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悬浮培养诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究
目的:利用不加任何诱导剂的悬浮培养法,体外诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞并检测其分化效率.方法:人胚胎干细胞克隆用200U/mL胶原酶Ⅳ,37℃处理10min后,挑起克隆碎片转移到低黏附性培养皿中悬浮培养以形成EB(拟胚体),4d后将EB转移到基质胶处理过的6孔板中贴壁培养(1-3EBs/cm2),显微镜下观察记录出现跳动心肌细胞的时间和跳动频率,并计算跳动克隆百分比,24孔板一组,共记录4组96孔;免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物cTnT;膜片钳实验检测心肌细胞自发性动作电位;跳动心肌细胞经过24h缺氧刺激后,用凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡比例.结果:在悬浮培养14d左右开始出现大量的自发跳动心肌细胞,分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间(13.9±0.9)d,百分比为20.8％,平均跳动频率为(63.8±5.6)次/min;跳动心肌细胞cTnT染色阳性;跳动心肌细胞检测到自发性动作电位;跳动心肌细胞缺氧24h的凋亡比例为(8.1±0.4)％.结论:不加诱导剂的悬浮培养可以诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞,分化效率达到20.8％,分化时间14d左右.为进一步的干细胞移植治疗动物心肌梗死模型提供种子细胞.
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胰腺癌肿瘤干细胞的悬浮培养法
目的 建立无血清悬浮培养分离人胰腺癌细胞系PANC1干细胞球的方法.方法 采用无血清悬浮法培养PANC1细胞,显微镜下观察干细胞球形成率;流式细胞仪检测细胞CD133表达和细胞周期;以含10%FBS培养基诱导干细胞球细胞分化,荧光显微镜下观察细胞形态及CK18的表达;干细胞球细胞接种NOD/SCID小鼠皮下,观察其成瘤能力.结果 在无血清悬浮培养条件下存活的PANC1细胞形成干细胞球,体外连续传代培养20代始终保持4%0～5%0的干细胞球形成率.干细胞球细胞CD133表达率(5.91±0.7)%,G0/G1期细胞占(80.99±2.60)%,与原代PANC1细胞的(1.44±0.52)%和(69.01±5.03)%相差显著(P＜0.05).将于细胞球细胞置含血清培养基中培养.细胞逐渐恢复原代细胞形态,并表达上皮标志蛋白CK18,2×103的干细胞即在NOD/SCID小鼠皮下成瘤.结论 无血清悬浮法培养PANC1细胞可分离出肿瘤干细胞,其具有自我更新、多向分化和成瘤能力.
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阴道分泌物检测方法探讨
目的 对1180例阴道分泌物进行不同方法检测和结果分析.方法 用悬浮法和革兰氏染色法同时检测,部分用聚合酶链反应基因探针(PCR)的方法检测.结果 悬浮法对滴虫的检测优于染色法;对霉菌、淋球菌、细菌性阴道炎(BV)的检测不及染色法.结论 建议对阴道分泌物常规检查时,选用悬浮法和革兰染色法相结合,必要时加用PCR方法或分离培养,以提高临床诊治水平.
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妇科白带染色检查结果和悬浮法检查结果比对分析
目前,常规刮片或液基细胞学检查、阴道分泌物检查等是妇科常规检查的手段.经济便捷的方法是白带常规悬浮法,有的医院采用染色方法,主要用于阴道炎症的检查.而病理科液基细胞学检查价格昂贵,适用于肿瘤细胞学检查,也能筛查霉菌、滴虫、疱疹病毒和细菌阴道病的检查.本文对我院妇科2010年6月至2011年1月门诊住院患者2 558例进行阴道分泌物两种方法比对,发现两种方法在某些方面各有特长,报告如下.
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悬浮法和革兰染色法对阴道分泌物检出率的比较分析
目的:对比革兰染色法和悬浮法对阴道分泌物的检出率,提高阴道分泌物的阳性检出率.方法:对480例妇科门诊患者阴道分泌物同时采用悬浮法和革兰染色法进行检测.结果:悬浮法霉菌检出率为17.3%,滴虫检出率为6.25%;革兰染色法霉菌检出率为22.7%,滴虫检出率为8.54%,淋球菌检出率为1.04%,线索细胞检出率为12.7%.结论:建议将革兰染色法作为妇科阴道分泌物常规检查项目,特别是高度怀疑的标本,更应用革兰染色法进行检测,以提高临床诊治水平.
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瑞氏-姬姆萨染色法对悬浮法白带常规抽检结果分析
目的:利用瑞氏-姬姆萨染色法(染色法)对生理盐水湿片法(悬浮法)阴道分泌物常规检验质量进行抽检复查,以保证悬浮法检测的准确性.方法:每天随机抽取当天临检室悬浮法检测的5份白带标本,同时涂片染色后交由经验丰富的业务人员或专家复查鉴定,对悬浮法检测结果进行质量考核.结果:悬浮法与染色法检测滴虫、真菌和线索细胞结果的符合率分别为99.30％、91.14％、78.80％,其中滴虫,真菌的符合率为合格,线索细胞的符合率为不合格.清洁度符合率为Ⅰ度93.93％,Ⅱ度62.50％(不合格),Ⅲ度89.19％,Ⅳ度11.88％(不合格).结论:瑞氏-姬姆萨染色法是复查监督县浮法的有效措施,保证其检验质量,以提高妇女生殖系统炎症的临床诊断水平.
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瑞氏染色法对悬浮法检测阴道分泌物结果的质控分析
目的 观察瑞氏染色法(瑞氏法)对悬浮法阴道分泌物(白带)常规检查复检监测的室内质控(IQC)效果.方法 2012年每个工作日抽取4～5例悬浮法检查的白带标本,共1 214份进行瑞氏染色,由经验丰富的专人复检滴虫、真菌、线索细胞、清洁度等,并与前阶段监测结果进行比较.结果 2012年悬浮法与瑞氏法检测滴虫、真菌、线索细胞和清洁度结果的符合率分别为98.8％、96.9％、91.8％、98.4％,即IQC成绩均为优秀(＞90％).与前阶段复检监测结果比较,其符合率不断提高(P＜0.01).结论 瑞氏法白带检查能对悬浮法起到监测的作用,可有效提高其检测结果的准确性.
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贴壁法与悬浮法诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞的对比研究
目的 对比研究直接贴壁法与悬浮法分别诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞所需的时间、分化成功率,以及分化后细胞的活性、抗缺氧凋亡刺激的能力.方法 人胚胎干细胞分别通过悬浮法和直接贴壁法诱导分化为心肌细胞.免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物cTnT;显微镜下计数比较两组细胞诱导分化出现跳动心肌细胞的时间、百分比和跳动频率;跳动心肌细胞经过24h缺氧刺激后,用凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡比例.结果 直接贴壁法诱导分化为心肌细胞的成功率更高(66.7％比20.8％,P＜0.05);大量的自发跳动心肌细胞出现时间直接贴壁法早与悬浮法,差异有统计学意义[(13.0±1.1)天比(13.9±0.9)天,P＜0.05];分化的心肌细胞cTnT染色均阳性,均检测到自发性动作电位;分化后的心肌细胞平均跳动频率范围两种方法相仿[(63.0±7.0)次/分比(63.8±5.6)次/分,P＞0.05];跳动心肌细胞缺氧24h后检测到的凋亡比例比较差异无统计学意义[(8.0±0.5)％比(8.1±0.4)％,P＞0.05].结论 两种方法均能成功诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞,直接贴壁法分化成功率更高,所需分化时间较短;两种方法分化出的心肌细胞在细胞活性方面以及抗凋亡能力方面无明显差异.
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2种方法检测白带常规多项目结果对比分析
目的 探讨瑞氏染色法取代悬浮法进行白带常规检验的可行性.方法 用悬浮法、瑞氏染色法于2010年和2011年两时段对1 825份和1 235份白带标本进行对比镜检,比较分析检出滴虫、真菌、线索细胞等阳性率的情况.结果 前后时段瑞氏染色法白带常规线索细胞和清洁度Ⅲ度检出率明显低于悬浮法,Ⅳ度结果则高于悬浮法,差异有统计学意义(P＜0.01),其余各项目2种方法结果差异无统计学意义(P＞0.05).悬浮法和瑞氏法同步为2011年滴虫检出率显著高于2010年,差异有统计学意义(P＜0.01),2010年真菌检出率显著增高,差异有统计学意义(P＜0.01);悬浮法2010年清洁度Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅳ度检出率均明显高于2011年,差异有统计学意义(P＜0.05),瑞氏法2010年Ⅲ度检出率显著增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 瑞氏染色法与悬浮法检测滴虫、真菌等主要项目结果较稳定一致;染色法可检查可疑淋球菌,便于鉴别辨认微生物像、线索细胞等细胞形态准确判断清洁度,可取代悬浮法推广应用.
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阴道分泌物瑞氏法与悬浮法检查结果比较
目的 对比瑞氏染色法和悬浮法阴道分泌物(白带)常见疾病信息的检出率,以证明瑞氏染色法替代悬浮法的可行性.方法 用悬浮法、瑞氏染色法对396份阴道分泌物标本同时进行镜检,检查清洁度、滴虫、真菌、线索细胞、淋球菌,对比分析两种方法的检测结果.结果 悬浮法检出清洁度(Ⅲ～Ⅳ)、滴虫、真菌、线索细胞的阳性率分别为60.10%、5.56%、25.51%、21.97%,瑞氏染色法检出其阳性率分别为70.70%、5.81%、32.32%、29.04%,瑞氏法对清洁度、真菌、线索细胞的检出率明显高于悬浮法(P＜0.05).结论 瑞氏法白带常规阳性检出率高且易于进行质量控制,建议采用该法以提高其临床诊治水平.
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妇科白带涂片多项快速染色技术检查滴虫、霉菌及淋菌的方法学探讨
目前白带涂片滴虫、霉菌及淋菌已成为妇科临检常规,工作量较大,检验质控势在必行.国内普遍采用悬浮法检查滴虫及霉菌不利于建立质控,漏诊率高,检出率极低[1].本文探讨简便易行的CTB技术用于白带常规检验的可行性.
