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脂肪染色制片技术的改进
在临床病理诊断和科研工作中,HE染色切片中常出现的大小空泡是脂肪变性、水泡变性还是糖原贮积,需要用脂肪染色加以鉴别.以往传统的方法是用冷冻切片漂浮染色,在这种染色过程中由于切片厚,染色后附贴切片时容易产生折叠,影响切片的观察和诊断,同时也不适宜大批量制片.为此我们在不影响切片染色质量的基础上,对传统染色方法进行了以下改进,现介绍如下.1 材料与方法1.1 材料小白鼠肝组织20例,大小为0.5mm × 1mm×2mm;人体肿瘤组织5例,大小为2mm×2mm×0.2mm(黏液脂肪瘤1例,间叶瘤2例和卵泡膜细胞瘤2例).全部标本均经10%福尔马林固定后,浸入糖胶液24h以上,然后低温恒冷切片,切片厚4-6um,附贴于铬胶化载玻片上,自然干燥后,浸入2%明胶水溶液中10-20s,冰箱保存备用.
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研制改造全自动病理组织染色机
组织切片染色是病理制片过程中一个非常重要的环节,染色质量的好坏直接影响到病理诊断.传统的切片染色是手工操作的,受许多人为因素影响,质量不易控制,效果不够稳定,常常给诊断带来困难.为改变这种落后状况,提高切片质量,用自动化机器控制染色过程,取代传统的手工操作已成为当前病理技术发展的一个趋势.
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SARS病毒包涵体3种染色方法比较
包涵体是病毒感染的依据,在常规HE染色中部分病毒包涵体(如巨细胞性病毒、传染性软疣)容易找到,部分病毒包涵体不易发现(如核内包涵体、疱疹病毒包涵体等).在光镜下若找不到确切的包涵体,做特殊染色就显得更为必要.新近发生的严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory sgndrome,SARS),由于病因学尚有争议,有学者认为是冠状病毒,也有学者认为可能是衣原体变异或新型衣原体,故寻找病毒包涵体便成为关键.我们对1例SARS感染者尸解肺组织,通过几种不同的病毒染色方法进行比较,认为Macchiavell改良亚甲蓝碱性品红染色法染色较为理想,并认为染色过程中对分化的掌握至为重要.
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制备硅化玻片技术方法的改进
防止组织切片或细胞涂片在染色过程中组织或细胞脱落(简称脱片)是免疫组织化学及原位分子杂交技术中的重要环节.为此,通常采用载玻片涂胶或硅化处理后再裱贴组织切片的方法来防止脱片.在众多的玻片涂胶和硅化方法当中,我们对一些方法进行了改进和探讨,总结出一种使玻片处理的操作更加简单,防止脱片效果更好的方法.
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横纹肌快速染色法
目前,横纹肌染色多选用Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH),但该方法存在着配置染液时间长,染色时间长等不足.虽有人加高锰酸钾氧化促其成熟,但还是需要几天时间,且染色效果也不是很满意.我们摸索出一种性能稳定的快速染色法,其试剂配制便捷,染色过程快速,组织色泽艳丽,对比度强,横纹显示清晰.
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改良三重染色法在幽门螺杆菌检测中的应用
幽门螺杆菌是存在于胃幽门等部位的一种革兰阴性杆菌.其形态特点是短杆状、两端微弯,与慢性胃炎和消化性溃疡以及胃癌的发生有关.目前,对幽门螺杆菌的染色多选用Warthin-starry银染法[1],但该法存在着配制染液的方法较烦琐,染色过程中需在水浴箱中孵育,导致染色时间较长等缺点.改良三重染色法[2](苯酚品红/阿辛蓝/苏木素-伊红)有着价格低廉,试剂配制简单,操作简便,诊断迅速等特点.它可以在自动染色机上完成染色的全过程,并且在一张染色切片中既可看到HE的染色效果,又能观察到幽门螺杆菌的感染程度以及肠上皮化生等病理改变.而且,该种染色方法在一般实验室即可开展.
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对免疫组化染色中假阴性反应的认识及体会
免疫组织化学(IHC)技术,是利用抗原与抗体的特异性结合,来鉴定组织或细胞内某种物质的存在,通过酶作用于底物所产生的颜色反应来显示病变的一种技术,已常规应用于病理诊断和研究.由于IHC染色过程要经过很多步骤和环节,染色的质量受多方面因素影响,易出现假阴性和假阳性反应,从而影响病理诊断.现就如何避免IHC染色过程中出现假阴性的问题谈谈个人的认识和体会.
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仿皮面料中二甲基甲酰胺残留量分析方法研究
仿皮面料中的二甲基甲酰胺(Dimethylformamide DMF)是由原料本身及其后加工或染色过程中带入的.DMF虽属低毒物质,但长期吸入高浓度DMF的毒作用不容忽视,制衣行业近几年来DMF职业中毒屡有发生[1,2].我们参照GB/T16111-1995[3]和GB/T 2912.1-1998[4]系统地研究了用气相色谱法测定仿皮面料中DMF的残留量及排除该残留的方法.
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高灵敏度荧光染料SYBR 的性质及应用
随着聚合酶链反应(PCR)仪的大量普及,PCR 产物检测成为临床实验室和科研试验的常规过程.这些产物一般是通过电泳(琼脂糖凝胶电泳或PAGE) 后再进行DNA 和(或)RNA 染色来判断,但传统的核酸染料存在一些不可克服的缺点,如溴乙啶(EB)具强致癌性、硝酸银(AgNO3)染色过程复杂繁琐等.
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一种简易去除苏木精氧化膜的方法
苏木素-伊红(HE)染色是基本的也是重要的病理学染色技术,优质的HE切片是病理医生得以作出正确诊断的关键.一张优质的HE切片,首先应完整、平坦无皱、薄厚均匀、无刀痕;其次,应染色鲜艳、红蓝相应、层次分明、对比清晰、反差明显;第三,应无污染、无人为改变、附贴恰当、标签端正.而我们在日常的HE染色过程中常遇到一些影响切片背景的因素,其中较常见的就是在苏木精染液表面形成的一层氧化膜,该金属膜可黏附在玻片上严重影响切片的质量.近年来我们用铜筛滤过法去除Harris苏木精染液表面的氧化膜取得了较为理想的效果.
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碳蜡包埋技术在脂肪染色中的应用研究
在临床病理诊断和科研工作中,苏木精-伊红(HE)染色切片中常出现大小不等的空泡,常需用脂肪染色鉴别空泡性质;由脂肪组织所发生的肿瘤在与其他组织来源的肿瘤相区分时,也需要借助脂肪染色来进行;在显示和确诊某些先天性类脂质沉积病方面,脂肪染色也有一定的价值。由于脂质易溶于有机溶剂,在常规石蜡切片的固定、脱水、透明、包埋及染色过程中,脂质就会溶于酒精、二甲苯等有机溶剂中,不同程度的丢失或破坏掉,因此用作脂肪染色的病理切片通常用冰冻切片。冰冻切片在染色过程中由于切片过厚,染色后附贴切片时容易产生折叠,影响切片的观察和诊断,同时也不适宜大批量制片[1,2]。为此,笔者在不影响切片染色质量的基础上,用碳蜡包埋并进行脂肪染色,效果较好,现介绍如下。
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抗酸菌冷染纸片法的制备与应用
传统的抗酸染色方法是采用加热石炭酸复红的齐-尼氏抗酸染色法,这种使用溶液并加热的染色方法操作起来较为复杂,染料也容易污染衣物和周围环境,而且染色剂也有一定的保存时效.我们在此法基础上,摸索出一种冷染纸片染色法,以滤纸为载体将染料附着其上,染色过程中不需要加热,不仅简化了操作步骤,方便了操作者,而其与传统的染色法具有相同的效果.现介绍如下.
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瑞氏染色制作血涂片的几点应用体会
血涂片广泛应用于组织学实验教学制作和临床医学检验工作.血涂片染色方法有Wright氏、Gimsa和Wright- Gimsa联合染色法,Wright氏染色法是目前常用的血涂片染色法.经过长期实验,笔者对于血涂片的准备、染色过程、如何保存血涂片等方面有几点体会,现介绍如下.
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Tween-20在免疫组化染色中的应用
良好的免疫组化染色是正确判断染色结果的基础和前提,免疫组化技术是现代病理诊断领域中一项不可缺少的研究与诊断手段,尤其在临床病理诊断中发挥着极其重要的作用。影响免疫组化染色结果的因素很多,包括组织前处理,抗原修复(时间、温度、PH值、离子种类、离子浓度),一抗,二抗,DAB等试剂的孵育时间和温度等[1-4]。在免疫组化实验中,各实验室会选择不同的检测系统。其操作方法亦不尽相同,而免疫组化染色过程中,每一步骤及环节都有可能影响染色结果。如何降低成本,保证染色质量,提高工作效率?我科经过反复探讨摸索,发现在染色过程中,冲洗环节至关重要,将清洗试剂的缓冲液中加入Twenn20,即能节约试剂,又能减少背景染色和非特异性着色。
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EDTA脱钙液在原位杂交中的应用
脱钙是含钙组织进行常规病理染色、免疫组化染色及原位杂交染色过程中必不可少的重要环节.由于脱钙液的种类很多,本研究发现,10%的EDTA脱钙液(内含1‰的DEPC水)能有效的保护组织内的核酸不受破坏[1],报告如下.
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不同抗原修复法对大脑组织凋亡细胞染色的影响
细胞凋亡是一个主动的、高度有序的、基因控制的、一系列酶参与的过程,是目前生命科学界热门的话题之一[1].涌现出了大量的技术和方法对细胞凋亡进行检测,而染色中抗原修复是凋亡染色过程中至关重要的一环,它直接关系到抗原的暴露情况.为了使有限的试剂能染出好的切片,提高凋亡细胞染色的阳性率,我们分别采取了高温高压法、消化法和高温高压与消化联合法来进行抗原的修复,以探索出佳的抗原修复方法.
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常规石蜡HE染色过程中的质量控制
苏木素-伊红(HE)液染色是组织病理学中常用的普通染色.它历史悠久,用途广泛.可以说染色鲜艳,质量优质的HE染色切片是一张科学的工艺美术品.其染色过程中的每一步环节都是很重要的.
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利用甲苯胺蓝-伊红显色神经元胞周蛋白聚糖
蛋白聚糖(proteoglycans)是氨基聚糖与核心蛋白质的共价结合物,是细胞外基质的主要成分之一.有关神经系统蛋白聚糖的染色在国内少见文献报道,笔者在利用甲苯胺蓝进行Nissl 小体染色过程中,发现通过快速伊红复染及乙醇分化可同时简单清晰地显示神经元胞周蛋白聚糖.
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Harris苏木精染色的常见问题及解决方法
在常规病理诊断过程中,常用的是Harris苏木精和沉淀酸化伊红Y乙醇液染色(H-E染色).染色质量是由多种因素决定,但苏木精细胞核染色是其中关键的方面,根据笔者多年来的经验,现就在染色过程中存在的常见问题和改进方法进行探讨.
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显示肥大细胞颗粒的新方法
肥大细胞(mast cell, MC)是多数脊椎动物疏松结缔组织中常见的细胞,广泛地分布于机体各个器官,尤其是在皮肤、消化道、呼吸道、肠系膜和神经末梢的周围结缔组织内密度很大.在变态反应、炎症、寄生虫感染和肿瘤等疾病时,MC具有重要的作用,为此人们对MC的显示方法也很重视.显示出MC中的颗粒是识别和判断MC及其功能状态常用的研究方法,疏松结缔组织中MC传统的显示方法,均采用硫堇、甲苯胺蓝等碱性染料,使MC的颗粒呈嗜碱性,并且具有异染性.但是,MC颗粒是水溶性,常在染色过程中颗粒溶解而消失,常常不能较好的显示MC内的颗粒,因此为了制作较好的MC教学标本,我们对小鼠进行致敏,致敏后MC内颗粒明显增多,脱颗粒的细胞明显增多,然后取材、染色效果较不致敏的小鼠的MC为好.