首页 > 文献资料
-
沉香DNA提取方法及种质资源聚类分析研究
目的:分别建立适用于提取不同类型沉香样品(叶片、干燥枝条、药材)DNA的方法,通过ITS2序列对沉香药材进行种质资源聚类分析.方法:根据沉香叶片、干燥枝条、药材的组织差异,分别采用试剂盒法和优化的CTAB法提取DNA;利用紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增及ITS2序列测定来检测DNA的纯度、浓度及可用性,以比较不同DNA提取方法的效率;将样品测序结果与从GenBank下载的沉香属(Aquilaria spp.)、拟沉香属(Gyrinops spp.),及沉香药材常见混伪品的ITS2序列,进行聚类分析.结果:优化的CTAB法提取得到的DNA纯度比试剂盒法稍低,但浓度更高.两种方法所提沉香总DNA进行ITS2序列的PCR扩增成功率和测序成功率均为100％.ITS2序列能准确鉴别出4个沉香混伪品和2个拟沉香物种,且15个沉香样品ITS2序列与Aquilaria subintegra(泰国)、Aquilaria sinensis(中国)、Aquilaria crassna(柬埔寨、泰国)三个沉香物种均100％相似.结论:本研究中的两种DNA提取方法均可用于沉香DNA条形码研究;优化CTAB法比试剂盒法更适用于药材DNA的提取,该方法为有关中药材DNA的提取提供了参考;ITS2序列可为沉香种质资源的鉴定和系统发育分析提供必要的实验依据.
-
南方红豆杉不同组织总RNA提取方法研究
目的:从南方红豆杉不同组织中提取高质量的总RNA.方法:以南方红豆杉幼叶、嫩茎和种子为材料,采用Trizol法、CTAB法、热酚法、改良热酚法和天根RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒法5种方法进行比较分析.结果:Trizol法基本未提取到南方红豆杉不同组织的RNA;CTAB法提取的RNA浓度较高,但OD260/OD280大于2.1,RNA降解严重;热酚法提取的RNA浓度较高,OD260/OD280均小于1.8,蛋白质和酚类物质等残留严重,质量较低;改良热酚法和试剂盒法28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带清晰,完整性好,OD260/OD280均在1.8～2.1范围内,纯度高.结论:Trizol法、CTAB法和热酚法均不适用于南方红豆杉总RNA提取,而改良热酚法和试剂盒法可提取到质量较好的南方红豆杉总RNA.
-
两种方法提取布鲁氏菌脂多糖的比较
目的 比较酚水法和试剂盒法提取布鲁氏菌脂多糖的效果.方法 用酚水法和试剂盒法分别提取羊种布鲁氏菌标准株16M的脂多糖,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和银染方法比较脂多糖纯度和结构的差异.用ELISA法定量测定脂多糖浓度,稀释至相同浓度后通过鲎试剂凝集试验检测并比较脂多糖的凝集活性,并从操作过程等方面对两种方法进行比较.用SAS 9.3软件对所得数据进行统计分析,两组均数之间的比较,两组方差齐用Student t检验;若组间方差不齐,则使用调整的t′检验,以α=0.05进行统计学检验.结果 酚水法和试剂盒法提取的脂多糖纯度均较高,二者的鲎试剂凝集活性分别为(4.926±0.051)和(5.015±0.037)EU/ng,差异无统计学意义(t′=1.270,P=0.332).酚水法提取的脂多糖在17×103及26×103处存在缺失,而试剂盒法提取的脂多糖结构更加完整,过程也更加安全方便.结论 试剂盒法提取布鲁氏菌脂多糖比酚水法更具有优势.
-
Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合MALDI-TOF MS快速鉴定血培养阳性病原菌
目的 评估应用Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定血培养阳性标本中病原菌的符合率.方法 收集临床血培养阳性标本153例,应用Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法分别处理后,联合MALDI-TOF MS对菌种进行快速鉴定,快速鉴定结果与培养后结果进行比较.结果 经培养后确认,153例血培养阳性标本包括143例单数菌感染和10例复数菌感染标本.Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法均可在1 h内联合MALDI-TOF MS对血培养阳性标本进行快速鉴定.应用Sepsityper Kit试剂盒法联合MALDI-TOF MS 直接鉴定标本中病原体的种、属水平的符合率为76. 2% (109/153)和7. 8% (12/153).应用血清分离胶法联合MALDI-TOF MS直接鉴定标本中病原体的种、属水平的符合率为75.1%(101/153)和8.5%(13/153).单数菌感染中,Sepsityper Kit试剂盒法联合MALDI-TOF MS对革兰阴性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为95.2%(79/83)和0%(0/83),对革兰阳性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为57.5%(27/47)和23.4%(11/47),对念珠菌的种、属水平的鉴定符合率分别为33.3%(3/9)和11.1%(1/9).血清分离胶法联合MALDI-TOF MS在单数菌感染血培养瓶中对革兰阴性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为90.4%(75/83)和4.8%(4/83),对革兰阳性菌的种、属水平的鉴定符合率分别为55.3%(26/47)和14.9%(7/47),对念珠菌的种、属水平的鉴定符合率分别为0%(0/9)和22.2%(2/9).对复数菌感染中,只有Sepsityper Kit试剂盒法有1例与培养鉴定结果一致,其他标本均都不能准确鉴定出多种细菌,但均都可以正确鉴定出其中一种细菌.结论Sepsityper Kit试剂盒或血清分离胶联合MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血标本中的病原菌,可以1 h内得到鉴定结果,且与培养结果比较具有较高的鉴定符合率.相对于传统的血培养阳性标本的分离培养鉴定流程,Sepsityper Kit试剂盒法或血清分离胶法联合MALDI-TOF MS方法具有快速、操作简便等优点,可以满足临床对快速诊断和及时有效合理抗菌治疗的需求,具有重要的临床应用价值.
-
荧光定量检测法比较三种提取大豆加工样品方法的优劣
运用荧光定量检测的方法,比较了CTAB法、试剂盒法和SDS法提取大豆加工样品的优劣.通过测定其内源基因Lectin得到的Ct值大小比较基因表达水平的高低,通过标准加入法得到标记基因35 S和内源基因Lectin Ct值的差值ΔCt值,结合标准曲线,计算出每种混合样品中转基因成分的百分含量,进而比较这三种提取方法对PCR反应的抑制程度.总体说来,CTAB法提取大豆加工样品得到的核酸适合PCR反应,其次是试剂盒法,SDS法稍差.
-
试剂盒法现场快速检测食品中甲醛次硫酸氢钠
吊白块也称雕白块,化学名为甲醛次硫酸氢钠,主要用于纺织工业,已被国际上列为能引起致癌作用的物质.吊白块在酸性或受热条件下可分解产生甲醛与亚硫酸氢钠,其主要危害来自于分解出的甲醛.甲醛对人体肝脏、肾脏及神经系统等有较大损伤,并有致癌和畸形病变作用.
-
生活饮用水中铝的试剂盒法快速测定
2001年,我国卫生部颁布的<生活饮用水质卫生规范>[1]中将铝列为常规检验项目,并规定铝的限值为0.2mg/L.与之相配套的<生活饮用水检验规范>[2]中铝的检测方法包括分光光度法、无火焰原子吸收分光光度法和电感耦合等离子法(ICP).ICP法受到昂贵仪器的限制;原子吸收法需要涂钽石墨管,目前国内无商品化的产品,涂钽过程复杂并且其质量将影响测定结果;现有的分光光度法操作繁琐,操作过程中对玻璃仪器和试剂等条件要求严格,有些试剂无国产化.本文选用HACH DR/2500型分光光度计和特定试剂盒直接测定水中铝.现报告如下.
-
碘酸钾食盐检测试剂盒法与碘量法测定食盐中碘含量的符合程度分析
防治碘缺乏病采取在食盐中加入碘酸钾补充碘取得了很好的效果.要求我们卫生检验部门必须加强对食盐中碘含量监测工作,但由于我国区域面积较广,碘量方法操做起来不但比较繁琐,而且主要不能适应现场测定的需要.为克服以上不利凶素,我们对检测试剂盒法与国标中碘量法进行了验证并比较,县体过程如下.
-
煮沸裂解法和试剂盒法提取浸矿菌基因组DNA的比较
目的:在生物浸出中,微生物群落结构分析有着重要意义,而群落分析的基础是提取纯度高、损失少的基因组DNA.为了解决这一问题,本实验通过比较两种较常用的DNA提取方法,煮沸裂解法和试剂盒法,寻找一种灵敏、快速、经济实用的制备浸矿细菌基因组DNA的方法.方法:分别用煮沸裂解法和试剂盒法提取6种浸矿菌的基因组DNA,从所提取的基因组DNA浓度、纯度、回收率和对PCR扩增反应的影响方面比较了两种方法的提取效果;用两种方法来处理不同浓度梯度的一种菌,通过实时定量PCR来比较两种方法的灵敏性.结果:相同处理量(108个)的革兰氏阳性菌(1株)、革兰氏阴性菌(4株)、古菌(1株)经两种方法提取的基因组DNA差异较大,煮沸裂解法所得的6组基因组DNA更纯,其OD260/OD280的值更接近1.8-2.0(纯DNA的OD260/OD280在1.8-2.0之间),前者所提DNA回收率大可达后者的16.7倍;煮沸裂解法只需较少菌(102个)便能让实时定量PCR检测到所提DNA模板浓度,比试剂盒法灵敏.结论:两种方法提取的基因组DNA均可用于后续的PCR扩增,此外,前者提取的DNA浓度随细菌浓度增加而呈线性增大,而后者随菌浓度增大,所提DNA量增加有限,因此,在生物浸出中微生物基因组DNA的提取可直接采用简单快速的煮沸提取法,为实验节约成本和时间.
-
淮安市尿碘检测结果误差分析
目的 通过对尿碘检测结果误差分析,找出实验过程中存在问题,提高检测质量.方法 采用尿碘快速定量检测试剂盒法,对203份尿样标本连续6天进行6次检测,并对结果精密度进行分析.结果 203份尿样中,RSD＞ 10％的共有19份,占总标本数的9.4％;其中,每份尿样的6次检测结果中均有1个偏离平均值较大.结论 淮安市实验室尿碘检测能力基本满足尿碘监测需要,检测结果的4个主要影响因素为试管的清洁度、加样的精确度、实验温度、突变点的确定,需要加强控制,确保实验室尿碘检测质量.
-
试剂盒法与过硫酸铵消化法测定尿碘含量的比较
[目的]比较尿碘测定试剂盒法和现行标准方法过硫酸铵消化法的优缺点,选择更好的实验室测定尿碘的方法.[方法]比较2种方法的精密度并用t检验的方法比较其准确度.[结果]过硫酸铵消化法的相对标准偏差为1.3%～3.9%,试剂盒法的相对标准偏差为2.0%～2.9%,2种方法准确度类似.[结论]试剂盒法测定尿碘较过硫酸铵消化法快速、操作简便,有较高的精密度和准确度,适用于实验室尿碘的测定.
-
试剂盒法与国标法检测尿碘含量的实验对比
目的 对比试剂盒法与国标法在检测标准物质和尿样中碘含量浓度的结果差异,验证试剂盒法的实用性.方法 分别采用试剂盒法与国标方法对标准物质和不同人群尿样的碘含量进行检测,进行统计学分析.结果 经统计学分析,试剂盒法与国标法两种方法检测结果差别无统计学意义.结论 试剂盒法具有简便、准确的特点,适于推广.
-
试剂盒法快速检测食品中的4种合成色素
目的:了解合成色素的快速检测试剂盒法的可靠性.方法:对饮料、冰淇淋、畜禽制品中的柠檬黄、日落黄、胭脂红和苋菜红4种合成色素快速检测试剂盒法与液相色谱法检测结果对比分析.结果:试剂盒法与仪器法吻合性高,快速、方便、灵敏度高、特异性好.结论:试剂盒法可用于现场的卫生监督检验.
-
试剂盒法尿碘检测应注意事项的探讨
随着我国经济及科学技术的迅速发展,尿碘测定方法学的研究及进展速度更为突飞猛进,目前国家九五攻关课题的资助下,已研制出的在线消化自动尿碘测定仪器和快速检测试剂盒均是当前具有国际先进水平的研究成果.本人于2005年～2007年连续3年参加了中国残疾联合会主持的中瑞智力残疾预防与康复合作项目-补碘监测工作,对试剂盒法有关问题及注意事项与同行们交流如下.
-
试剂盒法与差速超速离心法所提血清外泌体的形态学比较
目的：比较常用的外泌体提取方法，获得可靠有效的血清外泌体提取方法。方法：电镜下观察鉴定差速超速离心法、试剂盒法及组合优化方法所提外泌体的形态；蛋白印迹法检测外泌体标志蛋白CD63的表达。结果：差速超速离心法提取的外泌体呈茶托样双层膜结构，直径100 nm左右；试剂盒法提取的外泌体颗粒多，大小50~200 nm之间，无明显的立体结构，经差速超速离心法纯化后形态与差速超速离心法类似，经试剂盒法纯化后与仅使用一次试剂盒提取的外泌体无明显形态差异；四种方法所提外泌体表达标志蛋白CD63。结论：差速超速离心法是更为可靠且有效的外泌体提取方法。
-
优化比色法测定不同产地天花粉中二氧化硫残留量
目的 通过优化比色法反应条件,建立比色分光光度法测定天花粉中二氧化硫的残留量.运用试剂盒法、比色法、顶空气相色谱法验证,探讨这3种方法测定结果的相关性.方法 采用紫外分光光度法测定试验佳吸收波长;利用响应面分析法对影响含量的因素进行优化,在单因素试验的基础上选取试验因素与水平,根据中心复合设计试验原理,采用四因素三水平的响应面分析法确定佳比色法反应条件.结果 确定佳吸收波长为560 nm;佳比色法反应条件:氨基磺酸铵溶液、氢氧化钠溶液、盐酸副玫瑰苯胺溶液用量分别为0.5、1.0、1.0 mL;反应时间为15 min.在该反应条件下,二氧化硫残留量在1.0～50.0 μg与峰面积线性关系良好,r=0.9998;平均回收率为104.5％～105.3％,RSD为0.30％.结论 该方法操作简便,重现性好,线性范围宽,可为天花粉及其相关加工产品中二氧化硫残留量的测定提供参考.
-
ABC-ELISA法与快速ELISA试剂盒法检测华支睾吸虫抗体的结果比较
ABC(Avidin-Biotin-Peroxidase complex)技术,即生物素-亲和素-酶结合物技术,80年代开始已广泛应用于各种免疫学检测.这种技术利用生物素(biotin)与亲和素(avidin)之间具有的高度亲和力以及1分子亲和素可与4分子生物素结合的特性,大大增强检测的敏感性.为了进一步地改进目前应用于华支睾吸虫病防治现场的ELISA试剂盒诊断方法,本实验用ABC-ELISA法检测华支睾吸虫感染循环抗体,并与快速ELISA试剂盒法(简称快速ELISA法)进行比较.
-
乙酰泽泻醇降低胆固醇分子机制研究
目的：从分子水平探讨乙酰泽泻醇降低胆固醇（TC）的作用机理。方法利用试剂盒法测定了调脂中药泽泻主要有效成分23-乙酰泽泻醇 B 和24-乙酰泽泻醇 A 对高脂小鼠 TC 的影响，利用试剂盒法、 Western blotting 技术结合分子模拟技术研究两者对 TC 代谢关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶 A（HMG-CoA）还原酶作用的分子机理。结果乙酰泽泻醇能显著降低高脂小鼠 TC（P <0.01， P <0.05），23-乙酰泽泻醇 B 作用强度高于24-乙酰泽泻醇 A（P <0.05），同时在体内、体外均可剂量依赖性下调 HMG-CoA 还原酶活性（P <0.01），且23-乙酰泽泻醇 B 对该酶作用强于24-乙酰泽泻醇 A（P <0.05）。两者均未显著下调 HMG-CoA 还原酶的蛋白表达（P＞0.05）。两者与 HMG-CoA 还原酶结合的关键氨基酸残基可能为 Lys691、 Asp767、 Asn658。结论乙酰泽泻醇降低 TC 的机制可能是其原型药物通过抑制 HMG-CoA 还原酶活性来达到，且可能是通过直接竞争性与 HMG-CoA 还原酶结合抑制其作用，乙酰泽泻醇的舵手基团为其侧链，侧链与母环折叠结合弱，打开结合强。
-
全血DNA提取试剂盒改良法
目的建立简便、快捷、高纯度、高浓度的DNA提取方法.方法对原美国生产的EZ-NA Blood DNA Kit试剂盒方法进行改良(简称全血DNA提取试剂盒改良法),并与原试剂盒法、经典酚-氯法改良法(微量法)[1]进行比较.取EDTA-2Na抗凝血,分别用3种方法提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳对其进行定性测定,并用紫外分光光度法定量测定.结果 DNA提取的纯度A260/A280试剂盒改良法、原试剂盒法和微量法分别为1.8083±0.1655、2.0877±0.323 0、1.7734±0.1152,前两法有显著性差异(P＜0.05),试剂盒改良法提取DNA的纯度明显高于原试剂盒法,与微量法无显著性差异(P＞0.05);改良法提取DNA的浓度分别为75.247 6±18.025 9、45.277 1±14.97 3、123.875 8±74.736 7,与前两法的DNA提取浓度有显著性差异(P＜0.05),明显高于原试剂盒法;DNA电泳图显示试剂盒改良盒法与微量法均很清晰,原试剂盒法有明显的拖尾现象.结论试剂盒改良法提高了DNA提取的纯度和浓度,可作为分子生物学研究DNA提取较好的选用方法.
-
试剂盒法测定尿碘结果不理想的原因分析
尿碘水平现已成为国家防治IDD重要的监测指标，它能更为直观反映出地方居民碘营养状况，因此尿碘结果准确性直接影响当地碘缺乏病防控政策［1］。近两年，我市加大尿碘监测力度，采用尿碘快速定量检测试剂盒法测定了5万余份尿样标本（孕妇儿童为主）。由于时间紧，工作量大，有些尿碘检测结果误差较大，部分尿碘结果不是很理想，返工率高达11．7％。通过实验过程得到一些体会，与同行们交流。
