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冰淇淋菌落总数实时荧光光电快速检测方法的建立与初步应用
随着人们生活水平的不断提高,微生物对食品的污染也相应地成为食品安全中备受关注的突出问题。在食品生产、加工、包装、储存、运输和销售的各个环节中都有污染微生物的可能。一旦污染,微生物将大量繁殖而引起食品腐败变质,或导致食源性感染或食物中毒。目前传统的微生物检测方法主要是形态检查和生化方法,虽然其灵敏度和特异性较高,但所涉及的实验较多、操作繁琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重,仍然是劳动密集型工作。所以准确、省时、省力的快速微生物检测方法已是社会的迫切需要。
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PCR法鉴定结核分枝杆菌复合群亚种的研究
结核分枝杆菌复合群中各菌型致病性和药物敏感性不尽相同,在临床治疗前需要进行菌种鉴定,目前临床使用的生化方法耗时长,给治疗带来不便,本研究采用PCR法可快速鉴定结核分枝杆菌复合群亚种,具有快速、准确的优点,现将研究结果报道如下.
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不典型甲亢在肝病中的表现
本文采用放射免疫法和生化方法,检测8例不典型甲亢患者血清FT3、FT4、T3、T4、RT3和STSH 水平,以及ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)和R-GT(R-谷氨酰转肽酶)水平,并探讨不典型甲亢患者肝脏损伤,有一定临床意义.现报道如下.
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费氏枸橼酸杆菌复合群的鉴定及耐药性分析
枸橼酸杆菌属(citrobacter)机会性致病菌,可引起人的原发和继发性感染症,如呼吸道、泌尿系感染及败血症等,占医院感染的1.5%[1,2].文献报道不同的枸橼酸杆菌对抗生素的敏感性不同,这对治疗由该菌引起的感染症有重要意义.我们对临床分离的89株费氏枸橼酸杆菌复合群按Brenner等[3]提出的生化方法进行了鉴定,并对药敏试验结果进行了分析.
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发根聚合酶链反应诊断急性间歇性卟啉症
急性间歇性卟啉症(acute intermittent porphyria, AIP)是常染色体显性遗传病.患者肝和红细胞中胆色素原脱氨酶(PBG-DA)缺乏,尿中大量胆色素原(PBG)和δ氨基γ酮戊酸(ALA)排出.目前该病主要以生化方法检查.笔者采用发根聚合酶链反应(PCR)结合内切酶分析检测AIP基因,行基因诊断,效果理想.
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宫内窒息鼠损伤肝NO,SOD和NOS的变化
目的:探讨宫内窒息胎鼠在缺血缺氧再灌注过程中肝脏组织SOD、MDA、NO及NOS的改变,以及肝脏病理变化方法:取胎龄21d缺血缺氧及再灌注后胎鼠肝组织,通过生化方法检测肝组织内SOD,MDA,NO的变化.应用免疫组化SABC法检测eNOS和iNOS活性,图像分析系统分析二种NOS光强度(1)结果:随缺血再灌注时间延长,肝组织SOD活性逐渐下降,至24h活性低(SOD,NU.g-1,32.3±2.4 vs 62.7 ± 4.6,P<0.01).MDA含量逐渐升高,至24h含量高(MDA,μmol.g1,3.8±0 5 vs 2.5±0.3,P<0.01);肝组织NO含量在缺血及再灌注早期下降,在再灌注后期明显升高,再灌注6h达高峰(NO,mmol.g-1,1860±350 vs 1250±120,P<0.01).以上三组数据以缺血30min组改变明显.随缺血再灌注时间延长,eNOS光强度逐渐增强,即活性下降,至24h活性低(eNOS,152.2±4.7 vs 125.1±3.6,P<0.01).而iNOS光强度逐渐下降,即活性增高,至6h达高峰(iNOS,95.6±4.6 vs 135.1 ± 2.6,P<0.01).二种NOS活性变化以缺血30min组明显.结论:缺血缺氧及再灌注损伤中肝脏SOD下降,MDA上升,NO大量生成,eNOS活性减弱,而iNOS活性渐增强.
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核因子-κB在大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织的表达及其意义
目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织核因子-κB(NF-kB)及TNF-α、ICAM-1的表达,探讨NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中的作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,设正常组、生理盐水组及轻、重模型组共4组.采用免疫组织化学染色检测肠组织NF-κB、TNF-α和ICAM-1表达,生化方法检测MPO含量,并分析NF-κB活性与肠道病理损伤指数、MPO含量、TNF-α及ICAM-1表达的关系.结果:溃疡性结肠炎大鼠肠组织中NF-κB活性,TNF-α、ICAM-1表达及MPO含量较正常组及生理盐水组显著增高(NF-κB:52.14±9.81、30.26±10.20,60.73±13.41、45.24±10.86 vs13.31±4.76、16.95±6.83,11.61±4.85、14.10±5.76;TNF-α:74.50±11.20、48.11±5.95,84.09±14.52、53.40±8.79vs16.99±5.48、20.04±6.76,10.13±1.79、16.03±6.21;ICAM-1:68.15±7.25、44.34±7.54,77.69±8.09、47.01±8.82vs15.34±4.03、17.50±6.95,10.33±2.38、13.41±4.91;MPO:1.69±0.11,0.71±0.06vs0.39±0.07,0.31±0.08;P<0.01),且在病情严重组增高尤为明显.NF-κB表达水平与TNF-α和ICAM-1阳性细胞密度、MPO含量、肠道病理损伤指数呈显著正相关关系(r分别为0.9 304,0.8 680,0.6 865,0.9 292,0.8 462;P<0.001或P<0.005).结论:NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中可能起重要作用.
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DMN诱发大鼠肝硬化模型MMP-2活性的动态变化
目的:探讨二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)诱发大鼠肝硬化过程中Ⅳ型胶原、Ⅳ型胶原酶(MMP-2)活性及基质金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)表达的动态变化.方法:采用DMN诱发大鼠肝硬化模型,设2 d,1,2,3,4,5,6,8,12,24 wk共10个观察点,分别用生化方法测定其肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量、血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性和白蛋白(albumin,ALB)含量,Envision两步法(免疫组化)测定肝组织Ⅳ型胶原和TIMP-2表达,酶图法测定肝组织MMp-2活性.结果:模型大鼠肝组织Hyp、Ⅳ型胶原含量,血清ALT活性显著高于正常组,ALB含量显著低于正常组.2 d时MMp-2活性显著高于正常组,然后在正常范围内波动.正常组和8 wk以前各组模型大鼠TIMP-2表达微弱,12 wk表达明确,24 wk表达增强.结论:DMN诱发Wistar大鼠肝硬化模型形成前后MMP-2功能主要通过蛋白分泌量和活化量调节而实现,此期肝窦基底膜Ⅳ型胶原含量主要通过MMP-2活性调节,和蛋白分泌及TIMP-2表达关系不大.在肝硬化恢复期TIMP-2调节的重要性逐渐上升,故TIMP-2表达量是肝硬化时肝窦毛细血管化能否恢复的关键因素之一.
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乙型肝炎病毒蛋白结合蛋白的研究
0 引言随着基因组测序工作的完成,后面就是研究基因的功能,其中基因表达蛋白质的功能的研究尤为重要,因为基因是通过蛋白质起作用的.蛋白质与蛋白质之间的相互作用揭示了蛋白质功能的物理基础之一,即蛋白质起作用是通过与另一蛋白质进行物理接触而完成.大家知道乙型肝炎病毒(HBV),对人体有着广泛的作用,如引起人免疫紊乱、慢性肝炎、肝硬化、肝肿瘤发生,治疗效果不佳[1-9 ],但是他们是如何作用的目前不是太清楚,但是可以肯定其中具有蛋白质-蛋白质之间的相互作用.1990年代以来一系列遗传、生化方法特别是酵母双杂交技术等进展,为研究HBV与人体蛋白质之间的相互作用打下了基础.HBV有四个结构蛋白开放读码框架,S、C、P、X编码前-S1、前-S2、HBsAg、HBcAg、HBeAg、病毒多聚酶、和HBxAg,其中HBxAg作用复杂有反式激活作用[10].但是其结构中没有DNA结合域,推测可能和蛋白质之间的相互作用有关,研究比较多.其次是前-S1等.目前鉴定的与HBV相互作用的蛋白质有十几种
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虫草菌丝对大鼠实验性肝纤维化肝细胞增生的影响
目的:动态观察虫草菌丝对实验性肝纤维化肝细胞增生的影响,并探讨其可能的机制.方法:设立模型对照组、虫草菌丝组和正常对照组.以CCLA和乙醇诱导大鼠肝纤维化模型,虫草菌丝组自造模10 d后给予虫草菌丝悬浊液灌胃.正常对照组于实验开始时处死,虫草菌丝组和模型对照组分别于3,6,9wk末随机处死.取血及肝组织标本.应用HE染色观察肝组织形态学变化并评定肝细胞变性指数,生化方法测定血清白蛋白含量,免疫组化方法测定肝组织PCNA、HGF表达情况.结果:与模型对照组相比,虫草菌丝组大鼠血清白蛋白含量在9wk时显著增高(27±0.7vs24±1 P<0.01),而3、6wk时无显著性差异.肝细胞变性指数仅在9wk时明显降低,但无统计学差异(P=0.0703).肝组织PCNA阳性细胞数在3、6wk时有不同程度的升高,其中6wk较为显著(29±10vs15±8 P<0.05).而在9wk时显著下降(8±5vs28±18 P<0.05).HGF强染率在3wk时显著增加(1.4±0.4vs0.7±0.3 P<0.05),6wk时无明显差异,9wk时显著下降(0.7±0.5vs1.8±1P<0.01).结论:虫草菌丝通过上调HGF的表达,促进肝纤维化形成时期肝细胞再生,延缓慢性肝炎向肝硬化阶段发展的进程.
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POCT血糖仪测定血糖结果评价
POCT 血糖仪(Point-of-caretesting,POCT)由于体积小、携带方便、操作简单和结果快速等优点,已被广泛用于糖尿病患者的血糖控制及疗效观察。由于不同检测方法之间存在差异,因此,临床应用时, POCT仪器检测结果应定期与中心化验检测进行比对,以保持医疗单位内检测结果的一致性[1]。本研究根据《医疗机构便携式血糖仪管理和临床操作规范(试行)》的要求,对血糖仪检测结果与本机构实验室生化方法检测结果进行比对与评估,报道如下。
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食品微生物快速检验技术进展
食品在生产、加工、储存、运输和销售等各个环节均可能受到微生物的污染.一旦污染,微生物将大苗繁殖而引起食品腐败变质,或导致食源性感染和食物中毒.传统的检验方法主要包括形态检查和生化方法,准确性和灵敏性均较高,但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长,因此研究和建立食品微生物快速、准确、特异检验的新技术和新方法受到各国科学家的重视.
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ERIC-PCR鉴定单核细胞增生利斯特氏菌
近年来,由于单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes,以下简称单增利斯特菌)污染食品,导致利斯特病的发病率日趋上升,对食品中的单增利斯特菌做出快速的检测和鉴定,是预防利斯特病的有效方法.目前,对单增利斯特菌的鉴定一直采用传统的国标生化方法,费时、费力,并难以与属内的无害利斯特菌(L.innocua)区分.为寻找单增利斯特菌快速检测方法,本文作者收集了6种、62份食品样本,从中分离单增利斯特菌可疑菌落,用肠杆菌基因间一致重复序列聚合酶链反应(Enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence,ERIC-PCR)法加以鉴定,并与国标生化(GB)法进行比较,以探讨ERIC-PCR法快速鉴定单增利斯特菌分离株的可行性.
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血清CYFRA21-1、CEA、TSGF联合检测对恶性肿瘤的诊断价值
目的联合检测细胞角蛋白19片段(CYFBA21-1)、癌胚抗原(CEA)、恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)在恶性肿瘤诊断中的价值.方法采用放免、化学发光及生化方法检测198例恶性肿瘤病人血清CYFRA21-1、CEA、TSGF的含量,并与对照组进行比较、分析.结果恶性肿瘤组的血清CYFRA21-1、CEA、TSGF含量明显高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05).CYFRA21-1、CEA、TSGF测定的阳性率分别为29.7%、8.0%、53.6%,各组间差异有高度显著性(P<0.001),联检阳性率明显提高.结论联合检测血清CYFRA21-1、CEA、TSGF能明显提高恶性肿瘤的诊断阳性率,同时,CYFRA21-1、TSGF对肿瘤普查具有一定的价值.
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胃幽门螺杆菌的快速病理诊断方法
目前临床检验胃幽门螺杆菌(HP)的方法多种多样,包括生化方法,病理检验方法,多聚酶链增扩法(PCR)等.但动态的临床疗效观察仍需病理切片特染诊断来证实.病理特染方法诸如镀银法、单纯法、Griemsa法、碱性品红法等.其效果均不够理想.我们选用国产May-Griemsa法显示HP方法简便、快速、效果良好,现将方法介绍如下.