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小RNA在精子发生中的研究进展
近20年来人们在动物、植物及病毒等生物中发现了一系列小分子非编码RNA,包括miRNA[1]、piRNA[2]和siRNA[3].与其相关的Argonaut家族蛋白分为2个亚家族:Ago亚家族和Piwi亚家族.精子发生是指由精原细胞经初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞至成熟精子形成的过程.整个过程分为3个阶段:精原细胞的增殖、精母细胞的减数分裂和精子细胞的变态过程,这一复杂的过程受多种因素的调控.近年来,小RNA在精子发生中的作用越来越受到人们的重视,现将三种小分子非编码RNA在精子发生中调控作用的研究现状概述如下.
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乙型肝炎患者胆囊黏膜中的HBsAg检测及其临床意义
目前的研究已经表明了乙型肝炎病毒具有泛噬性,即不仅存在于肝组织中,病毒还可侵袭到不同的组织和器官中,已有报道肝炎患者的心肌、肾脏、胰腺、精细胞、前列腺、唾液腺、肝内胆管细胞、骨髓细胞和外周血单个核细胞中均存在乙型肝炎病毒抗原.
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流式细胞术在辅助生殖中的应用
流式细胞术是利用流式细胞仪对处在快速直线流动状态中的生物颗粒,如各种细胞、微生物及人工合成微球等进行多参数、快速定量分析;同时也可以对特定群体加以分选的现代细胞分析技术.流式细胞术在辅助生殖医学领域得到了大量应用,在判断免疫性不孕、预测精子受精能力等技术中发挥重要作用.本文就流式细胞术在不孕不育患者外周血免疫细胞表面标志物的检测,精子细胞结构和功能学分析方面的研究进展作简要介绍.
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PC3 prostasomes对精细胞上游筛选后活力的影响
目的 探讨从PC3前列腺癌细胞株中分离出的pr ostasome样颗粒(PC3 prostasome)对上游筛选后精细胞活力的影响。 方法 将新鲜或冻融精细胞置入含PC3 prostasome (0.10 mg/ml或0.25 mg/ml)及人 血白蛋白(HSA，10 mg/ml)的EBSS液中上游筛选后，测试比较活力的差别。 结 果 新鲜标本不同孵育时间和孵育1 h不同参数间比较，PC3 prostasome 0.10 mg/ml组促 精细胞活力作用强于HSA组(P<0.01)，且此作用可持续6 h。冻融复温标本PC3 prostaso me组恢复活力的细胞比HSA组增加63% (P<0.001)。 结论 PC3 prostasome具有与精浆prostasome相同的刺激精细胞活力作用，且此作用强于HSA。
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羊睾丸提取液对铅损伤小鼠精子顶体形成的影响
目的 观察羊睾丸提取液对铅损伤小鼠精子顶体形成的影响.方法 成年健康清洁级ICR雄性小鼠30只,随机分为对照组、模型组和给药组,每组l0只.模型组采用醋酸铅(30mg/kg)灌胃建立睾丸损伤模型,给药组在醋酸铅灌胃的同时腹腔注射羊睾丸提取液0.5ml,对照组采用等体积蒸馏水灌胃及腹腔注射,每天1次,共21d.经心脏行甲醛灌流固定,制备睾丸标本,PAS染色,光镜下观察圆形精子细胞期顶体的形态学变化.结果 与对照组相比,模型组精子顶体形成障碍,顶体囊泡不完整,膜皱缩,较粗糙,结构模糊；给药组精子顶体形成接近对照组,顶体囊泡形状较规则,膜平滑.结论 羊睾丸提取液可保护小鼠精子顶体在形成过程中免受铅的损害,从而维持其正常的结构及功能.
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人睾丸中各级生精细胞的鉴定
目的:建立人睾丸生精细胞鉴定方法.方法:用机械法离散人睾丸细胞,涂片,用Diff-Quik法染色显示细胞形态.在Hoffman光学镜头下根据细胞形态进行活细胞分类,选取各类细胞分别涂片,行17号染色体着丝粒探针化学显色原位杂交和c-kit抗原表达免疫细胞化学染色.结果:在配置Hoffman镜头的倒置显微镜下人睾丸圆形细胞主要可分为4群:支持细胞(Sertoli)细胞,粗线期初级精母细胞,精原细胞,圆形精子细胞.原位杂交结果为:Sertoli细胞、粗线期初级精母细胞、精原细胞均显示2个着丝粒信号,圆形精子细胞及精子显示单个着丝粒信号.抗c-kit抗体免疫化学染色显示:粗线期初级精母细胞、精原细胞反应呈阳性,Sertoli细胞、圆形精子细胞、精子反应呈阴性.结论:人睾丸各类细胞在活体形态、染色形态、染色体倍性、抗原表达上均有各自显著的特征,其中据Hoffman成像形态区分各级生精细胞是在活体状态下一种简便有效的鉴别人生精细胞的方法.
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单倍体精子细胞卵胞浆内注射研究进展
通过显微注射技术将单倍体精子细胞注射入卵母细胞,如圆形精子细胞注射技术(ROSI)和长形精子细胞注射技术(ELSI),可使非阻塞性无精子症患者获得具有父方遗传物质的后代.单倍体精子细胞可通过精液、皋丸组织活检或生精细胞体外培养获取,但其受精率和妊娠率并不理想.对ROSI/EISI技术的发展按操作系统、精子细胞注射方式和激活方式、临床应用以及存在的问题进行文献综述.
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雄性生殖细胞冷冻保存研究进展
随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展，雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容，为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前，雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻；冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤，根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类；冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。
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应用单位体精子细胞治疗男性不育的研究进展
通过显微注射术将单倍体精子细胞注射入卵细胞中，例如圆形精子细胞注射术（round spermatid injection，ROSI）或圆形精子细胞胞核注射术（round spermatid nucleus injection，ROSNI），可使部分非梗阻性无精子症患者也可能获得具有父方全部遗传信息的后代。单倍体精子细胞可通过精液、睾丸活检获得。目前，虽然已经出生了ROSI试管婴儿，但是仍然存在受精率低、妊娠率低的问题。其中，不能精确识别单倍体精子细胞是单倍体精子注射入卵母细胞后受精失败或受精率低下的主要原因之一。因此，需要深入研究这些问题以改善ROSI临床结局，更好地为人类生殖服务。综述各种识别圆形精子细胞方法的原理及优缺点。
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甘草提取物对青春期后小鼠精原细胞和精母细胞的影响
为研究甘草对青春期后小鼠精原细胞和精母细胞增殖的影响,取3只健康12日龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠的睾丸进行体外培养,分别暴露于终浓度为0(溶剂对照)、0.2、2、20 μmol/L甘草溶液的培养液中培养7d,并设阳性对照组(卵泡刺激素,FSH,200 μg/L).经BrdU免疫染色,检测精原细胞的增殖情况;经抗-Mili-抗体免疫染色,检测次级精母细胞和精细胞的分化情况.结果显示,与溶剂对照组比较,各浓度甘草染毒组小鼠睾丸精原细胞的BrdU阳性细胞率较高,次级精母细胞和精细胞的Mili阳性细胞率较高,差异均有统计学意义(P＜0.01);且呈剂量-效应关系.提示甘草提取物可在青春期后小鼠减数分裂过程中促进精原细胞的增殖;促进初级精母细胞的减数分裂,分化成次级精母细胞和精细胞.
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你对精子知多少
精子是男性生殖细胞,在脑垂体前叶分泌的促性腺激素刺激下,由睾丸内的精原细胞逐渐分化成精细胞,在附睾内成熟为精子,停留于贮精囊内.这个过程大约需要64～74天,精子很小,肉眼是看不见的.
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睾酮类避孕药对大鼠生精细胞凋亡的影响
目的:研究睾酮类避孕药丙酸睾丸酮对大鼠生精细胞凋亡的影响及其机制.方法:30只35日龄雄性SD大鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只.实验组每天肌内注射内酸睾丸酮40 mg/kg,对照组注射生理盐水.于大鼠出生第50天取血,并处死大鼠切取双侧睾丸.应用原位末端标记检测、流式细胞测定(FCM)、电镜及放射免疫等技术,对大鼠睾丸生精细胞的凋亡进行定性、定位和定量研究.结果:与对照组相比,实验组大鼠睾丸生精细胞凋亡数量增多,主要为初级精母细胞;实验组、对照组大鼠生殖细胞凋亡率分别为(11.3±0.9)%和(3.6±2.3)%,1C峰细胞的百分比分别为(21.8±7.1)%和(33.8±7.5)%,2C峰细胞的百分比分别为(52.6±8.2)%和(37.1±12.5)%,差别均有统计学意义(P＜0.01).实验组和对照组大鼠血清中睾酮水平分别为(3486.8±333.3)ns/L和(846.9±167.5)ng/L,卵泡刺激素水平分别为(2.5±0.8)IU/L和(5.2±1.7)IU/L.差别均有统计学意义(P＜0.01).结论:外源性丙酸睾丸酮可能通过反馈性抑制垂体性腺轴而诱导生精细胞凋亡,发挥其避孕的作用.
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小鼠生精细胞的体外双室无血清培养
目的 探讨无血清条件下应用插入式细胞培养皿(Transwell小室)对小鼠睾丸间质细胞—支持细胞—生精细胞的双室培养技术.方法 取60日龄C57BL/6雄性小鼠睾丸间质细胞和15日龄雄性小鼠睾丸支持细胞与生精细胞混合细胞团双室共培养,不添加血清.每日在倒置显微镜下观察生精细胞的形态和生长情况,苏木精染色观察生精细胞形态,染色体倍性分析检测细胞分化情况.结果 在培养1周后,可见圆形精于细胞出现,2周后可见长形精子细胞,3周后可见较短鞭毛,生精细胞可存活8周;培养1周时,流式细胞术可检测出单倍体细胞,单倍体细胞百分比随培养时间延长而增加.结论 应用双室无血清培养体系体外培养小鼠生精细胞可获得精子且生精细胞存活时间较长.
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丙烯腈对雄性小鼠性成熟的影响
目的探讨丙烯腈对未成年雄性小鼠性成熟过程的影响.方法以未成年雄性小鼠为研究对象,采用连续5 d腹腔注射染毒,观察35 d后剖杀,进行睾丸组织病理、精子形态观察以及睾丸生殖细胞流式细胞仪检测分析,综合判断丙烯腈对雄性性成熟的影响.结果丙烯腈对未成年雄性小鼠睾丸组织的影响,表现为曲细精管基膜断裂,曲细精管内生殖细胞的数量减少,管腔内成熟精子减少,中、高剂量组曲细精管管腔内成熟精子百分比仅为阴性对照组的1/3和1/6(P＜0.01);精子形态结构异常增加,其中高剂量组精子畸形率为阴性对照组的2.6倍(P＜0.05);睾丸组织中多种精子细胞成熟障碍,各染毒组精细胞凋亡增加,其中高剂量组精细胞凋亡率为阴性对照组的1.75倍(P＜0.05).结论丙烯腈影响雄性小鼠的性成熟过程,是雄性生殖毒性作用机制之一.
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十氯酮诱导氧化应激损伤对秀丽隐杆线虫精细胞影响
目的 探讨十氯酮对雄性秀丽隐杆线虫精细胞的毒性效应及其与氧化应激损伤作用的关系.方法 幼虫 1 期线虫分别暴露于4 个剂量十氯酮(0.02、0.20、2.00、20.00 μg/L)、对照组(M9 溶液),48 h 后,计数后代数目和观测世代时间;通过二氢荧光素乙酰乙酸(CM-H2DCFDA)探针法检测线虫体内活性氧(ROS)水平;荧光显微镜观测线虫远端顶细胞(DTC)荧光强度;二脒基苯基吲哚(DAPI)染色后计数性腺有丝分裂区生殖细胞数;显微镜明场下观测线虫精子畸形率和体外活化率.结果 十氯酮高剂量组秀丽隐杆线虫后代数目为(255.00 ± 13.72)个,明显低于对照组(335.60 ± 21.31)个;十氯酮高剂量组秀丽隐杆线虫世代时间为(69.60 ± 1.96)h,长于对照组(55.80 ± 1.94)h,差异有统计学意义(P ＜ 0.05).与对照组比较,十氯酮2.00、20.00 μg/L 组线虫体内活性氧水平升高,各剂量十氯酮组线虫远端顶细胞荧光强度降低(P ＜ 0.05).对照组线虫有丝分裂区生殖细胞数目为(87.90 ± 3.75)个、精子畸形率为( 12.70 ± 1.16) ％、体外活化率为( 77.00 ± 9.82) ％, 20.00 μg/L 十氯酮组线虫有丝分裂区生殖细胞数目[( 47.90 ± 5.42)个]下降、精子畸形率[(84.00 ± 7.29) ％]明显上升、体外活化率[(8.70 ± 2.41) ％]明显下降.结论 氧化应激损伤可能是十氯酮暴露后引发生殖毒性作用的重要机制.
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丙烯腈对DNA交联作用研究
目的应用牛胸腺DNA和染毒丙烯腈(AN)小鼠精细胞研究AN对DNA的交联作用,研究AN毒作用的分子机制.方法应用溴化乙锭荧光法测定加或不加S9条件下AN对牛胸腺DNA交联作用.雄性小鼠随机分为阴性对照,3、6、9、12、18和24 mg/kg AN染毒组,每组2只.腹腔注射染毒1次,于染毒第24 h处死小鼠,分离精细胞,观察细胞存活率,测定精细胞DNA交联率.结果加与不加S9条件下,AN对牛胸腺DNA均未产生交联作用.小鼠精细胞DNA交联率在3、6、9 mg/kg AN剂量范围内随剂量增加而升高,呈明确的剂量-反应关系(r＝0.935,P＜0.05).结论在体外实验中AN对牛胸腺DNA未产生交联作用,对小鼠精细胞DNA在较低剂量时产生了交联作用,高剂量产生断裂作用和交联作用.AN对精细胞的DNA交联作用可能是产生生殖毒作用的分子机制之一.
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胞质内单精子注射精子的研究进展
随着环境污染因素的增多,雄性动物生殖能力出现了下降的趋势;而胞质内单精子注射(ICSI)方法是解决雄性因素不育的重要途径.本文就ICSI注射的射出的精子、附睾精子、睾丸精子及精细胞的研究进行综述.
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变黑白头翁提取物降低亚砷酸盐对小鼠精细胞的毒性
目的:研究变黑白头翁提取物降低亚砷酸盐对小鼠精细胞毒性的作用.方法:给予实验小鼠亚砷酸钠(20 mg/kg每日),并分别在第30、60、90天对小鼠进行检测.亚砷酸盐中毒小鼠被分为2组,其中一组给予变黑白头翁提取物(35 mg/kg),另一组给予85％乙醇.通过检测小鼠精细胞凋亡标志蛋白CYP1A1、p53及caspase 3的活性,确定细胞及DNA的损伤情况,并测定睾丸毒性标志物的水平.通过圆二色光谱仪及熔化温度数据检测变黑白头翁提取物与DNA的相互作用情况.结果:亚砷酸盐中毒小鼠的所有细胞凋亡标志蛋白及睾丸毒性标志物的水平均有所上升,而经变黑白头翁提取物治疗的小鼠上述各项指标均降低或恢复至正常水平.变黑白头翁提取物与DNA相互作用,引起了DNA结构和构象的变化.结论:变黑白头翁提取物可作为砷中毒引起的生殖功能损害的治疗药物给予研究和开发.
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Harris苏木精染色的常见问题及解决方法
在常规病理诊断过程中,常用的是Harris苏木精和沉淀酸化伊红Y乙醇液染色(H-E染色).染色质量是由多种因素决定,但苏木精细胞核染色是其中关键的方面,根据笔者多年来的经验,现就在染色过程中存在的常见问题和改进方法进行探讨.
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拉米夫定抑制乙肝患者精细胞内HBcAg表达的相关临床研究
[目的]探讨乙肝患者精细胞内HBcAg表达与血清HBV DNA水平的相关性及拉米夫定对精细胞内HBcAg表达的抑制作用.[方法]选择2007年1月至2008年10月在济南市传染病医院就诊的门诊和住院的乙肝患者62例为乙肝组,22名HBV指标全部阴性的健康人为对照组,检测精细胞内的HBcAg;乙肝组同时检测血清HBV DNA.[结果]精细胞HBcAg定性检测阳性率,乙肝组为96.77%(SHBcI≤2.5者7例,2.6～4.9者18例·≥5者37例),22名健康对照均阴性.乙肝组中,精细胞HBcAg的表达及其高度表达者所占比例,血清HBV DNA高者高于血清HBV DNA低者(P<0.01).精细胞HBcAg定量值,乙肝病人拉米夫定治疗的23例治疗后低于治疗前(P<0.01)·未治疗组10例高于治疗组治疗后(P<0.01).[结论]乙肝患者精细胞HBcAg表达与血清HBVDNA水平显著相关·拉米夫定治疗可减少精细胞内HBcAg的表达.
关键词： 乙肝病毒核心抗原 精细胞 乙肝病毒脱氧核糖核酸 拉米夫定
