虫草属基因组DNA提取方法改良研究

虫草属是经过菌感染昆虫后形成的一大类昆虫病原真菌,有冬虫夏草、蛹虫草、亚香棒虫草、半翅目虫草、大团囊虫草、镰刀状虫草、凉山虫草等.其中,冬虫夏草是高级滋补名贵中药材,所含的腺苷等活性成分含量高,而其他虫草并不全具有保健效用.由于虫草属的各科虫草外形相似,冬虫夏草的野生资源匮乏,人工及混杂品充斥市场,因此,虫草属各科的鉴定与分离工作具有一定的难度[1-2].目前,生药学鉴定结合化学分析的方法较为普遍,以生物基因组DNA序列多样性为基础,研究不同物种间遗传差异的DNA指纹图谱鉴定方法也有开展[3].而虫草属各科物种生长周期长、生长速度缓慢,造成虫草属组DNA提取时纯度受限,容易残留蛋白质、次生代谢物、色素等,干扰检测.我们采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为基础,针对虫草属组DNA的特殊物质进行改进,建立了特异性强、稳定性好、鉴别可靠性强的虫草属DNA提取检测方法.

虫草属核苷类成分分析方法的研究进展

为加强对虫草属核苷类化合物的研究开发,对国内外近15年虫草属核苷类成分的多种检测方法进行综述.以虫草属核苷为研究对象,对HPLC测定法、毛细管电泳法及薄层色谱扫描法等3种检测方法进行整理,并将HPLC法按不同检测器进行分类对比.HPLC法用于核苷类成分的定性、定量分析,具有灵敏度高、分离速度快和分离效率高的特点,其中,LC-MS检测方法适应性广、分离能力强、检测限低,此外,还可以提供每一个组分丰富的结构信息和相对分子质量.LC-MS检测方法在核苷类成分检测中越来越广泛的应用,它不仅仅局限于虫草属核苷类成分含量测定的目的,更有利于研究人员从分子水平上开展对虫草属核苷或其他含有核苷药材的深入研究.

虫草属EST-SSR标记系统的建立研究

目的:通过球孢虫草、蛹虫草EST设计EST-SSR引物,建立虫草属EST-SSR标记系统.方法:从NCBI公共数据库下载获得虫草EST,利用Sequece Seiners 1.2软件去除冗余序列并设计引物,进行PAGE电泳.结果:通过去除EST总序列中低质量的和冗余的序列后,得到全长为2 953 173 bp的4 556条无冗余球孢虫草EST.从中发掘出718个EST-SSR,分布于616条EST中,出现频率是15.8％.平均分布频率是每4 096 bp出现1个,三核苷酸重复序列有419个,是出现多的重复类型.蛹虫草EST去冗余后得到1 363条无冗余EST,共含有1 117个EST-SSR,出现频率为81.95％,出现多的重复类型是A核苷酸重复.根据球孢虫草EST-SSR序列,设计合成50对引物,有扩增产物的引物为34对,占总设计引物数的68％.根据蛹虫草EST-SSR,设计合成40对引物,有扩增产物的引物为39对,占总设计引物数的97.5％.基于SSR标记进行聚类分析,7种虫草无性型均能分开,且分为4支.结论:虫草属EST-SSR出现频率较高、类型较丰富、多态性潜能较高,具有较高的利用价值.球孢虫草和蛹虫草EST开发的SSR标记在虫草属有较好的转移性与通用性,可以很好的应用于虫草种间遗传关系的研究.应用虫草物种EST建立分子标记是一条简便而又有效的途径.

虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测研究

目的 分析虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测效果,建立一种用于虫草属的DNA分子指纹高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测方法.方法 分别对虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶终浓度、胶电泳步骤、胶固定方案、胶染色方法、胶显色步骤进行分析,确定利于虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶DNA多态性展现的方案.结果 确定虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测方案,分别为聚丙烯酰胺凝胶浓度为6％、银染染色液为0.3％的AgNO3、胶显色步骤中显影液为强碱NaOH和0.5％的甲醛溶液,且NaOH的浓度为2％.结论 本研究所建立的银染检测及显带体系适用于虫草属基因组聚丙烯酰胺凝胶电泳研究.

冬虫夏草的药食应用

冬虫夏草是一种传统的名贵滋补中药材,与天然人参、鹿茸并列为三大滋补品.它是由肉座菌目麦角菌科虫草属的冬虫夏草菌寄生于高山草甸土中的蝠蛾幼虫,使幼虫僵化,在适宜条件下,夏季由僵虫头端抽生出长棒状的子座而形成(即冬虫夏草菌的子实体与僵虫菌核构成的复合体).

虫草花是虫草的花吗?

虫草花,又叫北虫草、蛹虫草,在新食品药品归类中被定义为新资源食品.北虫草,属真菌门,为子囊菌亚门麦角菌科虫草属.主要成分为虫草素、虫草多糖、虫草酸、SOD(超氧化物歧化酶),还有一些氨基酸和微量元素.看起来,营养成分和冬虫夏草很接近,但是含量相差较远.两者的外形相差得更远,冬虫夏草是动物和真菌类的综合体,下半部分是幼虫尸体,上部是冬虫夏草菌的子座;虫草花,被规定为新资源食品,是目前人工培育的一种真菌.

无性型戴氏虫草和粉被虫草营养成分的分析

人工蛹虫草化学成分研究

人工蛹虫草Cordyceps militaris(L.)Link又称北冬虫夏草,与冬虫夏草同属麦角菌科虫草属.北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用[1].<新华本草纲要>记载其"性平,味甘,有益肺肾,补精髓,止血化痰"等功效,用于肺结核及老人虚弱和贫血等症,为珍贵的中药材[2].目前由于人们疯狂搜寻挖掘冬虫夏草,导致生态环境的破坏,因而与冬虫夏草齐名的蛹虫草在国际上日益受到人们的关注,它的开发与生产也为我国开辟了新的营养源和药源.对于冬虫夏草化学成分的研究较多,而对人工蛹虫草化学成分研究较少,仅见姜弘等[3]从人工蛹虫草子实体中分离得到8个化合物,分别为核苷类、甾醇和脂肪酸类化合物.我们现报道从其人工培养的子实体中得到7个化合物,其中化合物Ⅰ,Ⅴ～Ⅶ,为首次从该真菌中分离得到.本实验通过对人工蛹虫草化学成分的系统研究,对比两者的化学成分的异同,为人工蛹虫草代替冬虫夏草药用提供研究基础.

虫草属真菌多糖制备及化学结构的研究现状与思考

虫草是一类化学成分和药理作用多样,在生物医药领域有广阔应用前景的复型真菌.多糖是虫草的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、降血糖等广泛的生物活性.促进虫草属真菌多糖的研究开发,对其来源、制备、化学结构等研究现状进行了综述,并针对当前多糖的研究进展,提出了一些值得关注的研究方向.

九州虫草中核苷类成分的HPLC法测定

虫草属[Cordyceps(Fr.)Link]真菌是一大类昆虫病原真菌,迄今记载的已有360多种,在我国分布的有70多种[1].冬虫夏草为我国传统的名贵药材,具有很好的强壮滋补功效和多种医疗保健作用.由于其生长环境独特,加之人们盲目挖采,资源已临近枯竭.因此寻找冬虫夏草的替代品以满足市场需求已刻不容缓.九州虫草Cordyceps kyushuensis Kob.采自山东蒙山,现已通过无性型菌株回接天然寄主获得了人工栽培成功[2].根据现有的对该虫草与冬虫夏草的化学成分监测、生物药效、体外抑瘤试验及抗氧化性能研究,表明其具有较高的药用价值,有望替代价格昂贵的冬虫夏草应用于临床[3,4].

冬虫夏草及人工菌丝体的核苷类成分的HPLC研究

冬虫夏草Cordyceps sinensis(Berk)Sacc.为麦角科虫草属的药用真菌,为冬虫夏草菌的子座及其寄主蝙蝠蛾科虫草蝙蝠蛾Hepialus armoricanusOberthus等幼虫尸体的复合体,具有广泛的药理作用.

虫草属真菌的生物活性成分

虫草是传统草药和保健品,虫草属真菌能够产生多种生物活性物质并具有广泛的药理作用和生理活性,在肿瘤、自身免疫、炎症、心血管疾病、神经衰退和衰老的治疗和控制中起着重要作用.因此,近年来,虫草属真菌的代谢产物的研究和开发一直受到关注.先后分离出7种麦角甾醇类化合物,5种萘醌衍生物和4种吡啶酮类化合物类.这些化合物在抗肿瘤、抗炎症、免疫调节、增强肾衰竭病人的肾功能、抗疟疾和细胞毒等功能方面具有明显的效果.现对近年来发现的虫草属真菌特殊活性成分结构进行了系统的归纳和总结,为进一步开发虫草资源提供参考.

莲状虫草及其刺束梗孢无性型

报道采自安徽省万佛山自然保护区的一种寄生在蜘蛛上的虫草标本,经鉴定为莲状虫草Cordyceps nelumboides.经多批次利用子囊孢子分离得到其刺束梗孢无性型Akanthomyces,属首次报道,并在人工固体培养基上得到了与野生标本一致的子实体,从而确证了有性型与无性型之间的对应关系.经研究发现,KOBAYASI和SHIMIZU对莲状虫草次生子囊孢子的原始描述可能有误.

碱裂解法快速提取虫草属真菌DNA研究

目的 探索一种适用于虫草属基因组DNA快速提取的方法.方法 在无液氮条件下使用碱裂解法提取虫草DNA,使用ITS通用引物进行PCR扩增.考察了提取液配方、煮沸时间对DNA提取的影响以及中和剂Tris-HCl用量对PCR扩增的影响.利用优化的提取方法提取了虫草属5种虫草并用ITS通用引物进行PCR扩增.结果 80μl 0.5 mol/LNaOH进行提取,加入160μl 0.1 mol/L Tris-HCl中和,离心即可在10min内提取出虫草属真菌的DNA,PCR扩增能获得清晰目的条带.结论 优化的碱裂解法可用于虫草属DNA的快速提取.

蛹虫草的人工栽培技术

蛹虫草[Cordycepsmilitaris(L. exFr)Link]又名北冬虫夏草、虫草,属于子囊菌纲,肉座菌目,麦角菌科,虫草属.它是蛹虫草真菌寄生在鳞翅目夜蛾科昆虫蛹体上形成的子实体与蛹体的结合体.子实体单生或数个一起从寄主蛹虫的头部或节部长出,颜色为橘黄或橘红色,全长2～8cm,头部椭圆形,长1～2cm,粗2～9mm;柄长1.5～3.5cm,粗1～3mm,颜色为浅黄色.