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乳源致病性金黄葡萄球菌原生质体膜表而蛋白nEBPS的亚细胞定位研究
目的 克隆牛乳源致病性金黄葡萄球菌nEBPS基因,经T程菌表达得到其编码抗原纯化蛋白,制备多克隆抗体,采用间接荧光抗体法鉴定nEBPS蛋白. 方法 设计1对克隆引物,PCR扩增牛乳腺炎金黄葡萄球菌内蒙古分离株EBPS基因序列,构建重组表达质粒,转化工程菌,表达膜表面亚单位蛋白nEBPS,纯化后免疫家兔制备抗nEBPS蛋白抗体,采用间接荧光抗体法对乳源致病性金黄葡萄球菌原生质体膜表面蛋白nEBPS进行亚细胞定位. 结果 在含25 μg/ml Amp、0.015 g/ml NaCl的LB液体培养基中成功培养制备了金黄葡萄球菌原生质体.对原生质体细胞(表面)和利用0.02 g/ml NaCl高渗溶液裂解原生质体细胞离心获得的细胞膜残片进行间接荧光抗体试验,均出现特异荧光.结论 间接荧光抗体试验鉴定nEBPS蛋白为膜表面蛋白,可作为乳及乳制品金黄葡萄球菌检测和制备免疫制剂的靶抗原.
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传代细胞制备抗原底物测定抗核抗体方法及其影响因素的探讨
抗核抗体(ANA)测定作为临床诊断系统性红斑狼疮及其他自身免疫的手段之一,具有十分重要的临床意义.测定ANA的方法有许多种,国内多采用间接荧光抗体实验法(HF)进行测定,底物一般要大鼠、小鼠的肝、肾组织冷冻切片;肝、肾组织印片、组织匀浆涂片以及人白细胞涂片.
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间日疟治疗前后间接荧光抗体的变化
为探索间日疟患者治疗前后血清抗体滴度的变化及与治疗效果的关系,我们于1982年9月至1983年4月,在安徽省淮北市杨庄煤矿,对间日疟患者83例,进行血清学连续观察共6个月,现将结果总结如下.
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重庆地区弓形体感染的血清流行病学调查
弓形体病是一种人畜共患的传染病,在自然界广为分布.Kean估计[1],全世界至少有5亿弓形体感染者.获得性弓形体病可累及人体的各个器官.妊娠期间感染弓形体的孕妇可通过胎盘传染给胎儿,引起先天性弓形体病,因此,愈来愈受到医学界的重视.为了解四川省人群中弓形体的感染情况,我们于1985年10月对重庆地区的部分人群以间接荧光抗体(IFA)试验检测弓形体抗体进行血清流行病学调查,现报告如下.
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基本消灭疟疾地区人群抗体水平监测分析
为全面了解常州市现阶段疟疾传播的性质和流行态势,及早发现疟疾复燃的潜在危险因素,为调整疟疾防治措施提供科学依据,采用疟疾间接荧光抗体(IFA)检测不同人群的疟疾抗体水平,结果分析如下.
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斯氏按蚊和中华按蚊中肠免疫活性抗原的研究
目的鉴别斯氏按蚊和中华按蚊中肠具有阻断疟疾传播作用的免疫活性蛋白,并对斯氏按蚊雌蚊中肠免疫活性蛋白在中肠的分布进行定位.方法应用酶联免疫电转移印迹技术(EITB)分析斯氏按蚊雌、雄蚊和中华按蚊雌蚊中肠的免疫活性抗原;用间接荧光抗体技术(IFA)对斯氏按蚊雌蚊中肠免疫活性抗原进行定位.结果斯氏按蚊雌、雄蚊蚊中肠抗原及中华按蚊雌蚊中肠抗原与斯氏按蚊雌蚊中肠抗血清作用,分别显示9、9和6条蛋白带;斯氏按蚊雌蚊中肠壁外侧出现较强的亮绿色荧光,肠壁细胞核仅出现样弱的亮绿色荧光.结论上述三种抗原间既有相同的免疫活性蛋白带,也有各自特异的蛋白带,79、76、60、46kDa的蛋白带为斯氏按蚊雌蚊中肠特异性免疫活性蛋白带;斯氏按蚊雌蚊中肠免疫活性蛋白主要分布在中肠肠壁外侧,仅有少量分布在肠壁细胞核.
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中华按蚊和嗜人按蚊的遗传关系和传疟能力的比较研究
应用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析中华按蚊和嗜人按蚊Est、LDH和POD 3种同工酶谱,表明两蚊存在具有分类特征的酯酶带,但又是遗传关系十分相近的近缘种.中华按蚊分布全省各地,而嗜人按蚊局限于14个县(市)205个自然村.以嗜人按蚊为主要媒介的地区,疟疾发病率、疟原虫率和间接荧光抗体率均显著高于以中华按蚊为主要媒介的地区,测试其媒介能量,嗜人按蚊是中华按蚊的19倍,应是闽北山区的主要传疟媒介.
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1996~2001年桂林市54296名学生疟疾抗体调查
我们于 1996~ 2001年对本市大中专院校每年新入学的学生及部分中小学学生进行疟疾间接荧光抗体调查.
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疟疾诊断方法的研究进展
疟疾是一种严重危害人类健康的蚊媒传染病.迄今为止,显微镜镜检(厚血膜,薄血膜)仍是疟疾诊断的金标准.但是显微镜镜检做为一种诊断方法又存在一些问题.由于疟原虫形体小,形态相似,难以染色和检出,要有经验的人员才能做到正确的诊断;同时,镜检费时费力,不适合大规模样品的检测[1].七十年代初,随着免疫学技术的发展,间接荧光抗体[1,2]和ELISA[3]均很快在疟疾诊断中得到应用.然而,这些方法也有自身的缺点:首先难以区分是现在还是以前的疟疾感染;其次,疟疾流行区人群的循环抗体水平高,用血清学检测流行区个体的抗体指标意义不大.再有生产特异纯净的抗原成本较高,而且天然抗原的制备技术落后还会直接降低其特异性和敏感性.近年来,随着分子生物学技术和生物化学技术的提高,以分子(疟原虫结构成份及代谢产物)或DNA为基础的疟疾诊断方法不断涌现.现将疟疾诊断技术方面的进展做一简要的综述.
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金坛市疟疾病灶点间接荧光抗体检测结果分析
金坛市是以中华按蚊为传播媒介的间日疟流行区,1983年疟疾发病率7.78/万,达到控制疟疾标准,1987年疟疾发病率0.714/万,达到基本消灭疟疾标准.