首页 > 文献资料
-
虫草属基因组DNA提取方法改良研究
虫草属是经过菌感染昆虫后形成的一大类昆虫病原真菌,有冬虫夏草、蛹虫草、亚香棒虫草、半翅目虫草、大团囊虫草、镰刀状虫草、凉山虫草等.其中,冬虫夏草是高级滋补名贵中药材,所含的腺苷等活性成分含量高,而其他虫草并不全具有保健效用.由于虫草属的各科虫草外形相似,冬虫夏草的野生资源匮乏,人工及混杂品充斥市场,因此,虫草属各科的鉴定与分离工作具有一定的难度[1-2].目前,生药学鉴定结合化学分析的方法较为普遍,以生物基因组DNA序列多样性为基础,研究不同物种间遗传差异的DNA指纹图谱鉴定方法也有开展[3].而虫草属各科物种生长周期长、生长速度缓慢,造成虫草属组DNA提取时纯度受限,容易残留蛋白质、次生代谢物、色素等,干扰检测.我们采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为基础,针对虫草属组DNA的特殊物质进行改进,建立了特异性强、稳定性好、鉴别可靠性强的虫草属DNA提取检测方法.
-
豆奶粉基因组DNA不同提取方法的比较
以三种市售不同品牌的豆奶粉为材料,利用CTAB法和SDS法提取豆奶粉基因组DNA,探索从豆奶粉中获得高质量DNA的提取方法.结果表明:CTAB法提取的三种豆奶粉DNA的OD260/OD280值在2.01～2.05,因组DNA纯度较高,符合要求.琼脂糖凝胶电泳检测结果显示利用CTAB法获得的三种豆奶粉基因组DNA的电泳条带均清晰明亮,而且比SDS法获得的电泳条带更明亮,无弥散拖尾.因此,CTAB法是提取豆奶粉基因组DNA的更好更有效的办法,是理想的提取豆奶粉基因组DNA的一种方法,为进一步开展豆奶粉食物掺假、转基因成分测定奠定基础.
-
中药DNA条形码鉴定中的DNA提取方法研究
目的:建立一种直接从药材中提取DNA的方法以满足中药材DNA条形码研究的需要.方法:以麦冬药材为实验对象,对比5种常用植物DNA提取方法,筛选出优方法后,对不同部位入药的10种中药材进行DNA提取,采用琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增效果进行检测.结果:改良的CTAB法较适合药材DNA提取,虽然所有样品DNA都出现降解,但基于ITS2序列引物PCR扩增成功率为90％.结论:通过增加药材的预处理、核分离液等步骤,并改良CTAB浓度等措施,CTAB法能够用于上述不同药用部位入药的9种药材DNA提取,可以为中药DNA条形码鉴定中的DNA提取提供参考.
-
沉香DNA提取方法及种质资源聚类分析研究
目的:分别建立适用于提取不同类型沉香样品(叶片、干燥枝条、药材)DNA的方法,通过ITS2序列对沉香药材进行种质资源聚类分析.方法:根据沉香叶片、干燥枝条、药材的组织差异,分别采用试剂盒法和优化的CTAB法提取DNA;利用紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增及ITS2序列测定来检测DNA的纯度、浓度及可用性,以比较不同DNA提取方法的效率;将样品测序结果与从GenBank下载的沉香属(Aquilaria spp.)、拟沉香属(Gyrinops spp.),及沉香药材常见混伪品的ITS2序列,进行聚类分析.结果:优化的CTAB法提取得到的DNA纯度比试剂盒法稍低,但浓度更高.两种方法所提沉香总DNA进行ITS2序列的PCR扩增成功率和测序成功率均为100％.ITS2序列能准确鉴别出4个沉香混伪品和2个拟沉香物种,且15个沉香样品ITS2序列与Aquilaria subintegra(泰国)、Aquilaria sinensis(中国)、Aquilaria crassna(柬埔寨、泰国)三个沉香物种均100％相似.结论:本研究中的两种DNA提取方法均可用于沉香DNA条形码研究;优化CTAB法比试剂盒法更适用于药材DNA的提取,该方法为有关中药材DNA的提取提供了参考;ITS2序列可为沉香种质资源的鉴定和系统发育分析提供必要的实验依据.
-
改进的CTAB法提取32种中药破壁饮片DNA及物种鉴定
中药破壁饮片是由传统中药饮片经过气流破壁技术加工而成,已失去了原药材原有的外观性状特征,传统的鉴别方法已很难鉴别其真伪.本研究选用ITS2序列作为DNA条形码对32个中药破壁饮片品种进行研究,验证DNA条形码技术应用于中药破壁饮片上的可行性.通过提取32个品种的DNA、PCR扩增及双向测序获得ITS2序列,在中药材DNA条形码鉴定系统和NCBI数据库中进行比对.实验结果表明:32个品种通过改良的CTAB法均能成功提取DNA,PCR扩增及测序后均能得到高质量的ITS2序列.因此,基于ITS2序列的DNA条形码技术可有效地鉴定中药破壁饮片,为中药破壁饮片真伪鉴别提供有效手段.
-
破布木果基因组DNA不同提取方法比较研究
目的：采用不同方法对维药破布木果基因组DNA进行提取,为破布木果基因组DNA的研究提供参考。方法采用改良CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法和改良SDS(十二烷基磺酸钠)法提取破布木果基因组DNA,并采用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳技术检测提取DNA的纯度和浓度。结果分光光度法检测结果表明,用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度优于改良SDS法,无蛋白质和RNA污染。琼脂糖凝胶电泳结果表明,2种方法提取得到的基因组DNA电泳图谱均有明显的主带出现,但改良SDS法提取的基因组DNA降解较多。结论改良CTAB法可以提取相对较高质量的破布木果基因组DNA。
-
荧光定量检测法比较三种提取大豆加工样品方法的优劣
运用荧光定量检测的方法,比较了CTAB法、试剂盒法和SDS法提取大豆加工样品的优劣.通过测定其内源基因Lectin得到的Ct值大小比较基因表达水平的高低,通过标准加入法得到标记基因35 S和内源基因Lectin Ct值的差值ΔCt值,结合标准曲线,计算出每种混合样品中转基因成分的百分含量,进而比较这三种提取方法对PCR反应的抑制程度.总体说来,CTAB法提取大豆加工样品得到的核酸适合PCR反应,其次是试剂盒法,SDS法稍差.
-
中成药DNA提取技术优化及其在人参类制剂分子鉴定中的应用
目的 建立并完善从中成药及保健品中提取DNA的有效方法,并在人参类制剂中进行验证.方法 使用中成药和保健品中常用的辅料(如淀粉、蔗糖、葡萄糖等)模拟CTAB法提取DNA过程,用以筛选影响提取DNA效率的因素;使用甲醇作为沉淀试剂优化传统的CTAB法,并使用MAS-PCR方法对市场上人参类中成药及保健品进行分子鉴定,以验证优化的技术.结果 中成药及保健品中的淀粉(包括药源性淀粉和辅料添加的淀粉)通过CTAB反应后生成极性较大的复合物,其与70％乙醇不能互溶,而且在碱性条件下对DNA有强烈的溶解作用,从而影响了CTAB法提取DNA的提取效率;利用甲醇作为沉淀试剂能够有效去除CTAB裂解过程中产生的高极性复合物的影响,70％甲醇-醋酸钠溶液能够有效提取中成药及保健品的DNA;利用优化的DNA提取方法和MAS-PCR法实现了11种市售人参类制剂的快速分子鉴定,结果显示8种与商品描述一致、1种有掺伪情况、2种为伪品.结论 使用甲醇作为沉淀试剂优化传统的CTAB法,可以较好地克服中药制剂中淀粉对DNA提取的不利影响,可以有效地实现基于DNA的中药制剂分子鉴定.
-
笃斯越桔果实总DNA提取方法的比较研究
目的 探讨越桔果汁总DNA的佳提取方法.方法 分别采用SDS法、高盐低pH值法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取越桔果汁的基因组DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳及RAPD-PCR检测.结果 SDS法、高盐低pH值法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取越桔果汁的基因组DNA其OD260/OD280分别为1.944、1.738、1.661、1.813,其浓度分别为2.363 μg/μl、0.548 μg/μl、0.735 μg/μl、1.455 μg/μl;电泳检测显示异硫氰酸胍法提取DNA条带清晰,扩增产物多.结论 用异硫氰酸胍法提取越桔果汁总DNA优于其它方法.
-
黑龙江省不同产地满山红遗传多样性的RAPD分析
目的:分析不同产地满山红遗传背景与遗传关系,建立中药满山红的RAPD分析方法.方法 CTAB法提取不同产地满山红的基因组DNA:琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物,SPSS17.0软件进行聚类分析,NTSYS2.10e软件进行遗传距离计算.结论:从100条随机引物中筛选出10个随机引物,其扩增产物谱带多,特征好,共扩增出806条条带,多态性条带数710条,多态性比例为88.1％.结论:不同产地间的满山红存在丰富的遗传多样性,RAPD分析技术可用于鉴定满山红.
-
中药蒲公英基因组总DNA提取方法研究
目的 寻找一种快速简便的蒲公英干品总DNA的提取方法.方法 用改良CTAB、SDS、高盐低pH 3种提取方法及液氮、玻璃砂2种研磨方法提取蒲公英总DNA,采用蛋白核酸测定及电泳检测所得DNA的纯度和浓度.结果 3种提取方法所得到的DNA纯度和浓度不同,改良CTAB法提取总DNA纯度和浓度较高,电泳显示主条带较清晰,降解较少；2种研磨方法蛋白核酸测定及电泳结果相近.结论 改良CTAB法适用于蒲公英药材基因组DNA的提取.
-
荭草DNA提取方法实验研究
目的 利用不同方法对荭草DNA提取,比较提取质量的差异,为研究药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供优质基础.方法 采用改进的CTAB法和SDS法提取荭草叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260/OD280的比值,检测所提DNA的纯度和质量.结果 采用CTAB法提取的荭草基因组DNA样品的纯度和浓度均高于SDS法,其DNA的OD260/OD280值为1.801～1.993,CTAB法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足RAPD、SSR/ISSR扩增模板的需求.结论 改良CTAB法是提取荭草基因组DNA的佳方法.
-
中草药干品和鲜品基因组总DNA提取及质量比较研究
目的 探讨中草药干品和鲜品总DNA的提取方法,并比较干、鲜品总DNA质量之间的差别,为后续研究奠定基础.方法 分别采用SDS法和改良的CTAB法提取6种中草药干品和鲜品总DNA,并对其进行核酸含量测定、电泳检测和酶切反应检测. 结果改良CTAB法提取的DNA质量要高于SDS法,在干品和鲜品样品间,干品提取的DNA质量要高于鲜品.利用CTAB法提取鲜品和干品的各6种DNA样品,进行酶切反应得到了清晰的酶切条带.结论 改良的CTAB法能够获得高质量的中草药总DNA,且该方法得到的干品DNA比鲜品DNA质量更高,酶切验证二者都可以用于进一步的实验分析.
-
玄参总DNA提取方法的比较研究
目的 探讨药材玄参总DNA的佳提取方法 .方法 分别采用SDS法和CTAB法提取药材玄参总DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳检测.结果 采用SDS法提取的总DNA其OD260/OD280=1.83,而采用CTAB法提取的总DNA其OD206/OD208=1.64;DNA电泳检测显示采用SDS法提取的总DNA条带清晰,而采用CTAB法提取的总DNA出现严重的拖尾现象.结论 用SDS法提取药材玄参总DNA优于CTAB法.
-
蒙药材山野豌豆总DNA提取方法研究﹡
目的：寻找快速、简便的山野豌豆总DNA提取方法。方法采用4种不同方法（CTAB法、SDS法及改进CTAB法、改进SDS法）提取山野豌豆总DNA，通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测其纯度，以筛选出优提取方法。结果改进CTAB法和改进SDS法所得的山野豌豆总DNA纯度都较高，A260和 A280分别为(1.9128±0.0827)和(1.8767±0.0408)。改进CTAB法提取到的总DNA电泳时DNA条带亮度明显，无拖尾现象。结论改进CTAB法是提取山野豌豆中高质量总DNA的有效方法。
-
改良CTAB法提取石斛总DNA
植物总DNA的提取是分子生物学研究的基础,虽然提取植物总DNA的方法有很多[1～4],对石斛总DNA的提取也有一些报道[3～4],然而按这些方法所提取出来的DNA并不能达到预期的效果.
-
川贝母基因组DNA提取方法的研究
目的 通过比较不同方法提取的基因组DNA的质量差异,选择一种可靠、简单且低成本的川贝母基因组DNA提取方法,满足药典中川贝母分子鉴别的要求.方法 采用碱裂解法、十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB法)、十二烷基硫酸钠法(SDS法)、改良SDS法和试剂盒法分别提取川贝母基因组DNA,经蛋白核酸分析仪检测、琼脂糖电泳分析和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法来评价提取基因组DNA的质量.结果 除碱裂解法外,CTAB法、SDS法、改良SDS法和试剂盒法均能从川贝母中提取基因组DNA,其中改良SDS法和试剂盒法提取的基因组DNA质量相当,但是改良SDS法成本更低,操作更简单.结论 改良SDS法更适用于药典中的川贝母分子鉴别试验.
-
玉竹基因组DNA的提取与分析
目的 以玉竹根茎为材料,寻找一种适合于玉竹总DNA提取的方法,便于下游分子生物学的操作.方法 采用经典CTAB法与改良CTAB法.结果 改良CTAB法提取得到的DNA可以很好地用于PCR扩增.结论 改良CTAB法适用于类似玉竹这类含多糖较多的根及根茎类中药材DNA的提取.
