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结核分枝杆菌对乙胺丁醇耐药突变基因检测方法的建立
乙胺丁醇(EMB)是一线抗结核药物,近的研究结果表明,结核分枝杆菌(结核菌)对EMB耐药的产生与阿拉伯糖基转移酶编码基因embB改变有关.其中embB基因(尤其是306位密码子)突变是产生对EMB耐药的主要分子机制.聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)是近年发展起来的常用的基因突变分析技术,结合染色法(silver staining),使其应用前景更为广阔.我们应用PCR-SSCP银染技术和PCR-直接测序法对河南省耐药监测中收集的87株结核分离株embB基因进行了研究.
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聚合酶链反应-单链构象多态性结合银染技术检测低密度脂蛋白受体基因点突变
家族性高胆固醇血症(Familial hypercholesterolemia,FH)是一种常染色体显性遗传病,是导致动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)和早发冠心病的重要危险因素,其发病机理主要为低密度脂蛋白受体(Low density lipoprotein receptor,LDL-R)基因突变引起LDL-R功能异常.本研究应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合银染技术对一例临床诊断为FH的先证者的LDL-R基因进行研究,以探讨其分子病理机制.
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结核分支杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的测序分析
乙胺丁醇(EMB)是具有广谱抗分支杆菌活性的一线抗结核合成药物,被广泛应用于结核分支杆菌、鸟分支杆菌和堪萨斯分支杆菌等多种非结核分支杆菌的治疗.近年来,EMB在原发和复发结核病患者中的耐药率有上升趋势[1],我们应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)银染技术和PCR-自动测序法对结核分支杆菌embB基因进行了检测,以探讨建立直接快速检测结核分支杆菌EMB药物敏感性的实验方法.
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冬虫夏草cDNA-AFLP银染法显带研究
目的 探讨影响冬虫夏草扩增片断长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)的主要因素,建立并优化冬虫夏草AFLP反应体系.方法 变性裂解液法提取冬虫夏草基因组 cDNA,分别用一步法和两步法进行酶切与连接,再进行预扩增、选扩后,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测.结果 本研究建立适用于冬虫夏草的AFLP体系:用乙醇沉淀cDNA,建立的模板不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切;确定两步法进行酶切、连接,酶切时间为37℃3h,连接时间为16℃过夜,缓冲液选用NEB公司buffer 2;选择性扩增后的银染显色在10℃以下.结论 本研究建立的反应体系适用于冬虫夏草基因组cDNA的AFLP银染法显带研究.
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虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测研究
目的 分析虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测效果,建立一种用于虫草属的DNA分子指纹高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测方法.方法 分别对虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶终浓度、胶电泳步骤、胶固定方案、胶染色方法、胶显色步骤进行分析,确定利于虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶DNA多态性展现的方案.结果 确定虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测方案,分别为聚丙烯酰胺凝胶浓度为6%、银染染色液为0.3%的AgNO3、胶显色步骤中显影液为强碱NaOH和0.5%的甲醛溶液,且NaOH的浓度为2%.结论 本研究所建立的银染检测及显带体系适用于虫草属基因组聚丙烯酰胺凝胶电泳研究.
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家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因点突变检测方法的建立及一例新发现的突变(论著摘要)
家族性高胆固醇血症(Familial Hypercholesterolemia,FH)是冠心病的一种很重要的危险因素,早期发现FH患者,进行预防和治疗,就能减少心肌梗死的危险性.但是只根据临床表现不足以作出准确诊断(尤其是杂合子患者),所以,对其病因即低密度脂蛋白受体(Low Density Lipoprotein Receptor,LDL-R)基因突变的研究非常重要.本研究将PCR-SSCP与银染技术相结合,建立稳定的PCR SSCP检测条件,以期对LDL-R基因的全部18个外显子进行点突变的筛查.
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AgNOR、Cath-D和p53蛋白在膀胱移形细胞癌中的表达及意义
AgNOR 是核仁组成区相关的嗜银蛋白的简称,可以反映核仁结构和功能变化,提示细胞的活性,而把银染技术应用于组织切片,国内外学者已进行了广泛的研究.Cath-D 及 p53应用于膀胱移形细胞癌也有相关的报道.本文探讨银染技术及免疫组织化学方法在膀胱移形细胞癌的表达及其临床意义.
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人胃癌及其癌前病变的DNA、AgNORs定量分析
目的对人胃癌及其癌前病变中DNA含量、AgNORs进行定量分析.方法采用比色分析法测定胃癌20例,胃癌前病变12例及正常胃黏膜14例细胞核DNA含量;并通过银染技术对细胞核仁组成区AgNORs的数量、大小及形态进行观察. 结果正常胃黏膜、癌前病变、癌的DNA含量分别为(1.53±1.03)mg/L,(3.18±0.41)mg/L,(4.73±0.65)mg/L;AgNORs数量分别为1.57±0.24, 3.24±1.08, 4.43±1.60; 平均大直径分别为(1.01±0.17)μm,(1.41±0.38)μm,(2.52±0.62)μm;异形率分别为(10.8±1.2)%,(18.8±2.2)%,(36.4±3.4)%.各组间均有显著性差异.结论胃癌及其癌前病变过程中DNA含量, AgNORs数量、大小、形态在胃癌发生发展过程中起重要作用.
关键词: DNA 胃肿瘤 核仁组织者区嗜银蛋白 银染技术 -
银染技术在心血管组织工程中的应用研究
目的内皮化及平滑肌细胞种植效果是心血管组织工程中的主要研究课题,以往的方法都是用扫描电镜来鉴定内皮化及平滑肌细胞种植效果,但这种方法使用不方便且价格昂贵,不便于立即知道实验结果,因而我们探讨银染技术在心血管组织工程中应用的可行性.
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K-ras基因、胰腺癌缺失基因4变异诊断胰腺癌的价值
胰腺癌起病隐匿,发展迅速,预后极差.本研究采用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)和PCR-单链构象多态性(SSCP)银染技术,分别对胰腺良恶性病变中K-ras基因12密码子点突变、胰腺癌缺失基因(DPC)4基因第8、11外显子变异进行检测,探索其在胰腺癌诊断中的价值.现报道如下.
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消化系恶性肿瘤术后外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的变化
应用细胞核仁组成区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)银染技术对手术前后的消化系统恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞核中的脱氧核糖核酸核蛋白体(rDNA)转录活性进行分析,旨在观察其手术前后的变化规律,探讨其对肿瘤的术后随访有无临床意义.
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胸、腹水细胞AgNORs的检查对良恶性肿瘤诊断的体会
银染核仁组成区相关蛋白(Nucleolar Organiz-er Re-gionassosiated Proteins简称AgNORs),在蛋白质的合成中起着重要作用.近年来国内外学者,用银染技术显示核仁组成区相关蛋白作为鉴别良恶性肿瘤分级的一项新指标,我们应用胸、腹水细胞检测病人AgNORs,可以鉴别良恶性肿瘤,现将我们用的方法及体会简介如下:
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应用PCR-SSCP银染技术分析胃癌p53基因的点突变
目的分析胃癌中p53基因第5~8外显子点突变的发生及其意义.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和银染技术,对40例胃良性疾病和30例胃癌标本中p53基因第5~8外显子的点突变情况进行检测.结果40例胃良性疾病均无点突变发生,30例胃癌中有12例发生p53基因的点突变,突变率为40.00%(12/30).结论p53基因突变与胃癌的发生密切相关;PCR-SSCP银染技术不仅灵敏安全,而且简便、快速、重复性好,可用于临床的基因诊断.
关键词: 银染技术 聚合酶链反应-单链构象多态性分析 胃癌 p53基因突变 -
PCR-SSCP-银染法检测异烟肼耐药结核杆菌katG基因突变
异烟肼(INH)是抗痨治疗方案中主要的药物之一,但结核杆菌(TB)对其耐药现象日趋严重.传统的TB耐药检测方法为生长依赖性药敏检测法,需4~8周的时间,即使使用了昂贵的BACTEC460TB系统快速培养法(下称Bactec法),完成这一检测也需要2~3周.我们采用PCR-SSCP-银染技术(下称PCR法),检测了TB与INH耐药有关的katG基因,并与Bactec法检测结果进行对比,现将结果报告如下.
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天麻AFlP银染法显带研究
以天麻为实验材料,对AFLP指纹银染技术及实验操作中的关键技巧做了比较详尽的叙述,取得了比较理想的实验结果.
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端粒酶活性在非小细胞肺癌中表达的初步研究
端粒酶是当前肿瘤学领域的研究热点,大量的研究表明端粒酶与肿瘤细胞的无限增殖能力密切相关.但对于肺癌的报道较少,我们采用端粒重复片段扩增法(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)结合银染技术对中国河南地区散在性非小细胞肺癌(NSCLC)中端粒酶活性表达情况进行了初步的研究[1],以探讨其在肺癌发生发展中的意义.