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Line-Gene荧光定量PCR检测系统工作原理及常见故障维修
本文介绍Line-Gene荧光定量PCR检测系统的检测原理、工作原理及仪器的常见故障维修,并提供了相应部分的结构示意图.
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miR-204在肺癌组织中的表达与临床病理的关系
目的:探讨miR-204在肺癌组织中的表达与临床病理的关系.方法:选择行肺癌切除术的78例石蜡存档组织标本进行研究,取癌症组织作为试验组,取癌旁正常组织作为对照组.采用荧光定量实时PCR(RT-PCR)对肺组织miR-204荧光相对表达量进行检测,并分析其荧光相对表达量和性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、组织类型的关系.结果:试验组miR-204表达荧光相对含量水平较对照组显著降低(P<0.05);miR-204表达荧光相对含量在性别、年龄方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),而在病程、肿瘤长径、淋巴结转移、TNM分期、分化程度和组织类型等不同临床病理条件下其荧光相对含量水平差异有统计学意义(P<0.05).结论:肺癌组织中miR-204表达荧光相对免疫含量较正常组织明显降低,且病程越长、肿瘤越大,淋巴结转移、TNM≥Ⅲ期、低分化和非小细胞肺癌组织中其表达水平均较低,推测miR-204靶基因对肺癌发生、恶化和进展存在显著调控作用.
关键词: miR-204靶基因 肺癌组织 荧光定量检测 临床病理 -
survivin及其选择性剪接变体在胃癌中的表达及意义
survivin基因有4个外显子和3个隐含外显子(2α、2B和3B),同一个基因的转录产物通过选择性剪接方式产生多种成熟mRNA.目前发现人类存在5种不同剪接变体[1-2].我们分别设计了5种survivin剪接变体特异引物,即时荧光定量检测其在胃癌中的表达,同时分析各种变体之间以及其表达水平与临床病理资料之间的相关性.
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HBV-DNA荧光定量检测的临床意义
HBV的临床检测从免疫学方法到分子生物学方法是一个重大进步,分子生物学检测经历了早期的PCR凝胶电泳法、半定量法到现在的各种完全定量法.HBVDNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法的间接检测的局限性,通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况,从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义.
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拉米夫定联合复方鳖甲软肝片治疗对慢性乙型肝炎纤维化指标影响的临床观察
1临床资料1.1一般资料63例患者均为本院2001年3月-2004年6月住院及门诊就医的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者,所有患者HBV M:HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性(ELISA法),HBV DNA阳性(荧光定量检测,上海科华公司试剂).诊断均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病分会、肝病学会联合修订的"病毒性肝炎防治方案"中肝炎肝纤维化标准[1],且除外有重要脏器病变(严重心、肾疾病等)和自身免疫性疾病.
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在职体检妇女生殖道UU(支原体)及其分群分型的调查
目的 了解无症状体检妇女下生殖道UU携带情况和定量值.方法 应用FQ-PCR方法进行宫颈分泌物UU检测.结果 无症状体检扫女509例,平均年龄为(40.4±7.1)岁(20~55岁),UU阳性185例占36.4%(其中UU与CT混合感染22例占4.3%),此外,检出CT阳性40例占7.9%.结论 在UU定量值高的情况下,临床上可考虑给予药物治疗.
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应用国产与进口试剂进行HBVDNA荧光定量检测的结果比较
目的 评价国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBVDNA )中的临床应用.方法 基于实时荧光定量应用瑞士罗氏公司的cobastaqman-48 仪器和美国应用生物工程公司ABI-7300 全自动系统,用国产试剂和进口试剂分别检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA 含量,比较国产试剂与进口试剂的偏倚及两者的相关性.结果 进口试剂与国产试剂两次结果比较有显著差异(P < 0.001),国产两次结果比较无差异(P > 0.05).结论 本实验的实时PCR 仪间的检测值有一定的差异,提示不同型号仪器的检测值不能相互取代,对于同一患者的HBV DNA 定量监测及对抗病毒治疗疗效评价时,必须用同一型号的检测仪器(系统).
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荧光定量检测法比较三种提取大豆加工样品方法的优劣
运用荧光定量检测的方法,比较了CTAB法、试剂盒法和SDS法提取大豆加工样品的优劣.通过测定其内源基因Lectin得到的Ct值大小比较基因表达水平的高低,通过标准加入法得到标记基因35 S和内源基因Lectin Ct值的差值ΔCt值,结合标准曲线,计算出每种混合样品中转基因成分的百分含量,进而比较这三种提取方法对PCR反应的抑制程度.总体说来,CTAB法提取大豆加工样品得到的核酸适合PCR反应,其次是试剂盒法,SDS法稍差.
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荧光定量RT-PCR检测胃癌患者外周血癌细胞及意义
胃癌的转移和复发是影响预后的重要因素,而存在于患者淋巴结,外周血,骨髓和腹腔中的微转移是导致转移和复发的基础[1-3].由于进入血中的肿瘤细胞极其微量,采用传统的病理学、免疫细胞化学等方法难以检测[4].我们采用逆转录-实时荧光定量PCR技术(以下简称荧光定量PCR),用角蛋白片段CK19为标记物,探讨其在胃癌患者外周血中表达的临床意义及与病理临床的关系,以期为临床治疗方案的选择与评价预后提供依据.
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用荧光定量法对28例血清标本HBsAg与抗-HBc阳性者的结果分析及荧光定量的认识
对门诊病人进行筛选,保存28份HBsAg阳性、抗-HBc阳性、肝功能正常的血清标本进行荧光定量检测,现将结果报告如下.
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应用中和试验对乙型肝炎病毒表面抗原弱反应性标本确认的临床意义
乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎诊断的常用的血清标志物.HBsAg可以采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定性或免疫荧光定量检测的方法进行.低水平HBsAg或内源性和外源性物质的干扰可致检测结果呈弱反应性[1,2].无论是定性分析还是定量检测,对弱反应性标本应进行确认试验才能发具HBsAg阳性报告[2].本研究采用HBsAg中和试验对弱反应性标本进行检测并探讨其临床应用价值.
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HBV-DNA荧光定量检测在乙肝治疗中的应用探讨
我国是乙型肝炎病毒感染的高发区,据报道全国有1.2亿人为乙肝病毒携带者.由于我国乙型肝炎病毒感染后慢性化病人如此庞大,又有部分病人会发展为肝硬化与肝癌,故乙型肝炎病毒感染成了当前威胁国民健康的主要疾病.其及早诊断及正确治疗应受到极大关注.近两年,判断HBV的感染及其状况的指标,除应用单项HBsAg及乙肝两对半、抗HBc-IgM外,HBV-DNA定量是首选方法,尤其在目前应用抗病毒药物治疗的效果评价中HBV-DNA定量检测是非常好的观察指标,很受专家好评和肯定.本文观察了265例乙肝患者治疗过程中HBV-DNA的变化情况,现报道如下.
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血清HCV RNA荧光定量检测的临床意义
本文采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)对220例慢性丙型肝炎患者血清中HCV RNA进行检测,探讨其临床意义,现将结果报道如下.
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荧光定量检测乙肝病毒含量在PHC患者中的临床应用
为进一步探讨HBV感染与原发性肝癌(PHC)的关系,本文采用实时荧光定量PCR法(Fluorescence quantitative PCR,FQ-MR)对238例PHC患者进行HBV-DNA定量分析,旨在了解PHC患者HBV的定量情况,探讨HBV-DNA定量检测的应用价值,以及与乙肝标志物(HBV-M)的关系.
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荧光定量RT-PCR检测消化道肿瘤患者外周血 CEA mRNA的表达
目的研究消化道恶性肿瘤患者外周血CEA mRNA表达的临床价值.方法采用荧光定量RT-PCR检测外周血CEA mRNA的表达.结果消化道恶性肿瘤患者81例外周血CEA mRNA的表达阳性率为58.02%(47/81),对照组27例(健康人)未见表达.原发性肿瘤、远端转移的患者外周血CEAmRNA呈高表达,而化疗后外周血CEAmRNA表达阳性率和水平下降(P<0.05).结论荧光定量RT-PCR检测消化道恶性肿瘤患者外周血CEA mRNA的表达具有敏感性、特异性,对消化道恶性肿瘤的辅助诊断、决定治疗手段、判断疗效、有否转移和预后有着重要的临床价值.
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尖锐湿疣患者治疗前后人乳头瘤病毒核酸的荧光定量分析
2005年2月至2006年2月,我们应用荧光定量PCR(fluoresence quantitave polymerase chain reaction,FQ-PCR)法对62例尖锐湿疣患者治疗前后HPV6/11-DNA进行荧光定量检测及随访,旨在了解病毒载量在患处治疗前后的变化情况.
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PCR荧光定量检测HBV-DNA与其血清学标志物检测的对比分析
HBV感染时,外周血中HBV-DNA是病毒复制活动直接和可靠的标志,而新发展起来的PCR荧光定量检测技术以其灵敏度高、特异性好、结果准确可靠而在HBV-DNA的定量检测中迅速得到了广泛应用,为临床乙型肝炎的动态研究提供了很好的参考数据[1].
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956例泌尿生殖系五种病原体感染的检测分析
解脲(UU),沙眼(CT),淋球菌(NG),疱疹(HSV),乳头瘤(HPV)是引起生殖道感染的常见病原体,也是通过性活动传播的病原体,可引起淋菌性非淋菌性尿道炎、前列腺炎、宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎从而造成不孕不育的发生,我们对956例泌尿生殖系患者应用核酸扩增(PCR)荧光定量检测五种病原体进行检测,现将结果分析讨论如下.
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三种肺炎支原体检测方法特点比较
肺炎支原体(MP)是能独立生存、无细胞壁的小原核细胞型微生物,主要在气管、支气管和细支气管的上皮细胞内增殖.近年来支原体感染率日渐增高,仅凭临床表现很难与病毒及细菌性下呼吸道感染鉴别,故早期诊断极为重要.MP抗体检测法、荧光定量PCR法及快速液体培养法均为临床诊断MP感染的常用方法,现对其特点进行分析.检测方法:①MP抗体检测法:采用一次性真空采血管(促凝剂)抽取静受检者静脉血3ml,分离血清后置于4~8℃冰箱保存.于24h内检测MP抗体IgM阳性表达情况.②快速液体培养法:用无菌咽拭子于受检者口腔咽喉部旋转1周取分泌物,将采集的标本置培养基瓶内搅动数次后去除咽拭子瓶外部分,置于37℃孵箱中培养24h行MP快速鉴定,按培养基说明书操作.培养基颜色由红色变成清亮的淡黄色判为阳性,培养基颜色不变或颜色为非清亮的黄色判断为阴性.③荧光定量PCR法:用无菌咽拭子于受检者口腔咽喉部旋转1周,取分泌物置入无菌玻璃管,密封送检.MP核酸扩增荧光定量检测MP阳性率.
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荧光定量RT-PCR检测急性白血病患者外周血WT1基因的表达
目的了解急性白血病患者外周血WT1基因的表达水平.方法建立荧光定量RT-PCR方法,用PE ABI 7700 PCR仪检测114例急性白血病患者、26例非白血病患者和36例正常人外周血中WT1基因的表达水平.结果 22例急性髓系白血病(AML)和15例急性淋巴细胞白血病(ALL)初发患者WT1基因的表达量为105~106拷贝/μg RNA,取得部分缓解的26例AML和19例ALL患者的表达水平为102~104拷贝/μg RNA,而取得完全缓解的17例AML和13例ALL患者的表达水平为0~102拷贝/μg RNA.结论 WT1基因在白血病外周血中有高水平的表达,可作为急性白血病疗效考核及监测微残留病的指标.