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食品中三种金黄色葡萄球菌检测方法的对比分析
制作一系列浓度梯度的金黄色葡萄球菌试验菌液,采用检测试纸法、Baird-Parker平板国家标准法和PCR法三种方法模拟对食品中金黄色葡萄球菌进行检测,通过结果分析对三种方法的优缺点进行对比和归纳.
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PCR法鉴定结核分枝杆菌复合群亚种的研究
结核分枝杆菌复合群中各菌型致病性和药物敏感性不尽相同,在临床治疗前需要进行菌种鉴定,目前临床使用的生化方法耗时长,给治疗带来不便,本研究采用PCR法可快速鉴定结核分枝杆菌复合群亚种,具有快速、准确的优点,现将研究结果报道如下.
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支原体临床检测分析
关于支原体检验问题支原体的检查方法很多,有免疫荧光法、间接血凝法、DNA探针法、PCR法、培养法等,国家规定的"金标准"方法是培养法.
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荧光PCR检测军团菌方法的优化及应用
军团菌病(Legionellosis)是由军团菌(Legionella)引起的一种急性呼吸道疾病[1-2].有超过20个血清型的军团菌可以引起人类疾病[3].目前军团菌检测方法主要是培养检测法[4]和针对嗜肺军团菌检测的PCR法,这两种方法在实际应用中均存在一定的局限性.
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化浊解毒活血通络方对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3表达的影响
目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分及Caspase-3表达的影响,探讨其神经保护作用机制.方法:采用改良线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型.运用Longa法进行神经病学评分,用光镜观察脑组织形态学改变,用PCR法检测Caspase-3的表达.结果:模型组及各用药组均出现不同程度的神经功能缺损,模型组Caspase-3表达明显多于假手术组(P＜0.05);与模型组相比,中药各组及阿司匹林组组织变性坏死程度轻、Caspase-3阳性细胞减少(P＜0.05),中药高剂量组及阿司匹林组神经功能缺损评分显著降低(P＜0.05);中药中、高剂量组和阿司匹林组效果优于中药低剂量组(P＜0.05).结论:化浊解毒活血通络方可以通过抑制Caspase-3的阳性表达来抑制细胞凋亡,从而发挥其神经保护作用.
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传统方法与PCR法检测女性性病三项临床应用价值比较
目的 针对解脲支原体(ureaplasma urealytieum,UU)、沙眼衣原体(ehlamydia trachomatis,CT)、淋病奈瑟菌(neisseria agonorrhoeae,NG)检测的传统法与现有市售PCR试剂盒相比较评估二者临床应用价值方法 应用常规方法(用液体培养法检测解脲脲原体,用胶体金法检测沙眼衣原体,培养/镜检法检测淋病奈瑟氏菌)与PCR法检测392例女性生殖泌尿道标本,分别计算阳性率、灵敏性和特异性,使用McNemar检验两种方法的差异.结果 以PCR为参比方法,传统方法的UU与CT灵敏性与特异性分别为66.36％,100％与63.27％,100％,两种方法比较均具有统计学意义(x2=108.00,P＜0.01,kappa =0.579与x2=16.06,P＜0.05,kappa=0.756),传统方法NG的灵敏性与特异性为67.85％与99.35％,两种方法相比无统计学意义(x2=2.08,P＞0.05,kappa=0.747).结论 尽管在UU、CT检测的灵敏性上,PCR方法优于传统培养方法,但两者联合检测可提高检出率,尤其对于NG的检测.因此PCR法目前无法完全取代传统培养法.
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PCR方法检测梅毒螺旋体的临床实验室诊断应用
梅毒是由梅毒螺旋体(Tp)引起的一种慢性、接触性及低死亡率的传染病,目前依然在世界范围内流行.由于检测的成本、假阳性及临床报告时限等原因,使现有方法无法满足临床需要.近年来,PCR技术在临床实验室检测中得以迅速发展和应用,本文就PCR法检测Tp常用特异性鉴别基因、临床标本选择、模板DNA的制备及在临床梅毒诊断中常用的PCR检测技术等进行综述.
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优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析
自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得"巨鼠"[1]以来,转基因动物的研究发展迅速.随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质.
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重组金黄葡萄球菌杀白细胞毒素体外对人肺泡巨噬细胞Toll样受体2表达的影响
金黄葡萄球菌杀白细胞毒素(panton-valentine leukocidin,PVL)是致病性金黄葡萄球菌产生的一种特异作用于中性粒细胞与单核/巨噬细胞的外毒素,是坏死性肺炎的重要毒力因子.我们用荧光定量PCR法观察重组PVL(rPVL)对人肺泡巨噬细胞Toll样受体(TLR)2表达的影响.
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采用多对型特异性引物巢式PCR法研究江西省HBV基因型分布及其临床相关性
根据HBV全基因序列的差异≥8%或者S区基因序列差异≥4%可将其分为A、B、C、D、E、F等基因型.HBV基因型的分布具有地域性,东南亚地区慢性乙型肝炎病毒感染者中以B和C基因型为主.在我国,北方地区以C型为主,南方以B型为主[1].全国很多省份和城市都已有HBV基因型分布的相关报道.基因型检测方法较多,各有其优缺点,温志立等[2]在国内先应用的多对型特异性引物巢式PCR法较其他方法更为简便、经济,适用于大规模标本鉴定,本研究拟采用此法测定江西地区HBV基因型,并同时进一步观察基因型与临床的关系.
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培养法、PCR法和血清学法在检测儿童肺炎支原体感染中的应用比较
目的 比较培养法、PCR法和血清学方法在检测住院肺炎患儿的肺炎支原体感染中的应用效果.方法 收集2016年3月至5月在我院呼吸内科住院的社区获得性肺炎患儿的支气管肺泡灌洗液和血清,同时采用传统的培养法、PCR法和血清学方法检测患儿的肺炎支原体感染情况.统计学分析采用SPSS18.0软件,卡方配对检验.结果 共收集到79例社区获得性肺炎患儿的支气管肺泡灌洗液和血清,培养法获得肺炎支原体阳性标本8例(10.13%),平均阳性培养周期为21 d;PCR法检测肺炎支原体阳性23例(29.11%),其中培养法阳性的肺炎支原体标本PCR法检测均阳性;血清学方法共检测到肺炎支原体阳性标本41例(51.90%),其中PCR法阳性的标本中有4例血清学检测结果显示为阴性,培养阳性的标本中有2例为血清学阴性.统计学结果显示,PCR法与血清学方法、PCR法与培养法的检出率差异均有统计学意义.结论 在诊断儿童肺炎支原体感染时,建议同时采用血清学方法和PCR方法进行检测,并结合患儿临床症状进行确诊.
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细菌培养法与 PCR法对细菌性阴道炎患者的辅助诊断价值
目的：：比较细菌培养法和PCR法在细菌性阴道炎患者临床诊断中的辅助诊断价值。方法：细菌性阴道炎患者56例，分别应用细菌培养法和PCR法检测患者阴道分泌物中的细菌种类，比较两种检测方法的阳性检出率。结果：细菌培养法的阳性检出率为73.2%；PCR法的阳性检出率为91.1%。两种检测方法检出率比较差异明显(P<0.05)；细菌培养法的加特纳菌、淋球菌、肠球菌、棒状杆菌的检出率分别为51.8%、3.6%、12.5%和16.1%，与PCR法的75.0%、16.1%、28.6%和35.7%比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：PCR法在细菌性阴道炎临床诊断中所具有的辅助诊断价值较细菌培养法更高。
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散发性结直肠癌组织病理学特征及微卫星不稳定状态分析400例
目的:探讨高度微卫星不稳定性(high level of microsatellite instability,MSI-H)结直肠癌临床病理学特征.应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中DNA错配修复蛋白缺失表达,判断肿瘤MSI状态,建立筛选与遗传相关结直肠癌常规诊断流程.方法:分析临床特点,光镜下观察肿瘤组织形态学特征,免疫组织化学SP法分析肿瘤DNA错配修复蛋白表达缺失情况,判断肿瘤MSI状态,荧光定量PCR法进一步证实肿瘤MSI状态.结果:400例散发性结直肠癌,以男性左半结肠多见,免疫组织化学方法检测到MSI-H 18例,MSI-L 98例,MSS 284例,MSI-H肿瘤以老年女性左半结肠多见.MSI-H结直肠癌形态学多见绒毛乳头状结构,高、低分化,黏液腺癌、印戒细胞癌或伴有黏液分化,肿瘤上皮内淋巴细胞浸润、肿瘤间质内见Crohn样淋巴细胞反应及瘤周淋巴浆细胞浸润明显,多数缺乏坏死.荧光定量PCR法进一步对18例MSI-H肿瘤进行分析,证实MSI-H 7例,MSI-L1例,MSS 6例,同时发现4例肿瘤存在等位基因杂合性缺失.结论:散发性MSI-H结直肠癌与病理形态学具有明显相关性,与患者年龄、性别、部位无显著相关.结合形态学及免疫组织化学检测错配修复蛋白可作为判断MSI-H肿瘤的常规筛查方法,对患者进行临床监控、个体化治疗及筛选与遗传相关结直肠癌具有重要临床意义,但对MSI-H肿瘤终确诊及是否与遗传相关仍需进行分子生物学方法检测进一步证实.
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卵巢上皮性癌中端粒酶定量检测的意义
目的 探讨端粒酶定量检测在上皮性卵巢癌诊断中的临床意义.方法 以20例上皮性卵巢癌患者为研究对象,行实时定量端粒重复扩增PCR法(RTQ-PCR)定量检测患者肿瘤组织中的端粒酶活性.结果 20例卵巢上皮性癌组织中端粒酶活性较良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中端粒酶活性显著增高(P＜0.001),上皮性卵巢癌患者临床I～Ⅱ期的端粒酶值(197.10±28.20)与临床Ⅲ～Ⅳ期(347.14±60.10)相比,差异有显著意义(P＜0.05).结论 端粒酶定量检测有助于卵巢癌的诊断及预后监测.
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PCR+膜杂交法CT/UU/NG三联检测在临床性病筛查中的应用及与实时荧光PCR法的比较研究
目的:探讨PCR+膜杂交法CT/UU/NG三联检测在临床性病筛查中的应用价值.方法:分别采用PCR+膜杂交法和实时荧光PCR法检测CT、UU、NG,并分析比较两种方法的一致性以及相关性.结果:PCR反向膜杂交法和实时荧光PCR法的CT、UU、NG的筛查结果接近(P＞0.05),而男女筛查结果差异较大(P＜0.05).结论:PCR反向膜杂交法操作简便,筛查快速、准确,有与实时荧光PCR法相当的检测准确性,具有较高的临床应用价值,值得在临床中推广应用.
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Nested-RT-PCR技术检测CEA mRNA的方法及敏感性
癌胚抗原（CEA）自1965年应用于临床以来已作为胃肠道肿瘤的诊断和判断预后的监测指标。CEA的检测方法较多，但常用的有放射免疫法（包括间接法、直接法）、固相放免法和酶免疫法。CEA在所有肿瘤中大肠癌的表达是高的，但用上述检查方法大肠癌患者血清CEA的阳性率Dukes A、B期仅为36%，Dukes C 、D期也只有74%。无论血清放免、固相免疫、酶免疫还是单克隆抗体放射显影法的敏感性都较低。
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不同方法检测女性患者泌尿生殖道支原体感染及相关耐药性情况的相关研究
目的 选择不同方法检测女性患者泌尿生殖道支原体感染及相关耐药性情况,同时对病原体与相关药物耐药性之间的相关性进行分析,为女性患者泌尿生殖道支原体感染控制提供参考依据.方法 选取2013年2月—2017年12月在遂宁市第一人民医院妇产科门诊女性疑似生殖道支原体感染的563例患者,采用不同检测方法(培养法与PCR法)检测患者支原体感染情况并分析其与患者耐药性之间的关系.结果 采用培养法共检出支原体阳性269例(总检出率为47.8％),采用PCR法共检出支原体阳性282例(总检出率为50.9％);563例疑似支原体阳性患者在行不同种类药物治疗后共发生耐药95例(耐药率16.87％),其中红霉素36例(37.89％),喹诺酮类26例(27.37％),多西环素12例(12.63％),其他药物21例(22.11％);2种方法的对结果分型的诊断差异无统计学意义(χ2=2.620,P>0.05);PCR法检测结果ROC曲线下面积为0.882(95％CI:0.796～0.974),培养法检测结果ROC曲线下面积为0.613(95％CI:0.516～0.709);培养法与PCR法检测患者支原体感染情况与患者是否发生耐药存在关联,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 培养法与PCR法检测患者支原体感染情况均具有较优质的临床应用价值,但PCR法比培养法的敏感性和特异性更高;此外患者衣原体感染与相关耐药的发生具有相关性,应在治疗过程中对患者的用药及其效果情况进行密切监测,适时予以个性化调整,以达到更好疗效.
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儿童腹泻病原菌检测及大肠杆菌基因型分析
目的 了解不同检测方法对儿童腹泻病原菌的检出情况及易感致泻性大肠杆菌的基因型特征.方法 收集2013年5-10月在感染消化科就诊的腹泻患儿粪便标本,选择性培养基分离培养大肠杆菌、志贺菌和沙门菌,同时直接进行3种病原菌检测;采用8对特异性引物对大肠杆菌进行基因型分析.结果 122例腹泻标本中细菌培养法检出率为大肠杆菌80.3％,志贺菌25.4％,沙门菌24.6％;标本DNA直接PCR法为大肠杆菌84.4％,志贺菌41.0％,沙门菌49.1％.大肠杆菌基因型检测为EHEC (47.5％)、EPEC(17.2％)、EAEC(4.9％)、ETEC(3.3％)、EIEC(0.8％).结论 与培养法相比,标本DNA直接PCR法可以提高检出率,建议细菌培养法和PCR法联合应用以互补优势.2013年夏季北京地区儿童腹泻的主要病原菌为大肠杆菌,基因型以EHEC和EPEC为主.
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阴道分泌物检测方法探讨
目的 对1180例阴道分泌物进行不同方法检测和结果分析.方法 用悬浮法和革兰氏染色法同时检测,部分用聚合酶链反应基因探针(PCR)的方法检测.结果 悬浮法对滴虫的检测优于染色法;对霉菌、淋球菌、细菌性阴道炎(BV)的检测不及染色法.结论 建议对阴道分泌物常规检查时,选用悬浮法和革兰染色法相结合,必要时加用PCR方法或分离培养,以提高临床诊治水平.
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铁线莲属8种药用植物ITS序列分析
目的:通过测定并比较柱果铁线莲、单叶铁线莲、威灵仙、山木通、毛蕊铁线莲、转子莲、女萎和天台铁线莲的ITS序列,为铁线莲属药用植物的分子鉴定提供依据.方法:利用PCR法从叶片基因组DNA中扩增ITS,借助ClustalX、MEGA、DNASTAR等软件比较和分析ITS的序列特征.结果:铁线莲属8种药用植物ITS1与ITS2之间的长度为534～561bp,变异位点50个,信息位点22个；天台铁线莲与转子莲的遗传距离小,与女萎遗传距离大,亲缘关系远.序列已提交至NCBI数据库,登录号为JF714638-JF714645.结论:获得铁线莲属8种药用植物的ITS序列,为分子鉴定奠定了基础.
