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电泳法检测肝和血清中醇脱氢酶同工酶
目的:建立琼脂糖凝胶电泳法检测人血清醇脱氢酶(alcoholdehydrogenase isoenzymes ADH EC 1.1.1.1)同工酶.方法:采用自制琼脂糖凝胶板,摸索实验条件,在pH 8.6,74 mmol/L巴比妥电泳缓冲系统中进行20 mA、20 min电泳,可清晰地分离出ADH同工酶三条区带.结果:检测了67例患者血清ADH总活性0.013-0.021 Kat/L,同工酶ADH Ⅰ占ADH总活性0.01-0.30,ADHⅡ占ADH总活性0.12-0.31,ADHⅢ占ADH总活性0.39-0.80.检测了10例人健康肝组织匀浆的ADH总活性为0.136-0.196Kat/L,同工酶ADH Ⅰ占总活性的0.07-0.25,同工酶ADHⅡ占总活性的0.19-0.27和同工酶ADHⅢ占总活性的0.56-0.73.结论:正常人血清中ADH酶活性很低,为0-1.8×10-3 Kat/L,其同工酶不易被检测出.而肝脏组织中含有大量ADH酶活性,当肝脏受到严重损伤时,ADH即从肝细胞内逸出,进入血液,使血清中ADH酶活性明显升高,同时通过琼脂糖电泳对其同工酶的检测可测出三条区带,帮助临床进一步了解肝细胞损伤程度,对患者预后和病程的监测具有一定的临床意义.
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肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶及其同工酶的变化
目的:探讨肝病患者血清酸性α-醋酸萘酯酶(acid alphanaphthyl aetate esterase,α-ANAE)及其同工酶的临床应用价值.方法:通过比色法测定血清ANAE总活性.ANAE同工酶的检测采用琼脂糖凝胶电泳法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法.结果:肝病患者包括肝炎、肝硬化及肝癌血清ANAE含量均低于对照组,肝硬化组及肝癌组明显低于肝炎组.通过琼脂糖凝胶电泳法可以在肝病患者血清中检出两种ANAE同工酶异常谱形.聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出更多ANAE同工酶谱带.结论:血清ANAE含量测定可作为评价肝细胞变性坏死、肝脏合成功能异常的一项血清学指标.肝病患者血清中检出的异常ANAE同工酶谱带性质、组成及在临床应用上的价值还有待于进一步探讨.
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040 Graves病与染色体2q33上的CTLA-4基因
[英]/Heward JM//J Clin Eadocrinol Metab.-1999, 84.-2398～2401 本研究以大样本病例一对照研究和家族为基础的遗传不平衡试验(TDT)，研究细胞毒性T淋巴细胞相关-4(CTLA-4)基因外显子1中49位的A／G多态性在英国高加索Graves病患者中的作用及此多态性的基因型与Graves病表现型(甲亢严重程度)的关系。 材料与方法 研究对象为就诊于英国多个甲状腺诊所的高加索Groves病患者(n=379)，对照为无自身免疫性疾病病史的志愿者(n=364)。具备以下条件2项以上者诊为Graves病：①弥漫性甲状腺肿。②抗微粒体抗体，抗甲状腺球蛋白抗体或抗促甲状腺素(TSH)受体自身抗体阳性。③存在甲亢眼病。共有179个家族参加了TDT分析。取Graves 病先证者、双亲、未患病同胞的全血10 ml，提取DNA行基因型分析；所有未患病的亲属均测试其甲状腺功能和甲状腺自身抗体，以除外亚临床自身免疫性甲状腺疾病；对部分Graves病患者作CTLA-4基因型和甲亢严重程度[血清游离T4(FT4)浓度]的相关性分析。基因型测定采用PCR琼脂糖凝胶电泳法。运用χ2检验及方差分析对研究结果进行统计学分析。 结果 共测得379名病例和363例对照中的CTLA-4基因外显子中第49位A/G的基因型。Graves病患者此位点G等位基因的频数显著高于健康对照；在此位点两组的AA、AG和GG基因型的分布显著不同(χ2=21.7，Pc＜0.00003)；Graves病患者呈AA型的频率显著低于健康对照(32.1％比45.1％，χ2=12.74，Pc＜0.001)，呈GG型的显著增加(17.3％比7.8％，χ2=6.64，Pc=0.02)。179个家族中的96个家族进行了此位点等位基因的遗传分析，Graves病受累亲属中CTLA-4基因外显子1第49位G等位基因的频率高于未受累亲属(57.9％比43.8％)，而A等位基因低于未受累者(42.1％比 56.2％)，差异显著(χ2=5.7，P=0.025)。Graves病患者中247名的血清FT4浓度有效，且血清FT4 浓度随患者甲状腺肿大的程度(F=18.18，P＜0.00005)和吸烟状况(F=5.39，P=0.021)而改变，并与CTLA-4基因外显子第49位的基因型显著相关(F=3.26，P=0.04)，GG型患者FT4 浓度高(X=62.5pmol／L)，其次为AG型(X=54.0 pmol／L)，AA型患者低(X=50.9 pmol／L)。 结论 此研究结果说明CTLA-4基因在Graves病发病中起一定作用，其外显子1中的A/G多态性与Graves病的严重程度相关。(付建芳摘 姬秋和校)
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糖化血红蛋白自动化琼脂糖凝胶电泳法检测
糖化血红蛋白的水平与测定前体内2个月左右的血糖水平有关,因此,可作为控制糖尿病的指标,同时还是评价治疗效果的一项指标[1].HbA1C是糖化血红蛋白的重要亚组分,目前测定HbA1C的方法有比色法、层析法、微柱法、等电聚焦法、毛细管电泳法等多种,其中高效液相色谱(HPLC)法是HbA1C测定的参考方法.而自动化琼脂糖凝胶电泳法操作简便、灵敏度高、适于低浓度蛋白的分析[2].本文参照文献[2]对样本中的HbA1C检测进行了探讨.
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改良溴化乙锭染色法快速检测基因组DNA
目的 探讨一种耗时少、检出率高的基因组DNA检测方法.方法 采用改良的溴化乙锭染色法检测提取到的样本基因组DNA.采用分光光度仪进行敏感性验证,聚合酶链式反应确认该方法能否用来检测PCR产物.结果 改良的溴化乙锭染色法显著减少基因组DNA的上样量,提高基因组DNA的检测敏感性,节省操作时间,无需loading buffer,并可粗略估计基因组DNA浓度.结论 改良的溴化乙锭染色法只适用于初筛样本基因组DNA,不能用于评估DNA片段的长度.
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阻断羟自由基对DNA的断链作用研究
为初步筛选体外DNA氧化断链的阻断性保护剂,采用琼脂糖凝胶电泳法观察比较加入保护剂前后的DNA断裂情况,由电泳图像可以看出:锗-132对羟自由基DNA断链作用有明显的影响,能维护DNA完整性,防止氧化断链.
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高效液相色谱法与琼脂糖电泳法检测β-地中海贫血携带者HbA2结果的比较
目的 比较高效液相色谱法(HPLC)与琼脂糖电泳法检测β-地中海贫血携带者HbA2的结果,探讨二者筛查β-地中海贫血的灵敏性和可靠性.方法 产前筛查疑似β-地中海贫血携带者154例,同时检测β-地中海贫血基因、HbA2.HbA2分析采用法国Sebia琼脂糖凝胶电泳系统和HPLC分析系统同时进行分析.β-地中海贫血基因诊断采用反向点杂交法进行17种常见突变基因检测,以基因诊断结果作为金标准分别对HPLC分析仪和琼脂糖电泳的HbA2结果进行评价分析.结果 在154份临床样本中,基因诊断为阳性的样本为65例;以HbA2>3.5%作为诊断β-地中海贫血携带者的佳临界值,琼脂糖电泳共筛查出57例阳性,与基因诊断符合率为87.6%;HPLC分析共筛查出63例阳性,与基因诊断符合率为96.9%;琼脂糖电泳与HPLC分析仪诊断β-地中海贫血的灵敏性、特异性分别为84.6%、97.7%、96.9%及98.9%.HPLC分析仪阳性符合率、灵敏性明显高于琼脂糖电泳,差异有统计学意义(P<0.05);而HPLC特异性也稍高于琼脂糖电泳法,但比较无显著差异(P>0.05).结论 HPLC筛查β-地中海贫血与基因诊断有较高的符合率,是一种筛查β-地中海贫血灵敏性、特异性和准确度都较高的理想方法.
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细胞凋亡率检测方法的探索
目的 探索可用于全面准确评价细胞凋亡率的检测技术.方法 选取地塞米松诱导胸腺细胞凋亡模型,用流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法对处于不同凋亡阶段的胸腺细胞凋亡率进行检测分析.结果 流式细胞分析对于早期凋亡胸腺细胞的检测不仅具有高度灵敏性,而且可有效区分凋亡与坏死细胞,但对于凋亡晚期细胞膜严重受损乃至破碎的细胞,单纯流式细胞仪检测不能有效反映真实凋亡率;借助琼脂糖凝胶电泳法可检测破碎后释放到胸腺组织或培养基内的DNA碎片;当凋亡严重导致大量细胞破碎降解时,对样本进行细胞计数比较亦有重要参考价值.结论 为全面和准确地评估细胞凋亡率,需选择多种检测方法结合分析,细胞学及寡核苷酸片段检测技术是一个相当不错的选择.
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琼脂糖凝胶电泳法测定糖化血红蛋白及其临床应用
目的采用琼脂糖凝胶电泳的方法测定糖化血红蛋白(HbAlc),了解HbAlc与空腹血糖的关系.方法取正常人及糖尿病人EDTA-K2抗凝全血232例,制成血红蛋白溶液,使用法国sebia公司sebia HYDRASYS电泳仪及光密度计扫描仪,用琼脂糖凝胶进行电泳分离和光密度计扫描定量测定HbAlc;在全自动生化分析仪上用己糖激酶法测定空腹血糖.结果对照组的HbAlc平均值(%)为;±s=5.41±0.94,血糖的平均值(mmol/L)为;-x±s=4.92±0.87;糖尿病人的HbAlc平均值(%)为-x±s=11.06±4.3,血糖的平均值(mmol/L)为-x±s=10.86±3.04,P＜0.01,血糖值与HbAlc值有显著相关性,r=0.985,回归方程Y=1.1015x+1.815.结论该方法标本用量少,分辨率高,重复性好,结果不受温度及胎儿血红蛋白的影响,HbAlc可作为糖尿病控制的指标.
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荧光素和地高辛标记探针在聚合酶链反应-微孔板杂交检测TTV DNA中应用比较
目前聚合酶链反应(PCR)扩增产物常规检测采用琼脂糖凝胶电泳法,其敏感度、特异性均不能满足临床要求.对PCR产物进行限制性内切酶酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE或PCR-SS-CP)及PCR产物直接测序,虽可特异性检测PCR产物,但因操作繁杂,且需特殊试剂和仪器,无法在临床普遍开展.刊用特异性探针与扩增产物杂交,引用微孔板杂交酶呈色技术,由于其特异性和敏感度高而被应用于临床.我们采用荧光素和地高辛分别标记探针,建立荧光素-抗荧光素、地高辛-抗地高辛酶偶联系统微孔板杂交酶呈色技术检测TTV DNA的方法,并对其检测效果进行了比较.
