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病毒核酸定量测定方法及其存在的问题
随着科学技术的不断进步,人们不但能够对病毒核酸进行定性检测,如今发展到还能够定量检测病毒核酸分子.有关定量测定病毒核酸的方法已有学者作过总结和介绍[1],但病毒核酸定量测定过程中存在的问题,却很少有人总结报道.本文根据作者在实际工作中发现的问题和参考国外有关文献,着重在这方面进行总结.但为了更好的说明这个问题,首先对定量测定病毒核酸的方法作一简要介绍.
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重组蛋白及合成肽抗原在GBV-C/HGV感染诊断中的应用
GBV-C是近几年刚发现的新病毒,对其致病性等方面的研究还不是很清楚.其诊断主要依赖于RT-PCR检测病毒RNA,但不适于临床常规检测及大面积筛查.以重组蛋白和合成肽作抗原检测血清中抗GBV-C抗体更适合于GBV-C感染的诊断和流行病学调查,有望得到广泛的应用.本文从GBV-C/HGV抗原表位研究及重组蛋白、合成肽在GBV-C感染诊断学和流行病学中的应用及其意义作一综述.
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人乳头瘤病毒的环介导等温扩增检测法
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是引起尖锐湿疣甚至癌变的病原体.PCR技术检测病毒DNA序列具有特异、敏感等特点,但对仪器设备及检测人员技术要求较高,不适合于基层医疗单位临床实验室的常规诊断方法.环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术针对靶基因6个区域设计4条特异引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温条件下完成扩增,扩增效果可用凝胶电泳、比浊、染色等多种方法检测,具有反应时间短、肉眼可判断结果和不需要PCR仪等优点.国内外利用LAMP技术检测HPV的方法研究偶有报道[1-2],但针对HPV-6和HPV-11成功的方法研究未见文献报道.
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HBV-DNA荧光定量检测的临床意义
HBV的临床检测从免疫学方法到分子生物学方法是一个重大进步,分子生物学检测经历了早期的PCR凝胶电泳法、半定量法到现在的各种完全定量法.HBVDNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法的间接检测的局限性,通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况,从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义.
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几种检测感染人类免疫缺陷病毒水平的方法
在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染者中,定量检测病毒含量对于诊断急性HIV感染、监测慢性感染的疾病进程和评价治疗效果十分关键.从确认HIV是艾滋病的病原体以来,人们研究了很多方法检测感染者体内HIV水平,下面对几种主要方法进行综述.
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艾滋病病原学诊断进展
艾滋病是高度依赖病原学诊断的传染病,因为无论是在感染早期或发病期,还是在较长的潜伏期,都只有通过病原学检验,找出其病原体——人免疫缺陷病毒(HIV)存在的证据,才能做出HIV感染或艾滋病的诊断。HIV检验要求绝对准确可靠,无论是假阳性还是假阴性都将造成十分严重的后果。因此,10多年来,艾滋病病原学诊断技术迅速发展,主要包括HIV病毒分离、HIV病毒载量测定、HIV核酸检测,以及检测病毒抗原(p24抗原)和检测病毒特异性抗体。其中抗体检测方法是常规使用的HIV病原学诊断方法,其他方法主要用于特殊情况(“窗口期”、婴儿诊断、HIV抗体检测结果为不确定等),或作为抗体检测方法的补充用作辅助诊断,或作为判断预后和指导治疗用药的依据(病毒载量的测定),一般不用作常规诊断。现将主要病原学诊断进展分述如下。
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RNA病毒扩增检测的质控品和标准品研究进展
RNA病毒如丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)等的核酸检测对于感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值.自1983年发明聚合酶链反应(PCR)技术以来,出现了基因扩增的概念.目前多采用核酸扩增技术(NAT)检测病毒RNA,常用的是逆转录(RT)-PCR方法.核酸扩增检测想得到可靠的结果,必须使用质控品进行严格的质量控制,而对病毒进行定量测定,通常还须有病毒RNA标准品.目前RNA病毒扩增检测的质控品和标准品分为两大类,一是裸露的RNA片段,二是内含特定RNA的病毒样颗粒或称之为带盔甲的RNA(armored RNA).
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重组腺相关病毒介导血管紧张素Ⅱ受体1反义基因对高盐饮食诱导的高血压大鼠血压的影响
目的 研究导入血管紧张素Ⅱ受体1反义基因对大鼠高盐饮食诱导的高血压的预防作用.方法 首先采用钙磷转染法进行三质粒共转染,包装重组腺相关病毒,后采用Dot-Blot方法检测病毒滴度.选取8周龄雄性SD大鼠分成3组,分别经尾静脉注射重组腺相关病毒和生理盐水,实验组(rAAV-AT1-Antisense),对照组(rAAV-GFP),正常组(0.9%NaCl);2周后,实验组和对照组给予高盐(8%氯化钠)饲料喂养,正常组继续给予正常饮食喂养,实验周期为12周,实验过程中,前三周每周测量血压一次,三周后,每两周测量血压一次;处死动物后通过半定量RT-PCR检测血管紧张素Ⅱ受体1在主动脉组织的表达情况.结果 高盐饮食1周后,对照组大鼠血压开始升高,到第5周时血压达到140 mm Hg,并维持到实验结束,实验结束时达到(142.7±4.5 mmHg);实验组大鼠和正常组大鼠的血压一样在整个实验过程中一直稳定在正常范围,实验结束时维持在(117±3.8)mmHg,(117.8±2.9)mmHg.整个实验过程三组动物并未出现因为病毒载体注入和表达所引起的严重毒副作用.结论 血管紧张素Ⅱ受体1反义基因可以预防高盐诱导的高血压,为临床应用反义AT1基因治疗高血压提供了可能.
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检测艾滋病费用需多少
艾滋病病毒感染可以通过检测病毒的抗体、抗原核酸或病毒培养来确定.艾滋病病毒抗体检测费用不高,一般几十元即可,大部分人初筛阴性就不需要再作检测.少数需要作确认试验者,则要花费几百元.对高度怀疑感染了艾滋病病毒的人,临床又急于尽快得到结果的,可进行病毒载量测定,这种情况下一般要花费千余元.
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定量聚合酶链反应检测HBV DNA的初步研究
对乙型肝炎病毒感染的诊断,通常是检测乙肝五项以及采 用常规定量聚合酶链反应(PCR)方法检则HBV DNA。近年来,定量PCR方法已经用于临床,为 精确检测病毒含量提供了灵敏的指标。我们采用定量PCR方法检测了33例乙型肝炎病人的39 份血清的HBV DNA,并与定性PCR方法进行了比较,现将初步结果报告如下。1 材料与方法1.1 临床资料 33例病人为我院1997年6月至1999年10月住院的乙型肝炎病人,其中男性29例,女性4例,年 龄21~68岁。诊断符合1995年第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方 案。临床类型包括急性肝炎7例,慢性肝炎23例,亚急性重型肝炎1例,肝炎后肝硬化2例。3 3例病人共采集39份血清标本。乙型肝炎抗原抗体系统五项指标中至少有两项异常。1.2 主要试剂
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乙型肝炎病毒前C/C变异对抗-HBc缺失和病毒复制的影响
HBcAg有很高的免疫原性,HBsAg阳性者抗-HBc几乎100%被检出.但有些患者HBsAg和HBeAg均阳性而抗-HBc持续阴性,我们通过基因测序和检测病毒含量对这些特殊病例进行了研究,现将结果报道如下.材料与方法一、研究对象本组18例为无锡市传染病医院1999年9月~2000年9月的门诊及住院患者.按照1995年北京传染病与寄生虫病学术会议修订的临床肝炎诊断标准[1],其中乙型肝炎病毒携带者(AsC)12例、慢性乙型肝炎(CHB)轻度6例;男11例,女7例;年龄(27.3±8.4)岁.所有患者HBsAg和HBeAg均阳性而抗-HBc、抗-HBe持续阴性,且其他病毒标志阴性.
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台州市2005~2007年献血者HIV筛查结果分析
HIV主要攻击人类的免疫系统,后导致人类免疫系统的全面崩溃,所致获得性免疫缺陷综合征(AIDS).目前世界各国的血液筛查项目中几乎均包括HIV筛查,不同的是部分发达国家已用核酸检测的方法直接检测病毒[1],我国部分省血液中心开始核酸检测,而大多数国家仍采用检测抗体的方法[2].我们对本站2005~2007年献血者HIV的筛查与确认情况作了如下分析.
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成人病毒性肺炎2例
呼吸道病毒长期以来被认为是社区获得性肺炎( CAP)的一种病因,特别是儿童、老年人或合并医学合并症的人群。聚合酶链反应( PCR)的检测提高了病毒感染检测的能力。有研究报道,当运用PCR检测病毒时,45%~75%的儿童和15%~54%的成人CAP患者可检测到病毒感染。细菌-病毒混合感染是很常见的,但目前很难判断CAP患者是否仅由病毒感染引起。抗流感药物神经氨酶抑制剂(磷酸奥司他韦,即达菲)应该早期用于临床怀疑流感病毒感染的CAP患者,无论是否合并细菌感染。
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ELISA方法检测HBeAg假阳性1例
应用ELSIA法检测乙型肝炎标志物的结果受诸多因素的影响往往出现一些少见模式[1],分析探讨这种少见模式的原因对正确判读HBVM的结果指导临床是有一定意义的.1资料与方法1.1一般资料检测健康体检者,女26岁,身高160 cm,体质量57 kg,血压110/85 mmHg(1 mmHg=0.133 kpa),心率75次/分,内、外、妇、五官科体察未见异常;心电图、超声检查肝、胆、脾、双肾、甲状腺、胸透均未见异常.曾接种过乙肝疫苗,就诊时近一星期双腿微有酸痛感但未服用过任何药物.1.2 方法 清晨空腹静脉采集EDTA抗凝血迈瑞-3000血细胞分析仪检测血常规,真空干管采血并及时分离血清用贝克曼全自动生化分析仪及配套试剂检测生化指标;ELISA法检测病毒肝炎血清标志物:甲型肝炎试剂由北京万泰工程有限公司;乙、丙型肝炎试剂由上海厦门新创有限公司提供,丁、戊型肝炎试剂由潍坊三维工程有限公司,EB病毒、CMV试剂由北京贝尔生物工程有限公司提供.
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采血前端征询“窗口期”概念知晓度调查及教育策略
目前国内大部分血液中心已经开展了核酸技术检测(nue‐ leic acid test ,NAT ),检测病毒的 RNA 或 DNA 。研究表明,混合血液样本 NAT 检测可将乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和人类免疫缺陷病毒感染的平均窗口期缩短为9、59 d 和11 d[1‐2]。不过,病毒的窗口期始终还是存在,通过教育宣传等手段让高危行为者认识到进行自查和排除的重要性,仍是前端征询的重要环节。
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血液筛查的核酸扩增技术:当前的问题,未来的挑战
本文报告分子检测如何使受血者免受病毒感染的几个现实的问题,尤其是HIV和HCV.血清学检测血液污染是检测病毒抗体(或病毒相关的蛋白质)的出现,而核酸扩增技术确定血液是否被感染,是检测病毒特有的核酸序列.后者可将单一病毒分子的DNA或RNA扩增十亿倍以上,能够阻断可能逃过现行检测已被感染的血液,预防输血传播疾病.尽管NAT具备技术优势,但能否常规应用还存在争议.在美国,为评价该技术的安全性和有效性正进行临床试用,可以从后勤学和经济学的角度进行辩论.公众和政治力量都要求供血"零风险",在维持世界输血安全的高标准和成本效益之间产生了冲突.