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脂肪染色制片技术的改进
在临床病理诊断和科研工作中,HE染色切片中常出现的大小空泡是脂肪变性、水泡变性还是糖原贮积,需要用脂肪染色加以鉴别.以往传统的方法是用冷冻切片漂浮染色,在这种染色过程中由于切片厚,染色后附贴切片时容易产生折叠,影响切片的观察和诊断,同时也不适宜大批量制片.为此我们在不影响切片染色质量的基础上,对传统染色方法进行了以下改进,现介绍如下.1 材料与方法1.1 材料小白鼠肝组织20例,大小为0.5mm × 1mm×2mm;人体肿瘤组织5例,大小为2mm×2mm×0.2mm(黏液脂肪瘤1例,间叶瘤2例和卵泡膜细胞瘤2例).全部标本均经10%福尔马林固定后,浸入糖胶液24h以上,然后低温恒冷切片,切片厚4-6um,附贴于铬胶化载玻片上,自然干燥后,浸入2%明胶水溶液中10-20s,冰箱保存备用.
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丹参抑制大鼠肝纤维化线粒体脂质过氧化
目的:研究活血化瘀中药的主药丹参不同浓度提取物对离体线粒体脂质过氧化的抑制作用.方法:提取肝纤维化模型鼠肝组织线粒体,配制不同浓度梯度丹参提取物反应液,以丙二醛(MDA)和过氧化物岐化酶(SOD)为指标,测定丹参对线粒体脂质过氧化抑制作用的量-效、时-效关系.结果:随丹参浓度增加,同一时刻内线粒体反应液MDA产生逐渐减少(反应20 min时F=53.867,P=0.000;S-N-KP<0.05);SOD活性则逐渐升高(F=3.463,P=0.051;S-N-K P<0.05).随反应时间延长,相同浓度丹参的线粒体反应液中MDA增高同时SOD也逐渐增高(F=20.207,P=0.000;S-N-K P<0.05).反应的强点发生在丹参浓度为2 g/L或5 g/L以及反应时间在15 min或20 min以后.结论:丹参对肝纤维化鼠肝脏线粒体脂质过氧化反应存在着一定的量-效与时-效关系.
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宫内窒息鼠损伤肝NO,SOD和NOS的变化
目的:探讨宫内窒息胎鼠在缺血缺氧再灌注过程中肝脏组织SOD、MDA、NO及NOS的改变,以及肝脏病理变化方法:取胎龄21d缺血缺氧及再灌注后胎鼠肝组织,通过生化方法检测肝组织内SOD,MDA,NO的变化.应用免疫组化SABC法检测eNOS和iNOS活性,图像分析系统分析二种NOS光强度(1)结果:随缺血再灌注时间延长,肝组织SOD活性逐渐下降,至24h活性低(SOD,NU.g-1,32.3±2.4 vs 62.7 ± 4.6,P<0.01).MDA含量逐渐升高,至24h含量高(MDA,μmol.g1,3.8±0 5 vs 2.5±0.3,P<0.01);肝组织NO含量在缺血及再灌注早期下降,在再灌注后期明显升高,再灌注6h达高峰(NO,mmol.g-1,1860±350 vs 1250±120,P<0.01).以上三组数据以缺血30min组改变明显.随缺血再灌注时间延长,eNOS光强度逐渐增强,即活性下降,至24h活性低(eNOS,152.2±4.7 vs 125.1±3.6,P<0.01).而iNOS光强度逐渐下降,即活性增高,至6h达高峰(iNOS,95.6±4.6 vs 135.1 ± 2.6,P<0.01).二种NOS活性变化以缺血30min组明显.结论:缺血缺氧及再灌注损伤中肝脏SOD下降,MDA上升,NO大量生成,eNOS活性减弱,而iNOS活性渐增强.
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己酮可可碱对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织Bcl-2,Bax表达的影响
目的:观察己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织中凋亡相关基因Bcl-2,Bax表达的影响.方法:建立小鼠血吸虫肝纤维化模型,将小鼠随机分为4组:(1)感染对照组,(2)高剂量PTX治疗组(360g/kg/d),(3)低剂量PTX治疗组(180 g/kg/d),(4)吡喹酮治疗组(500 g/kg/d).观察4组小鼠治疗8 wk后肝组织中Bcl-2,Bax的表达水平,同时观察肝组织的病理学变化.结果:高剂量PTX治疗组和吡喹酮治疗组肝组织变性坏死及纤维化程度均较感染对照组和低剂量PTX治疗组轻.感染对照组、低剂量PTX治疗组、吡喹酮治疗组、高剂量PTX治疗组Bcl-2水平分别为(0.574±0.488%),(0.768±0.188%),(1.116±0.964%),(1.681±0.963%).高剂量PTX治疗组Bcl-2水平明显高于感染对照组和低剂量PTX治疗组(P<0.05),与吡喹酮组的表达水平相近(P>0.05).Bax水平分别为(0.372±0.291%),(0.351±0.249%),(0.465±0.356%),(0.79±0.642%).4组间Bax的表达水平无显著差异(P>0.05).结论:高剂量PTX可能通过促进Bcl-2表达,减少肝细胞的变性坏死,阻断血吸虫肝纤维化的发生.
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黄芩甙对ConA致肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响
目的:观察黄芩甙对模型小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA含量的影响.方法:除正常组灌服及尾静脉注射生理盐水外,其余各组小鼠分别于首日上、下午和次日下午各灌胃给药1次0.2mL/只,联苯双酯为150 g/L,大、中、小及注射剂组分别为200、100、50、50 g/L.末次给药后4-6 h各组动物一次性尾静脉注射ConA 20 mg/kg,观察血清ALT、AST和肝组织MDA含量的变化.结果:除空白组外的各组小鼠血清ALT、AST值黄芩甙大(2321.3±406.2;1638.5±353.4)、中(1890.2±467.3;1550.3±437.3)、小剂量组(1584.7±399.6;1302.9±353.1)以及注射剂组(2570.0±406.7;2 186.4±443.9)较模型组(4499.9±334.2;3967.6±392.7)均显著降低(P<0.01),说明各治疗组均有降低转氨酶的作用.在降低ALT作用方面,黄芩甙大剂量与注射剂组的ALT降低不及联苯双酯组(P<0.05),黄芩甙中、小剂量降低ALT的作用与联苯双酯组(1612.8±309.2)较为接近(P>0.05).在降低AST作用方面,黄芩甙大、中、小剂量的作用无明显差异并与联苯双酯较为接近(P>0.05),同时可以肯定的是,黄芩甙注射剂也有明显的降低AST的作用,但效果不如黄芩甙大、中、小剂量和联苯双酯组(P<0.05,P<0.05,P<0.05).肝组织匀浆中的MDA含量,以黄芩甙大(2.61±0.3)、中(2.11±0.4)、小剂量组(2.60±0.5)及注射剂(2.66±0.5)和联苯双酯组(2.81±0.3)均较模型组(4.66±0.5)显著降低(P<0.01),黄芩甙中剂量组的肝匀浆MDA含量低,而黄芩甙大、小剂量组及注射剂组的肝匀浆MDA含量低于联苯双酯组,但组间比较无显著差异(P>0.05).结论:黄芩甙可降低血清ALT、AST和肝组织MDA含量且优于联苯双酯,这可能是其抗ConA肝损伤机理的重要方面.
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氯沙坦对肝纤维化模型鼠Smad2/3,Smad7表达的影响
目的:探讨CCl4诱导的肝纤维化模型鼠肝组织Smad2/3,Smad7的表达及氯沙坦干预后对其表达的影响.方法:Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组、模型组、氯沙坦预防组和治疗组,采用CCl4皮下注射构建肝纤维化模型.行HE和VG染色,判断肝组织炎症和纤维化的程度.免疫组化方法检测各组Smad2,3和Smad7的表达.结果:氯沙坦预防组和治疗组的肝组织炎症和纤维化程度明显低于模型组;Smad2/3在氯沙坦预防组和治疗组的阳性表达均明显低于模型组(分别为1.0 900±0.2 767,1.3 222±0.2 279,2.6000±0.3 500P<0.05);Smad7在氯沙坦预防组和治疗组的阳性表达高于模型组(分别为2.5 000±0.3 464,2.2 111±0.5 926,0.4 667±0.2 598;P<0.05).Smad2/3,Smad7在氯沙坦预防组和治疗组的表达无差异性P>0.05.结论氯沙坦抗肝纤维化作用可能与抑制Smad2/3和促进Smad7的表达有关.
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地塞米松对内毒素诱导的新生鼠肝组织诱导型一氧化氮合酶表达的影响
近年来研究表明,大肠杆菌内毒素脂多糖(LPS)可以刺激成年大鼠肝脏产生大量一氧化氮(NO)造成肝损伤.在新生儿败血症中,血中 NO也有明显升高,但败血症造成肝损伤的同时,是否有肝组织内NO的升高,尚无人报告.一氧化氮合酶(NOS)是合成NO的惟一限速酶.本研究LPS诱导肝组织NO的改变和iNOS mRNA表达,以及地塞米松(Dex)对其的抑制作用,以探讨新生儿感染时肝损伤的发病机理.
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12C6+重离子诱导小鼠肝组织一氧化氮合酶活性的变化
Voevodskaya等[1]用电子自旋共振捕集技术首次在γ射线全身照射小鼠后于肝、肾、脾等组织中检测到一氧化氮(NO).并认为NO的产生与组织中一氧化氮合酶(iNOS)活性升高有关.随后大量研究资料证实X或γ射线可诱导小鼠组织中iNOS活性升高并产生大量NO,并且iNOS活性在照射3~4 h后升高明显[2-4].但是,有关重离子能否诱导小鼠组织中iNOS活性的报道较少.笔者在本文中主要介绍用12C6+重离子整体照射小鼠4 h后,诱导小鼠肝组织中iNOS活性的变化.
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钩端螺旋体病的诊断与治疗
钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体(leptospira interrogans sensu lato,简称钩体)引起的一种人兽共患传染病.主要在啮齿动物间传播,属自然疫源性疾病.外耳(Weil)于1886年首次报道该病,故又称为外耳病(Weil diseases).1915年稻田(Inda)等首次在用外耳病患者血液注射的豚鼠肝组织中发现钩端螺旋体.1937年汤泽光在广州首次报道3例外耳病.1995年时曼华报道该病分布于全国26个省、市及自治区(未包括台湾省在内).
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安氟醚和异氟醚预处理对实验小鼠肝组织Bcl-2/Bax mRNA和蛋白表达的影响
缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury,IRI)指缺血后再灌注不仅不能使组织器官功能恢复,反而加重组织器官的功能障碍和结构损伤[1].探讨IRI的特点、规律和发生机制,已成为当今医学的研究热点[2].以异氟醚为代表的挥发性吸入麻醉剂对于许多器官的IRI具有细胞水平的多脏器保护效应,但其作用机制尚不完全清楚.
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宫内窒息胎鼠肝组织一氧化氮及氧自由基作用的研究
研究表明肝脏缺血缺氧及再灌注(I/R)损伤中一氧化氮(NO)和氧自由基有重要作用.本文研究宫内窒息胎鼠在I/R过程中其肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、NO变化,以及肝脏病理变化.
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HPLC法测定磁性微球及大鼠肝组织中的平阳霉素
目的:建立磁性微球及鼠肝组织中平阳霉素的检测方法,评价磁性微球的靶向性.方法:采用RP-HPLC法,紫外检测,内标法定量,平阳霉素磁性微球采用pH=4的胃蛋白酶消化后过滤稀释测定,鼠肝组织匀浆后离心取上清液用三氯醋酸沉淀蛋白后直接进样分析.结果:测定样品在10~50 μg.mL-1范围内线性关系良好,回收率和精密度均较满意.结论:用本法测定磁性微球及鼠肝组织中平阳霉素,可用于研究磁性微球中平阳霉素的含量及组织中分布情况,考察磁性微球的靶向性.