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1-33 硫丹对大鼠生精功能的影响及氧化损伤
目的观察硫丹对大鼠生精功能的影响以及氧化损伤是否为其毒作用机制之一.方法成年Wistar大鼠,体重250~320 g,每天灌胃给予硫丹0、2.5、5.0、7.5 mg/kg,5.0 mg/kg组部分动物同时腹腔注射维生素C 20或40 mg/kg,持续10周.给药结束时心脏采血分离血清.处死后检查雄性生殖器官的重量,每日精子生成量,附睾精子计数和畸形率以及血清和睾丸、肝组织匀浆中过氧化脂质(LPO)和8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量.结果硫丹对大鼠体重、心、肺、肝、脾、肾以及睾丸、附睾、前列腺、精囊腺等器官的重量均无明显影响.3个给药组大鼠每日精子生成量比对照组减少18%~30%,精子计数减少25%~32%.中剂量和高剂量组精子畸形率增加,血清睾丸和肝组织匀浆中的LPO和8-OHdG都明显高于对照组,且存在剂量-效应关系.同时给维生素C的动物除精子畸形率外,上述各项损害都有所改善.结论硫丹能影响大鼠精子的生成,氧化损伤可能是其机制之一.
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TSH受体抗体的测定与临床意义
促甲状腺素受体(TSH-R)位于甲状腺滤泡上皮细胞质膜上,由糖蛋白和神经节苷脂组成.TSH-R具有高、低两种亲和力,糖蛋白为高亲和力的识别部位,也是一种异质性受体,能特异地与TSH结合,可以代替TSH抗体,建立放射受体分析(RRA),检测待测物生物活性,而RIA测定待测物免疫活性.1 TSH-R的制备取人或牛的新鲜甲状腺,剪碎,组织匀浆,用0.1mol/L二碘水杨酸锂,处理甲状腺滤泡上皮细胞膜,获粗制受体液.再行蔗糖密度梯度离心,得分子量为280、160、75、15-30kD的四种具有结合TSH活性的TSH-R,又称为增溶受体.后经胰蛋白酶水解成15-30kD的纯TSH-R蛋白.
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人工肝技术应用及人工肝中心的管理
人工肝脏简称为人工肝或人工肝支持系统(artificial liver/artificial liver support system,ALSS),其研究始于50年代.1956年Sorrentino证明了新鲜肝组织匀浆能代谢酮体、巴比妥和氨,首次提出了"人工肝脏"的概念.至2002年5月,全国已有数百家医院及研究单位开展了部分人工肝临床和科研工作,累计治疗病例超过10000人次,自1999年以来治疗病例每年增幅均超过200%.我国人工肝正处于起步和快速发展阶段,成为血液净化领域一个重要分支.
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中药肝脂复煎剂对酒精和高脂饲养诱导的大鼠脂肪肝的影响
目的:观察中药肝脂复煎剂对酒精和高脂饲养诱导的大鼠脂肪肝的防治作用.方法:采用高浓度酒精灌胃合高脂饲料饲养制备大鼠脂肪肝模型,同时给予不同剂量肝脂复煎剂治疗,以二甲双胍为对照.通过检测血清肝酶谱、肝组织匀浆甘油三脂含量和肝脏组织学变化,观察不同剂量肝脂复煎剂对脂肪肝的防治作用.结果:模型组大鼠肝脏出现明显的脂肪变性,肝酶活性(ALP、GGT)、血脂和肝组织甘油三脂含量升高(ALP:8 156±2 696 vs 4 478±2 229;GGT:52±14 vs24±21;TG:615±106 vs454±113,P<0.05;肝TG:53±10 vs27±8,P<0.01).肝脂复剂量组肝细胞脂肪变显著减轻,肝酶活性(ALP、GGT)、血脂和肝组织甘油三脂含量较模型组显著下降(ALP:5 666±2 187 vs8 156±2 696;GGT:24±14 vs52±14;TG:442±148 vs615±106;肝TG:35±4,36±6,38±6 vs 53±10,P<0.05-P<0.01),二甲双胍组肝组织甘油三脂含量较模型组下降(32±1 vs53±10,P<0.01),其余指标无显著差异.结论:肝脂复煎剂对脂肪肝具有良好的防治作用.
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电泳法检测肝和血清中醇脱氢酶同工酶
目的:建立琼脂糖凝胶电泳法检测人血清醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase isoenzymes ADH EC 1.1.1.1)同工酶.方法:采用自制琼脂糖凝胶板,摸索实验条件,在pH 8.6,74 mmol/L巴比妥电泳缓冲系统中进行20 mA、20 min电泳,可清晰地分离出ADH同工酶三条区带.结果:检测了67例患者血清ADH总活性0.013-0.021 Kat/L,同工酶ADH Ⅰ占ADH总活性0.01-0.30,ADHⅡ占ADH总活性0.12-0.31,ADHⅢ占ADH总活性0.39-0.80.检测了10例人健康肝组织匀浆的ADH总活性为0.136-0.196Kat/L,同工酶ADH Ⅰ占总活性的0.07-0.25,同工酶ADHⅡ占总活性的0.19-0.27和同工酶ADHⅢ占总活性的0.56-0.73.结论:正常人血清中ADH酶活性很低,为0-1.8×10-3 Kat/L,其同工酶不易被检测出.而肝脏组织中含有大量ADH酶活性,当肝脏受到严重损伤时,ADH即从肝细胞内逸出,进入血液,使血清中ADH酶活性明显升高,同时通过琼脂糖电泳对其同工酶的检测可测出三条区带,帮助临床进一步了解肝细胞损伤程度,对患者预后和病程的监测具有一定的临床意义.
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蛋白酶抑制剂ONO-3403对胰泌素刺激的大鼠胰腺外分泌的影响
目的:观察新型蛋白酶抑制剂ONO-3403对进食大鼠基础的及胰泌素刺激的胰腺外分泌的影响,探讨ONO-3403增加胰腺外分泌的机制.方法:对进食的Wistar大鼠,分别于实验前12h经胃管给与ONO-3403(20mg/kg)后收集基础的和静脉注射胰泌素后的胰液,并对胰腺组织匀浆处理.用Lowry法,产色素法分别测定胰液及胰腺组织中蛋白含量,淀粉酶含量.用DST800多项滴定系统测定胰液HCO-3含量.结果:给与ONO-3403的大鼠胰液容积,无论基础的及胰泌素刺激的,均较对照组明显增加,并在胰泌素每小时为125ng/kg时胰液容积达高峰(226±10ul per30min vs 44±5ulper 30min,P<0.01),提示ONO-3403能增加进食大鼠的胰液外分泌.给与ONO-3403的大鼠胰液蛋白含量与对照组相比,无论基础的和胰泌素刺激的均明显增加,并在胰泌素每小时为62.5ng/kg时胰液蛋白含量达高峰(985±215ug per 30min vs 254±47ug per30min,P<0.01),提示ONO-3403能增加进食大鼠的胰液外分泌中的蛋白含量.给与ONO-3403的大鼠胰液中HCO3-含量与对照组相比,无论基础的和胰泌素刺激的均明显增加,并在胰泌素每小时为250ng/kg时HCO3-含量达高峰(18±0.7umol per 30min vs 5.9±0.8umolper30min,P<0.01),提示ONO-3403能增加进食大鼠的胰液中HCO3-含量.给与ONO-3403的大鼠胰腺重量和胰腺蛋白含量与对照组相比,差异不显著(P>0.05).而胰腺淀粉酶含量与对照组相比明显降低(3114±372U×103vs 5746±261U×103,P<0.05).结论:ONO-3403能增加进食大鼠的胰腺外分泌及对胰泌素刺激的敏感性,其机制可能是通过CCK调节的胰腺反馈而起作用的.
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环氧合酶-2对酒精性肝损伤大鼠氧化/抗氧化的作用
目的:探讨环氧合酶(COX)-2抑制剂对酒精诱导的肝损伤大鼠氧化/抗氧化系统的作用.方法:应用酒精灌胃法制作酒精性肝损伤大鼠模型,对照组(n=10)玉米油+葡萄糖;损伤组(n=24)酒精+玉米油;处理组(n=24)在损伤组基础上予选择性COX-2抑制剂塞莱昔布(celecoxib).23 d后处死大鼠,测定血浆和肝组织匀浆谷胱甘肽-S转移酶(GST)活性、超氧化歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,Western blot法检测各组大鼠肝组织中COX-2蛋白的表达.结果:与对照组相比,损伤组中血清AST、ALT、血浆GST活性和肝组织MDA水平明显升高(196.00±29.52 vs139.78±26.27,59.43±6.00 vs 46.67±10.09,17.56±1.26vs 13.29±4.31,0.562±0.054 vs 0.465±0.062,P<0.01或P<0.05),血浆及肝组织SOD活性、肝组织GST活性明显下降(43.969±8.863 vs 57.788±7.587,2.083±0.394 vs2.943±0.321,1.63±0.64 vs 3.54±0.33,P<0.01).与对损伤相比,处理组血清AST明显下降、血浆及肝组织SOD活性、肝组织GST活性均明显升高(144.00±18.45 vs196.00±29.52,55.547±5.937 vs 43.969±8.863,2.833±0.176 vs 2.083±0.394,3.77±0.32 vs 1.63±0.64,P<0.01).Western blot显示,肝组织中COX-2表达损伤组较对照组明显升高(0.5 239±0.1 399 vs 0.2 255±0.0 916,P<0.01),处理组较损伤组降低,而较对照组升高(0.3 769±0.1 798vs 0.5 239±0.1 399,0.3 769±0.1 798 vs 0.2 255±0.0 916,P<0.05).结论:COX-2的表达与酒精性肝损伤大鼠肝组织抗氧化酶系呈负相关而与脂质过氧化(lipid peroxides,LPO)产物正相关,其抑制剂则可以使酒精性肝损伤大鼠肝组织抗氧化酶系活性升高和LPO减轻,从而对大鼠酒精诱导的肝损伤起保护作用.
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黄芩甙对ConA致肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响
目的:观察黄芩甙对模型小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA含量的影响.方法:除正常组灌服及尾静脉注射生理盐水外,其余各组小鼠分别于首日上、下午和次日下午各灌胃给药1次0.2mL/只,联苯双酯为150 g/L,大、中、小及注射剂组分别为200、100、50、50 g/L.末次给药后4-6 h各组动物一次性尾静脉注射ConA 20 mg/kg,观察血清ALT、AST和肝组织MDA含量的变化.结果:除空白组外的各组小鼠血清ALT、AST值黄芩甙大(2321.3±406.2;1638.5±353.4)、中(1890.2±467.3;1550.3±437.3)、小剂量组(1584.7±399.6;1302.9±353.1)以及注射剂组(2570.0±406.7;2 186.4±443.9)较模型组(4499.9±334.2;3967.6±392.7)均显著降低(P<0.01),说明各治疗组均有降低转氨酶的作用.在降低ALT作用方面,黄芩甙大剂量与注射剂组的ALT降低不及联苯双酯组(P<0.05),黄芩甙中、小剂量降低ALT的作用与联苯双酯组(1612.8±309.2)较为接近(P>0.05).在降低AST作用方面,黄芩甙大、中、小剂量的作用无明显差异并与联苯双酯较为接近(P>0.05),同时可以肯定的是,黄芩甙注射剂也有明显的降低AST的作用,但效果不如黄芩甙大、中、小剂量和联苯双酯组(P<0.05,P<0.05,P<0.05).肝组织匀浆中的MDA含量,以黄芩甙大(2.61±0.3)、中(2.11±0.4)、小剂量组(2.60±0.5)及注射剂(2.66±0.5)和联苯双酯组(2.81±0.3)均较模型组(4.66±0.5)显著降低(P<0.01),黄芩甙中剂量组的肝匀浆MDA含量低,而黄芩甙大、小剂量组及注射剂组的肝匀浆MDA含量低于联苯双酯组,但组间比较无显著差异(P>0.05).结论:黄芩甙可降低血清ALT、AST和肝组织MDA含量且优于联苯双酯,这可能是其抗ConA肝损伤机理的重要方面.
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法莫替丁与扑尔敏协同作用治疗幽门结扎胃溃疡的实验研究
目的:探讨H1阻滞剂扑尔敏、H2阻滞剂法莫替丁协同作用治疗幽门结扎胃溃疡的疗效.方法:建立幽门结扎致胃溃疡模型,40只SD大鼠随机分为五组:正常组、模型组、法莫替丁组(famotidin,FMD4 mg/kg)、扑尔敏组(chlorpheniramine,CPA 10 mg/kg)、联合用药组(FMD+CPA),于给药3 d后造模,造模3 h后处死搜集标本.用肉眼、光镜观察胃标本的病理学改变,按Okabe法改良法计算溃疡指数(UI);滴定法测胃液酸度;生化法测定肝组织匀浆中的髓过氧化物酶(MPO)的含量;放免分析法测定血浆IL-8.结果:与模型组比较,FMD组与FMD+CPA联合组的溃疡指数均明显下降(2.25±0.46 vs 3.75±0.46,P=0.007<0.01,1.75±0.46 vs 3.75±0.46,P=0.002<0.01)胃酸度明显下降(22±14.78 vs 50.63±19.03mmol/L,P=0.001<0.01;20.6±17.57 vs 50.63±19.03 mmol/L,P=0.0 008<0.01);FMD:组与FMD+CPA组之间无差异(P>0.05),提示FMD组与FMD+CPA联合组治疗胃溃疡均宁激明显;但是FMD+CPA联合组与FMD组的大鼠血浆IL-8及肝组织MPO相比要明显低(IL-8:0.32±0.05 vs 0.47±0.08μg/L,P=0.024<0.05;MPO:4.25±0.87 vs 8.17±1.29 U/L,P=0.0 017<0.01),提示扑尔敏有抗炎作用,法莫替丁与扑尔敏联合应用抗炎作用显著.结论:H1、H2受体阻滞剂协同作用治疗幽门结扎胃溃疡能取得良好的疗效,尤其抗炎作用显著,其机制与减少炎症因子的产生,减少对胃黏膜的损伤,改善胃黏膜血流有关.
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碱解法测定组织羟脯氨酸的实验研究
目的在羟脯氨酸的测定方法中,传统的酸解法存在消化时间长,6 mol/L HC1易挥发,步骤繁琐等缺点,故本文目的在于探讨操作简单的碱解法测定羟脯氨酸的可行性及影响因素.方法将待测组织匀浆或组织碎块按1∶4的比例加入2.5 mol/L氢氧化钠,120°C、0.1 kPa消化20 min,然后氯氨T氧化10 min(37°C水浴),与对二甲氨基苯甲醛反应10 min(水浴80℃)生成红色化合物,550 nm处比色.分别观察了氢氧化钠浓度、水解时间、pH值、组织干重及湿重对本实验的影响,并与酸解法作了对比.结果碱解法的适宜条件如下:组织块必须称干重、2 mol/L NaOH(终浓度)、水解时间20 min、pH值6.0~6.5.结论碱解法缩短了测定时间(全部测定用2 h),简化了操作,而且灵敏度高、重复性和一致性较好,回收率较高,可用于临床和生物医学领域.
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血管平滑肌细胞培养液和膀胱匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化
我们利用已经分化成熟的血管平滑肌细胞(VSMC)培养液和膀胱组织匀浆上清对骨髓间充质干细胞(MSC)体外诱导分化进行了研究,现报告如下.
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吡拉西坦对局灶性脑缺血引起的生物膜损伤的保护作用
一、材料和方法1.材料:雄性SD大鼠(体重300~330g)及弱瘤脂肪酸(FFA)和ATPase测试盒等.2.方法:(1)采用大鼠动脉腔内插线法局灶性脑缺血模型,在缺血2h后进行再灌注.(2)再灌注2h后留取缺血半球标本,依据FFA和ATPase测试盒提供的方法,制备组织匀浆,并测定FFA水平及Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase和Ca2+-Mga+-ATPase的活性.(3)再灌注2h后留取缺血半球,采用湿重-干重法测定脑组织水分含量.(4)再灌注2h后经股静脉给予3%伊文氏蓝(2ml/kg),平衡3h后依次经心灌注肝素生理盐水(肝素含量为5U/m1)和10%福尔马林溶液,然后取全脑,切片,片厚2mm,用图像分析仪测定脑组织蓝染部分的体积,代表BBB的损伤.
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高功率脉冲微波辐射对小鼠机体氧化应激及巨噬细胞氧耗的影响
目的:探讨高功率脉冲微波(hish power pulse microwave,HPPM)辐射对小鼠脑、肝、脾氧化应激效应及巨噬细胞氧耗的影响.方法:雄性昆明小鼠30只,随机分为3组(每组10只):正常对照组(A),辐射1次组(B),辐射3次组(C).采用S波段HPPM,平均表面功率10 mW/cm2;照射时间2 min/次,隔日辐射1次.末次辐射完毕,立即处死小鼠,取脑、肝、脾、心、肾脏制作匀浆.采用比色法测定脏器匀浆的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量.收集大鼠腹腔巨噬细胞,调整浓度为1×107/ml,将细胞悬液分为两组(n=12):对照组和HPPM组.微波辐射持续时间15 min.结果:HPPM作用后,与辐射1次组和对照组比,辐射3次组脑组织SOD活性、GSH含量明显降低.有统计学差异,而CAT、GSH-px活性变化不明显.脾组织GSH含量在HPPM作用后均明显降低,其中HPPM辐射1次组降低程度较HPPM辐射3次组更为明显,脾组织SOD活性变化不明显.肝组织SOD活性、GSH含量在HPPM作用后均呈辐射剂量依赖性降低,CAT活性变化不明显.而心、肾组织在辐照前后各指标均无显著性变化.巨噬细胞在HPPM作用15 min后,氧耗明显增加.结论:高功率脉冲微波辐射可以引起小鼠脑、肝、睥等脏器产生氧化应激的改变,体外巨噬细胞氧耗增加.
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芪参复方煎剂对急性辐射损伤肠道一氧化氮的影响
笔者应用芪参复方煎剂治疗放射性肠炎,通过对肠组织匀浆一氧化氮(NO)含量的测定,观察复方中药对肠NO的作用及NO与放射性肠炎的关系.
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强磁场对小鼠lewis肺癌的抑制作用
本研究于1997至1998年将荷lewis肺癌小鼠置于强磁场作用之下,于不同时间观察肿瘤细胞的病理形态及其生长情况。1 材料和方法 实验性肿瘤:具有高度转移性的lewis肺癌由中国医学科学院药研所提供。 实验动物:C57小黑鼠,雄性,体质量17~19 g,由中国医学科学院动物饲养场提供。 瘤组织匀浆的制备及接种:取接种lewis肺癌10 d的C57小鼠1只,断颈处死,在洁净台内分离出瘤体。取瘤组织1 g放入5 mL生理盐水中做瘤组织匀浆,于镜下计算其瘤细胞数为每1 mL匀浆含7.5×104个瘤细胞。用4.5号针头抽取匀浆2 mL,于右股处皮下注射,第12天时可在接种部位摸到绿豆大小的游离肿块,开始记录其体积变化并对其进行磁疗。
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高脂膳食对小鼠生化及病理形态的影响
目的 高脂膳食对机体血液、组织匀浆中各种生化指标的影响,尤其是对胆固醇等脂质代谢的影响,为研究高胆固醇引起的心血管等疾病建立模型.方法 将C57BL/6j小鼠63只随机分为2组.普食组(用普通饲料饲喂)12只,雌雄各6只,高脂组(用高脂饲料饲喂)51只,雌26只、雄25只.单笼饲喂,饲喂期为67 d.观察动物体重、摄食量、比较血液以及肝、肾组织匀浆中有关脂类代谢和抗氧化方面的生化指标以及组织病理学观察.结果 高脂组血液中胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)均显著高于普食组(P<0.05);高脂组肝、肾脏组织匀浆中T-AOC、CuZn-SOD、SOD、AKP、NOS、MDA的水平与普食组相比均无统计学差异;与普食组相比,雄性小鼠摄食量差异显著(P<0.05)、体重差异不显著;病理观察可见高脂组中肝细胞空泡变性.结论 通过高脂膳食成功的建立了高胆固醇血症模型,该模型有可能在胆固醇浓度升高引起的脂质代谢异常、动脉粥样硬化、冠心病和其他代谢性疾病的研究中发挥作用.
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急性缺氧对冠状动脉内皮细胞释放ET-1、NO、PGI2的影响
冠状动脉内皮细胞能分泌多种血管收缩和舒张物质.其中缩血管物质以内皮素的缩血管作用强,且作用持久.内皮源性舒张因子主要为NO和花生四烯酸代谢产物PGI2.三种内皮源性血管活性因子均通过旁分泌方式作用于血管内皮下的平滑肌细胞,调节局部血管紧张度和血流量.在体研究表明缺氧可引起内皮素-1、NO、PGI2合成分泌改变.但在体研究时血浆及组织匀浆中ET-1、NO、PGI2的浓度改变难以反映其在血管内皮细胞形成和释放的状况.国外有关缺氧对离体冠状动脉内皮细胞合成和释放ET-1、NO、PGI2影响的研究也才刚起步,缺氧时间短暂,时相点少.国内尚未见报道.因此我们建立了离体内皮细胞缺氧模型,观察了多个时间点缺氧对冠状动脉内皮细胞释放ET-1、NO、PGI2的影响.
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镍对小鼠睾丸组织三磷酸腺苷酶活性的影响
镍为常见的工业毒物之一,长期接触会造成机体各系统、器官的损害[1].据报道,镍可致雄性生殖系统损伤[2],但其详细机制不详.本实验采用小鼠腹腔注射硫酸镍0.8,2.0,5.0 mg/kg染毒,制备睾丸组织匀浆,用钼酸胺法测定小鼠睾丸组织中Na+,K+-ATP、Ca2+-ATP酶活性,探讨镍对小鼠睾丸组织的损伤机制,为镍毒性防治提供实验室依据.
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肠道菌群及其产物在克隆病病因学中的作用
自1932年Crohn完整描述克隆病(Crohn's disease,CD)以来[1],其病因一直为研究的热点,尽管当前的研究提示有很多因素参与CD的发病机制,但仍有不少研究者将感染性因素列为致病因素之一.70年代,Mitchell[2]利用CD肠组织匀浆接种小鼠,成功地诱发了肉芽肿性炎症,认为可能有某种病原体存在于CD的肠组织中,这一发现激起了人们寻找病原体的兴趣.随着研究的深入,肠道菌群及其产物逐渐成为研究的热点,本文将就此作一综述.
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传代细胞制备抗原底物测定抗核抗体方法及其影响因素的探讨
抗核抗体(ANA)测定作为临床诊断系统性红斑狼疮及其他自身免疫的手段之一,具有十分重要的临床意义.测定ANA的方法有许多种,国内多采用间接荧光抗体实验法(HF)进行测定,底物一般要大鼠、小鼠的肝、肾组织冷冻切片;肝、肾组织印片、组织匀浆涂片以及人白细胞涂片.