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结构域
结构域(domain)是指蛋白质中可以具有独立三级结构的部分,通常由一个基因外显子编码,并可具有特定的功能.
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逆转录病毒载体介导反义K-ras基因治疗胰腺癌的实验研究
目的:分离及克隆胰腺癌细胞基因组中K-ras基因片段,构建含反义K-ras癌基因逆转录病毒载体并探讨其对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHI和EcoRI位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3、PC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1、4及侧翼序列,将目的基因克隆入逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒,经PT-67细胞包装后获得重组逆转录病毒.将该重组逆转录病毒转染上述细胞,经G418筛选获得稳定细胞,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增生、凋亡和对胰腺癌p21蛋白表达;建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,观察反义K-ras基因体内治疗效果.结果:成功构建含反义K-ras基因的重组逆转录病毒载体.反义K-ras基因抑制胰腺癌细胞增生,诱导细胞凋亡、下调K-rasmRNA和P21蛋白表达,并抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长.结论:反义K-ras基因可使胰腺癌细胞增生受到抑制,并可诱导细胞凋亡和下调K-rasmRNA和P21蛋白表达.
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散发性大肠癌中hMSH2基因突变的意义
目的:检测散发性大肠癌中hMSH2基因的突变情况,探讨hM-SH2基因突变在散发性大肠癌发生发展过程中的作用.方法:用PCR-SSCP方法检测33例刁肠癌组织中hMSH2基因外显子5、15的突变情况,并将所得资料进行x2检验.结果:33例肿瘤组织中共检出3例hMSH2基因的突变,突变率为9.1%(3/33);x2检验表明,肿瘤组织的不同组织分化程度及临床病理分期之间的hMSH2基因突变率差异不显著(P>0.05).结论:hMSH2基因突变与肿瘤的组织分化程度和临床病理分期无关,hMSH2基因突变可能是大肠癌发生发展过程中的早期事件.
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2型糖尿病患者GLUT4的基因突变研究
胰岛素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)发病机制的重要因素.而胰岛素受体后缺陷在IR的环节中意义尤为突出.其中外周组织对葡萄糖摄取、利用的减少是受体后IR的主要原因.由于葡萄糖的跨膜转运是外周组织葡萄糖利用的主要限速步骤,而这一过程是由特殊转运蛋白-GLUT4介导的,因此,GLUT4被认为是IR的重要候选基因.我们对220例T2DM患者和150名健康对照者的GLUT4基因外显子4a进行了筛查,以探讨该基因突变在T2DM发病中的作用.
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2型糖尿病患者中脂联素基因多态性的研究
脂联素与肥胖、胰岛素抵抗(IR)和2型糖尿病(T2DM)有密切关系.国外研究发现[1-4],脂联素基因外显子2 存在T45G多态性,并证实该多态性与肥胖、IR和T2DM有关.而国内尚未见相关报道.本研究通过筛查天津地区汉族正常人和T2DM患者的脂联素基因外显子2 T45G基因型并检测有关生化指标,分析此种多态性与T2DM及其糖脂代谢的相关性.
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IgE低亲和力受体基因G/A多态性与支气管哮喘易感性
支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见病,全世界约有1亿多患者.在我国哮喘的发病率约1%~4%,全世界范围内哮喘发病呈逐年增加趋势[1].由于发病机制尚未完全阐明,对哮喘的防治存在很大困难.大量研究表明,哮喘发病与遗传因素和环境因素密切相关.近年来有关哮喘研究的一个重要进展是发现IgE低亲和力受体(CD23,FcεRⅡ).FcεRⅡ存在于B细胞、激活的单核细胞、嗜酸粒细胞、血小板中.部分T细胞上,为一条单链,具有调节IgE生成和B细胞分化、抗原递呈等功能.其在哮喘发病中的作用使人们自然地把目光转到其编码基因上.为此,我们对湛江地区哮喘人群和正常人群中该基因外显子9进行了多态性检测.
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非小细胞肺癌Ⅰ期脆性组氨酸三联体基因蛋白表达研究
脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad,FHIT)位于3p14.2,跨越人类染色体常见脆性位点FRA3B[1].近年研究发现,人类肺癌、胃肠道癌、乳腺癌及头颈部癌中存在FHIT基因及其转录产物的异常,多数学者认为FHIT可能是肿瘤抑制基因[2,3].FHIT是组氨酸三联体(histidine triad,HIT)基因家族成员之一,由10个外显子组成,其中第5~9外显子为编码区,其编码的蛋白产物(Fhit)可能的功能之一为具有多磷酸二腺苷水解酶活性,尤以AP3A为适底物,该活性依赖于FHIT基因外显子(exon)E8编码的保守性组氨酸三联体结构[4].FHIT基因异常转录可使其编码的蛋白质Fhit在细胞中不表达,作为AP3A水解酶,Fhit功能失活使AP3A或类似复合物在细胞中水平升高,从而引起细胞癌变.我们通过免疫组化方法对62例Ⅰ期NSCLC进行检测,以期进一步探讨Fhit蛋白缺失与NSCLC发病及病理类型的关系.
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胃间质瘤中p16基因缺失和突变的研究
本研究应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCRSSCP)的方法对胃问质瘤(gastric stromal tumors,GST)中p16基因外显子2的缺失和突变进行检测,目的在于探讨GST中p16基因外显子2缺失和突变的情况及其临床意义.
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大龄儿童尼曼-匹克病1例
患者 男性,14岁3个月,因“发现血小板减少8+个月”于2013-08-29收入四川大学华西第二医院治疗。病史采集:患者于8+个月前在当地医院体检时发现 PLT 减少,外周血 PLT 计数为8.0×109/L,尚未伴出血表现,门诊予输注 PLT 制剂后PLT 计数恢复至正常,此后未进行复查及治疗。入院前7 d,因入学体检查血常规示 PLT 计数为15.0×109/L,遂收入本院。入院查体:无特殊面貌,全身无出血表现,脾脏因腹部脂肪层过厚触诊不清楚,脊柱及四肢无畸形,活动自如,步态平稳,智力、视力及听力正常,肌张力正常。辅助检查:血常规检查结果示WBC 计数为8.3×109/L,中性粒细胞绝对计数为6.2×109/L,Hb 水平为158 g/L,PLT 计数为15.0×109/L。血脂检查结果示 HDL 水平为0.65 mmol/L,其余指标正常。胸骨骨髓穿刺结果符合 PLT 减少骨髓象,粒/红倒置,见组织细胞吞噬血细胞现象,全血片检查可见海蓝组织细胞和尼曼-匹克细胞(图1)。腹部彩色多普勒超声检查结果示脾脏肋间厚约为7.6 cm,肋下厚约为10.5 cm,其右缘达腹中线右侧约为4.6 cm,脾脏明显长大,胆囊结石。胸部 X 射线摄片结果未见异常。眼底检查结果未见樱桃红斑。入院诊断:尼曼-匹克病(Nimannn-Pick′s disease,NPD)。因脾大、脾功能亢进,经专业组讨论并完善基因检测后转入小儿外科行“脾脏切除活检术”。术后脾脏组织病理学检查结果示:镜下见脾大,脾红髓扩大、白髓存在,红髓中充满细胞质丰富、有多量细微空泡的组织细胞,另可见散在巨核细胞,淋巴结髓窦内也可见上述改变,切除脾组织病理学诊断为:尼曼-匹克病的脾脏改变。家族基因检测示:①患者基因测序结果为:SMPD1基因外显子1发生c.4_7delC移码突变;SMPD1基因外显子2发生 c.995C > A (Pro332 His)错义突变(图2)。②其母亲基因测序结果为:SMPD1基因外显子1发生 c.4_7delC 移码突变。③其父亲及祖母基因测序结果为:SMPD1基因外显子2发生 c.995C>A (Pro332 His)错义突变。上述家族基因检测结果符合遗传学规律。患者入院后予预防出血、维生素 C、E 治疗,并输注辐照机采 PLT 补充 PLT,PLT 计数恢复至正常后出院。
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产前诊断除外肌营养不良蛋白基因外显子44移码突变一例
先证者,男,1+岁,临床诊断为杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD).该病发生主要原因是编码肌营养不良蛋白(dystrophin)基因的大片段缺失或突变[1].首先采用多重聚合酶链反应技术针对先证者及其父母的肌营养不良蛋白基因26个外显子(包括3、4、6、8、12、1 3、16、17、19、32、34、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、60、Pm、pb)进行检测,未见上述外显子缺失.进而采用多重连接依赖的探针扩增(multiplex ligation-dependcnt probe amplification,MLPA)法检测肌营养不良蛋白基因79个外显子,均未见缺失或重复.终经全基因测序发现先证者第44号外显子一处移码突变:NM_004006.1:c.6391_6392delCA(p.Gln2131AsnfsX3),而先证者父母的44号外显子同步测序均未见异常,且此突变未见报道.通过寡核苷酸多态性数据库(www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP)、国际人类基因组单体型图计划(www.hapmap,org)和“华大基因千人基因组计划( www.genomics.cn)”中72个中国人样本的数据分析排除多态可能,同时经PDB数据库(www.pdb.org)蛋白功能预测可能造成膜蛋白结构域的改变,因此考虑此突变为新发或生殖腺嵌合造成的致病突变.
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p14ARF基因改变及其蛋白表达与脑胶质瘤发生发展的相关性研究
一、材料与方法脑胶质瘤石蜡包埋标本31例,包括Ⅰ、Ⅱ级星形细胞瘤8例,Ⅲ级间变性星形细胞瘤10例,Ⅳ级胶质母细胞瘤13例.另取5例脑挫裂伤组织作为正常对照.应用一种新型直接原位PCR方法检测p14ARF基因外显子1β[引物(S)5'-TCCCAGTCTGCAGTTAAGGG-3',(AS)5'-ACCACGAAAACCCTCACTCC-3'(扩增产物174bp)],并对该方法进行优化.采用SP免疫组化法检测p14ARF蛋白.
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1型糖尿病患者及其父母细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因外显子1A/G49多态性的研究
目前在多个种族人群中发现细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)基因外显子1的点突变(49位点A/G)与1型糖尿病(T1DM)发病相关[1,2].本研究检测汉族人T1DM患者及其父母的CTLA-4基因外显子1的49位点基因型,探讨此基因多态性与T1DM的关系.
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040 Graves病与染色体2q33上的CTLA-4基因
[英]/Heward JM//J Clin Eadocrinol Metab.-1999, 84.-2398~2401 本研究以大样本病例一对照研究和家族为基础的遗传不平衡试验(TDT),研究细胞毒性T淋巴细胞相关-4(CTLA-4)基因外显子1中49位的A/G多态性在英国高加索Graves病患者中的作用及此多态性的基因型与Graves病表现型(甲亢严重程度)的关系。 材料与方法 研究对象为就诊于英国多个甲状腺诊所的高加索Groves病患者(n=379),对照为无自身免疫性疾病病史的志愿者(n=364)。具备以下条件2项以上者诊为Graves病:①弥漫性甲状腺肿。②抗微粒体抗体,抗甲状腺球蛋白抗体或抗促甲状腺素(TSH)受体自身抗体阳性。③存在甲亢眼病。共有179个家族参加了TDT分析。取Graves 病先证者、双亲、未患病同胞的全血10 ml,提取DNA行基因型分析;所有未患病的亲属均测试其甲状腺功能和甲状腺自身抗体,以除外亚临床自身免疫性甲状腺疾病;对部分Graves病患者作CTLA-4基因型和甲亢严重程度[血清游离T4(FT4)浓度]的相关性分析。基因型测定采用PCR琼脂糖凝胶电泳法。运用χ2检验及方差分析对研究结果进行统计学分析。 结果 共测得379名病例和363例对照中的CTLA-4基因外显子中第49位A/G的基因型。Graves病患者此位点G等位基因的频数显著高于健康对照;在此位点两组的AA、AG和GG基因型的分布显著不同(χ2=21.7,Pc<0.00003);Graves病患者呈AA型的频率显著低于健康对照(32.1%比45.1%,χ2=12.74,Pc<0.001),呈GG型的显著增加(17.3%比7.8%,χ2=6.64,Pc=0.02)。179个家族中的96个家族进行了此位点等位基因的遗传分析,Graves病受累亲属中CTLA-4基因外显子1第49位G等位基因的频率高于未受累亲属(57.9%比43.8%),而A等位基因低于未受累者(42.1%比 56.2%),差异显著(χ2=5.7,P=0.025)。Graves病患者中247名的血清FT4浓度有效,且血清FT4 浓度随患者甲状腺肿大的程度(F=18.18,P<0.00005)和吸烟状况(F=5.39,P=0.021)而改变,并与CTLA-4基因外显子第49位的基因型显著相关(F=3.26,P=0.04),GG型患者FT4 浓度高(X=62.5pmol/L),其次为AG型(X=54.0 pmol/L),AA型患者低(X=50.9 pmol/L)。 结论 此研究结果说明CTLA-4基因在Graves病发病中起一定作用,其外显子1中的A/G多态性与Graves病的严重程度相关。(付建芳摘 姬秋和校)
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成人及儿童急性白血病p16基因失活的对比研究
我们应用PCR、DNA单链构象多态性(SSCP)及DNA序列分析技术对30例成人急性白血病(AL)及53例儿童AL患者p16基因外显子1,2进行纯合子缺失和点突变研究,旨在对比分析成人与儿童AL p16基因的失活情况及其与AL的发生、发展、预后的关系.
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散发性乳腺癌患者BRCA1基因突变的分析
乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤之一,近年来,其发病率在我国逐渐上升并呈年轻化趋势.大量研究已经证实该疾病与雌激素、多种癌基因、抑癌基因相关.其中,5%~10%的乳腺癌和遗传易感性相关,乳腺癌易感基因[1](breast cancer susceptibility gene,BRCA)是近年来研究较热的抑癌基因之一,于1994年由Miki首先分离克隆出来,是早被发现的与家族性乳腺癌和卵巢癌相关的基因[2].研究显示BR-CA1基因突变是遗传性早发性乳腺癌的易感基因,80%的遗传性乳腺癌家族中发现有该基因突变[3],但在散发性乳腺癌中国汉族患者中,BRCA1基因突变较罕见.本研究选取BR-CA1基因外显子2、11、20各1对引物,应用聚合酶链反应(PCR)及直接测序方法检测43例经病理学确诊的散发性乳腺癌中国汉族患者的基因突变情况.报告如下.
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噬血细胞综合征4例报告
噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis,HLH)又称噬血细胞综合征(hemophagocytic syndrome,HPS)是儿童期少见但病死率极高的疾病,是由于淋巴细胞和组织细胞过度增生活化,细胞因子风暴形成引起多器官炎症反应而导致的临床综合征。主要表现为发热、肝脾肿大和血细胞减少,有的还伴有严重的神经系统症状。按照病因可分为原发性和获得性两大类。本文回顾性分析2012年2-12月就诊于本院并临床诊断为HLH的4例患儿的临床、预后,以及采用聚合酶链反应(PCR)结合直接测序法检测穿孔素基因外显子编码区突变的结果。
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妊高征患者胰岛素受体基因外显子17的序列分析
已有研究表明,胰岛素抵抗与妊高征存在关联:妊高征患者在孕中期即出现高胰岛素血症,血胆固醇水平升高[1];空腹血胰岛素水平升高,与收缩压、舒张压成正相关[2].目前,对妊高征胰岛索抵抗的发生机制国内外研究较少,且均从受体水平进行研究,对妊高征时胰岛素抵抗的分子机制研究未见报道.由于胰岛素受体在介导胰岛素作用中起着中心作用,故胰岛素受体基因发生突变时可导致胰岛素抵抗,已在某些伴有极度胰岛素抵抗的遗传性疾病中得到证实.
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雄激素受体基因剪接受点突变G3346→T引起一例完全型雄激素不敏感综合征
目的探索完全型雄激素不敏感综合征(complete androgen insensitivity syndrome,cAIS)发病的分子机制,并研究雄激素受体(androgen receptor,AR)结构、功能及其与临床表现的关系.方法用银染聚合酶链反应-单链构象多态性(poly merasechain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)及PCR产物直接测序的方法,对1例完全型AIS患者AR基因外显子B~H分别进行了研究.结果外显子F片段在SSCP分析时有泳动变位,经测序,突变发生在内含子5与外显子F交界处G3346→T.结论为首例发现的AR基因剪接受点突变,GU-AG的高度保守对于维持AR的正常功能非常重要.[全文刊登于中华医学遗传学杂志2001,18(1):14]
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云南汉族人群和系统性红斑狼疮患者中补体C2Ⅰ型缺失的研究
补体C2缺失与风湿性疾病相关,并可以增加其对感染的易感性.已经发现C2有两种类型的缺失[1],Ⅰ型缺失是由于在C2基因外显子6处28bp缺失导致C2蛋白质不能合成.Ⅱ型缺失是由于一错义突变导致C2蛋白质能够合成但不能分泌[2].在C2缺失患者,10%~30%有SLE的表现[3].而我们对C2基因Ⅰ型缺失在云南汉族人群的分布及其与SLE的相关性研究结果与此差异较大.
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角膜炎、鱼鳞病、耳聋综合征一例及GJB2基因突变研究
目的 探讨角膜炎、鱼鳞病及耳聋综合征患者临床特征和GJB2基因突变情况,为该病临床与基因诊断提供依据.方法 收集1例角膜炎、鱼鳞病及耳聋综合征患者的临床资料,提取患者及家族成员的外周血DNA,用PCR扩增GJB2基因外显子2及其附近的剪切点,DNA直接测序法进行基因突变检测.结果 该患者存在血管化角膜炎、鱼鳞病及先天性耳聋三联征的典型临床特征,检测到GJB2基因中核苷酸序列外显子2第148位碱基由G突变为A,导致编码的连接蛋白Cx26第50位的天冬氨酸转换成天冬酰胺(D50N).其未患病的母亲及哥哥未检测到突变位点.结论 GJB2基因突变(D50N)可能是引起鱼鳞病、角膜炎及耳聋综合征患者临床表型的原因.