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血管内皮细胞生长因子与p27在星形细胞瘤中的表达及其临床意义
一、资料与方法取脑星形细胞瘤术后,石蜡包埋蜡块33例.患者男性24例,女性9例,年龄18~57岁,中位年龄34.4岁.患者5年生存16例.Ⅰ~Ⅱ级22例,Ⅲ~Ⅳ级11例.另取6例正常脑组织对照,均系颅脑外伤后行内减压术患者切除之脑组织.6例均为男性.行免疫组化实验,每组实验设有阳性和阴性对照.血管内皮细胞生长因子(VEGF)的阳性表达位于细胞浆棕黄色颗粒.阳性细胞数分度≥10%为阳性,<10%为阴性.p27的阳性染色位于细胞核,在组织里呈棕黄色或淡黄色散在分布.阳性细胞数分度≥10%为阳性,<10%为阴性.对计数资料采用x2检验分析.
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解析免疫组化实验中手工操作失误导致不良结果及对策分析
免疫组织化学技术(immunohistochemistry)是由免疫学和传统组织化学相互结合发展而来的一类实验技术,其是利用抗原(antigen)和抗体(antibody)间特异结合的原理,对组织片或细胞标本中的某些多肽和蛋白质等大分子物质进行原位的定性、定位或定量研究的技术,简称免疫组化[1,2]。随着免疫学、免疫化学和组织化学的不断发展进步,以及显微镜的更新进步,免疫组化技术也取得了长足发展,越来越多地渗透到医学及生命科学的各个领域。免疫组化种类很多,按照标记物的不同分类,可分为免疫荧光技术、免疫酶组织化学技术、免疫胶体金组织化学技术、亲和免疫组织化学技术四类,常用的是亲和免疫组织化学技术。因各类技术基本原理相同,使得不同类实验步骤大致相近,但因每一类技术的独特性,其操作步骤本身又都具有其特定性。免疫组化实验步骤繁琐,从取材、固定、组织处理、制片到抗原修复、染色步骤繁多,涉及的试剂至少十种,周期长,而且每个环节环环相扣,看似简单的实验操作,却往往不能得到理想的实验结果。本研究汲取多年科研工作中及培养研究生进行免疫组化技术操作中发现的一系列操作失误及所造成的不良后果进行分析总结如下。
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心理应激干预大鼠颞下颌关节软骨中两种细胞因子的表达
背景:有动物建模方面的报道称心理应激可引起大鼠颞下颌关节疾病的发生,并有病理改变。
目的:观察心理应激对大鼠颞下颌关节髁突软骨细胞血管内皮生长因子和转化生长因子β1表达的影响。
方法:将48只成年Wistar雄性大鼠随机分为实验组和对照组,其中实验组36只,对照组12只。对实验组施加电击、制动、气候箱、食物诱惑等刺激,使实验组大鼠处于心理应激状态。将实验组分别于刺激3周(刺激3周组)、刺激6周(刺激6周组)和刺激6周后正常饲养6周(恢复组)时间点各处死12只;对照组12只同实验组后一批一起处死,取颞下颌关节标本制作切片。
结果与结论:恢复组血管内皮生长因子阳性率明显大于刺激3周组和对照组(P<0.05);刺激6周组转化生长因子β1阳性率明显大于对照组(P <0.05)。表明血管内皮生长因子与新生毛细血管修复组织有关,转化生长因子β1在心理应激过程中可能起到了促进骨吸收的作用。 -
Tween-20在免疫组化染色中的应用
良好的免疫组化染色是正确判断染色结果的基础和前提,免疫组化技术是现代病理诊断领域中一项不可缺少的研究与诊断手段,尤其在临床病理诊断中发挥着极其重要的作用。影响免疫组化染色结果的因素很多,包括组织前处理,抗原修复(时间、温度、PH值、离子种类、离子浓度),一抗,二抗,DAB等试剂的孵育时间和温度等[1-4]。在免疫组化实验中,各实验室会选择不同的检测系统。其操作方法亦不尽相同,而免疫组化染色过程中,每一步骤及环节都有可能影响染色结果。如何降低成本,保证染色质量,提高工作效率?我科经过反复探讨摸索,发现在染色过程中,冲洗环节至关重要,将清洗试剂的缓冲液中加入Twenn20,即能节约试剂,又能减少背景染色和非特异性着色。
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自动免疫组织化学染色与手工免疫组织化学染色质量的对比观察
于传统手工免疫组化实验存在可复性、一致性较差的缺点,在一定程度上阻碍了免疫组化技术在临床病理学上的应用.为了找出使用自动免疫组化(IHC)染色与手工免疫组化染色之间制片质量的差异,我们进行了14种抗体计69片的自动IHC染色与手工IHC染色对比观察.
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肿瘤抑制因子PTEN与心肌肥大关系的研究
目的:观察肿瘤抑制因子PTEN在心肌肥厚大鼠心肌组织以及在血管紧张素诱导的肥大心肌细胞中的表达,探讨PTEN在心肌肥大发生发展中的作用以及相关机制.方法:采用腹主动脉狭窄术制备压力超负荷心肌肥厚动物模型,及血管紧张素诱导新生大鼠心肌细胞肥大模型,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法、Western blot及免疫组化等方法,分别检测各组PTEN mRNA和蛋白表达的变化,以及PTEN蛋白在心肌细胞中的定位.结果:(1)与对照组相比,心肌肥厚组大鼠左室肌PTEN mRNA和蛋白表达均明显减少;血管紧张素诱导心肌细胞肥大组PTEN蛋白表达明显减少.(2)与心肌肥厚组相比,卡托普利组大鼠左室心肌PTEN mRNA和蛋白表达增加,接近对照组.(3)免疫组化实验结果显示心肌细胞核内有阳性免疫产物生成,提示PTEN蛋白定位于心肌细胞核内.结论:PTEN在心肌肥大发生发展中可能起负调控作用,该作用与肾素-血管紧张素系统密切相关.
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免疫组化技术在实验动物组织中的应用体会
医学研究领域中常应用实验动物建立具有人类疾病模拟表现的疾病动物模型,这是人类认识自身疾病发生、发展规律和研究防治措施的重要途径.当科研人员利用实验动物完成疾病造模后,往往采用免疫组化技术对动物组织进行鉴定,以检测疾病造模效果,并从中总结出规律性的东西为人类健康服务.但是在以往实验动物组织的免疫组化实验中存在一些问题,下面就相关问题谈点我们的思考和体会.