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改良Chen-woan法体外诱导扩增大鼠树突细胞
树突细胞(dendritic cells,DC)参与多种自身免疫疾病、肿瘤、免疫缺陷病及某些炎症反应的病理过程,体外培养、扩增和诱导分化获得足够数量的功能DC意义重大.本实验建立了培养大鼠骨髓来源DC的简便有效方法.
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大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系
目的:探索成体大鼠的骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离、体外培养方法,观察采用不同的换液频度与细胞增生和生长的关系,为其应用提供实验依据.方法:从大鼠股骨获取骨髓,采用梯度离心的方法进行分离,在含10 mL/L胎牛血清的DMEM中常规培养,以MTT法检测不同的时间换液时细胞的生长曲线,并用碱性磷酸酶(AKP)检测的方法对分离的细胞进行鉴定.结果:采用梯度离心方法分离的骨髓间质干细胞的纯度较高,细胞活性佳,AKP染色为强阴性.首次换液后,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生,原代长满培养瓶底比每隔2-3 d换液一次平均提前2 d.结论采用梯度离心的方法分离可获得纯度较高的骨髓间质干细胞,是简单易行的分离方法,每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生和形成形态均一的细胞集落.
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辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞p27蛋白表达的不同影响
目的:观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC)p27蛋白表达的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物。
方法:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀(0.01~10μmol/L)培养24 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定FITC结合的植物凝集素(FITC-UEA-Ⅰ)和DiI结合的乙酰化低密度脂蛋白(Di I-acLDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC, Western blot检测p27蛋白的表达。 -
恒磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的影响
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两种不同的方法诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的实验研究
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骨髓基质细胞成脂肪分化的研究进展
实验与临床研究证明,骨髓基质细胞成脂肪分化与骨质疏松存在着不可忽视的关系.在去卵巢或类固醇诱发的骨质疏松的动物模型均发现,骨量的丢失伴有骨髓腔内的脂肪细胞的数目大大增加.各种原因导致的骨质疏松患者中,骨髓腔内的脂肪细胞与松质的骨量成反比.对成纤维细胞克隆形成单位(CFU-Fs)的分析表明,9月龄大鼠骨髓中的基质干细胞数量明显少于6月龄大鼠[1],提示了骨髓基质细胞数量的减少和髓内脂肪细胞的增多存在某种关系.
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血管平滑肌细胞培养液和膀胱匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化
我们利用已经分化成熟的血管平滑肌细胞(VSMC)培养液和膀胱组织匀浆上清对骨髓间充质干细胞(MSC)体外诱导分化进行了研究,现报告如下.
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神经内科学重要新闻
经静脉骨髓移植治疗缺血性脑卒中的实验研究Stroke,2001;32:1005报道:将大鼠骨髓成熟基质细胞事先取出后进行培养,在将大鼠制成缺血性脑卒中模型后,将已进行化学标记的培养细胞分别于卒中后第1 d和第7d经静脉回输大鼠各1次,以未进行骨髓移植的卒中大鼠作对照,分别于卒中前及卒中后第1、7、35d观察两组行为学和免疫组化结果的差异.
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骨髓间充质干细胞及基因治疗心血管疾病的研究进展
1骨髓间充质干细胞的生物特性骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中,除造血干细胞外的另一类早期前体细胞;其来自基质,也称骨髓基质干细胞.1987年Friedenstein等[1]在分离大鼠骨髓成骨祖细胞时,首次从骨髓基质中鉴定出一种非造血系成体多能干细胞,并实验证实在体外这类细胞能分化成各种间质细胞,包括成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞和肌肉细胞等,因而称之为MSCs.
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糖基化终末产物对大鼠骨髓来源内皮祖细胞增殖、凋亡和管腔形成的影响
大量证据表明,内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)构成重要的内生系统,以保持血管内皮的完整性和血管内环境的稳定,而EPCs数量的减少也可以预测心血管疾病的发生.研究显示,包括冠状动脉疾病、心衰、高血压和糖尿病等心血管病患者的EPCs数量较少,功能降低.因此,对氧化应激导致EPCs数量和功能异常的机制研究将为探讨心血管疾病的发病机制提供独特的视角,并为临床治疗提供新的靶点.
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骨髓神经嵴源细胞对受损周围神经的修复作用
目的:探究成体大鼠骨髓中神经嵴源细胞的获取,及对受损周围神经的修复作用。方法:富集骨髓神经嵴源细胞间充质球,分离单克隆球,检测长期增殖能力和神经嵴标志的表达,检测向施旺细胞定向分化的能力和体外成髓鞘潜能。体外构建骨髓神经嵴源细胞为支持细胞的组织工程化神经移植物,桥接大鼠10 mm坐骨神经缺损,12周后进行行为学分析、电生理检测、荧光金逆行示踪试验、肌肉和神经的组织学观察。体外收集骨髓神经嵴源细胞的条件培养基,处理氧糖剥夺损伤的大鼠背根节神经元,检测神经元突起的生长变化和细胞活力改变。结果:骨髓神经嵴源细胞组织工程化神经移植物具有良好的神经修复作用,其条件培养基可改善受损背根节神经元的活力和突起生长。结论:神经嵴源细胞可从骨髓获取并应用于修复周围神经损伤,是潜在的自体细胞来源。
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定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞
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大鼠外周血及骨髓来源树突状细胞的培养及鉴定
目的 培养及鉴定大鼠外周血及骨髓来源树突状细胞(DC).方法 分离大鼠外周血及骨髓单个核细胞,加入20 ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、10 ng/mL白细胞介素4(IL-4)培养10 d.流式细胞术检测CD80、CD86、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、整合素分子OX62的表达确定未成熟DC.成熟的DC在加入以上剂量的GM-CSF、IL-4处理基础上,再加入4 μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)处理,流式细胞术检测CD80、CD86、MHCⅡ、OX62的表达,光镜及透射电镜检测细胞形态.结果 流式细胞术检测结果表明,外周血来源的DC OX62表达较高、骨髓来源的DC的OX62表达较低,经TNF-α诱导后,外周血来源的成熟DC和骨髓来源的成熟DC的OX62水平均明显增加.两种方法提取的DC光镜下形态无差别,电镜下可见外周血来源的成熟DC的突起明显多于骨髓来源的成熟DC.结论 外周血更容易获得和诱导高纯度的成熟DC.