研究烟曲霉病理机制奠定基础.方法:异硫氰酸/酚/氯仿一步法制备烟曲霉总RNA,1.5%琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪照相.结果:提取的RNA OD260/OD230＞2.0,OD260/OD280为1.8～2.0,电泳条带清晰,RNA纯度及完整性好.结论:该方法可用于制备高质量的烟曲霉总RNA.
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狭叶红景天不同部位总RNA提取比较研究
目的 从富含多酚和多糖的狭叶红景天的茎和叶中提取出高质量RNA.方法 比较了两种RNA提取方法,发现Trizal试剂法提取的RNA效果更好;同时,建立了一套完整检测RNA质量的科学方法.结果 应用该方法从狭叶红景天植物茎提取的RNA的纯度是:A260/A280为2.098,A260/A230为1.138,浓度为214 ng/μl,电泳条带清晰,RNA完整性好.由此法所确定的高质量RNA可直接用于分子生物学实验.结论 该方法可有效地从富含多酚和多糖的狭叶红景天的茎中提取高质量RNA,为高原珍稀药用植物分子生物学研究奠定基础.
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灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取方法的研究
目的:探讨灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取的有效方法.方法:采用SDS法、Trizol法、普通试剂盒法、改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法提取灰毡毛忍冬花蕾总RNA并比较其效果.结果:SDS法、Trizol法和普通试剂盒法均不适用于本样品总RNA的提取;改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均能有效去除蛋白质、多糖多酚及DNA,OD260/280为1.86-2.00,OD260/230为1.96-2.63,电泳条带清晰,RNA完整性好,且通过RT-PCR扩增能获得特异性条带.但以多糖多酚试剂盒法提取效果佳.结论:改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法均适合灰毡毛忍冬花蕾总RNA提取,完全满足后续RT-PCR等分子生物学研究.
关键词： 灰毡毛忍冬 花蕾 总RNA提取 改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法 -
药用植物白木香高质量总RNA提取方法的研究
目的:白木香次生代谢产物成分复杂,干扰其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或总RNA降解严重.为获得高质量的总RNA,本实验开展了白木香正常及结香组织采集及高质量总RNA提取方法的研究.方法:对从野外采集的白木香样品,用改良CTAB-LiC1法、去温浴的改良CTAB-LiC1法、SDS酸酚法、改良异硫氰酸胍-CTAB法和EASYspin RN09试剂盒5种方法分别对白木香叶、白木香枝条、白木香树干中的白木样品和结香样品进行RNA提取.结果:研究表明白木香枝条的离体样品室温保存5h内不影响总RNA质量,确定EASYspin RN09试剂盒是白木香叶RNA的佳提取方法,改良异硫氰酸胍-CTAB法是其他白木香组织RNA的佳提取方法.结论:用改良异硫氰酸胍-CTAB法大量提取白木香树干中的白木样品及结香样品RNA,其28S:18S为1.2～1.4,RIN值为6.8～7.5,并应用于转录组测序.
关键词： 白木香 总RNA提取 改良异硫氰酸胍-CTAB法 -
系统性红斑狼疮患者长期冻存全血中RNA的提取
目的 探讨从冻存1年以上的系统性红斑狼疮(SLE)患者的全血中提取RNA的实验方法.方法 以-80℃冻存了1年以上的SLE患者的全血为材料,先分离一定量的外周血白细胞,再按总RNA提取试剂盒的步骤提取RNA.结果 分光光度计检测,22例标本的总RNA量平均为(46.288±17.785)ng/μL,OD均值1.8～2.1,凝胶成像系统显示,RNA的电泳条带清晰,28S与18S比值为2:1;以RT-PCR方法扩增β-actin基因,均出现了142 bp的目标条带,说明提取的RNA质量高、完整性好,可以满足RT-PCR扩增需要.结论 从长期冻存的SLE患者的全血中可以提取RNA但存在一定的难度,冻存血量和预先分离白细胞是实验成功的关键.
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利用TRIzol(R)试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA
目的 建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法.方法 应用TRIzol(R)试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA,通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量,并用RT-PCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶和β-actin的表达.结果 利用TRIzol(R)和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织,A260/280比值在1.75～1.89之间.在10g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时,均可见28S及18S条带,并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影.大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶、β-actin RT-PCR产物电泳结果显示均有清晰的条带.结论 应用TRIzol(R)试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA,后者可用于RT-PCR研究.
关键词： 大鼠胰腺 总RNA提取 TRIzol(R)试剂 液氮 -
死亡大鼠组织中总RNA提取的质量控制及方法评价
目的 探讨不同商品化试剂盒在提取组织总RNA过程中的优劣与适用范围,为实验室的质量控制提供依据.方法 采用以膜提取技术为基础(SV total RNA isolation system)和以异硫氰酸/苯酚法为原理(TRIzol总RNA提取试剂盒)的两种试剂盒对死亡大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织进行总RNA的提取与评价鉴定,并使用琼脂糖变性凝胶电泳和2100芯片生物分析仪对提取的总RNA进行完整性鉴定和质量控制评价.结果 两种商品化试剂盒提取的总RNA纯度与得率均可满足实验要求.各组织脏器中总RNA得率依次为脾脏＞肝脏＞肾脏＞大脑＞肺脏＞心脏.结论 与TRIzol总RNA提取试剂盒相比,SV Total RNA Isolation System提取时对操作人员熟练度要求较低,2100芯片生物分析仪有望替代凝胶电泳技术用于总RNA提取时的质量控制.
关键词： 法医病理学 质量控制 总RNA提取 SV总RNA纯化系统
