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逆转录病毒载体介导反义K-ras基因治疗胰腺癌的实验研究
目的:分离及克隆胰腺癌细胞基因组中K-ras基因片段,构建含反义K-ras癌基因逆转录病毒载体并探讨其对胰腺癌细胞增生、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHI和EcoRI位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3、PC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1、4及侧翼序列,将目的基因克隆入逆转录病毒载体pLXSN中,构建重组质粒,经PT-67细胞包装后获得重组逆转录病毒.将该重组逆转录病毒转染上述细胞,经G418筛选获得稳定细胞,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增生、凋亡和对胰腺癌p21蛋白表达;建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,观察反义K-ras基因体内治疗效果.结果:成功构建含反义K-ras基因的重组逆转录病毒载体.反义K-ras基因抑制胰腺癌细胞增生,诱导细胞凋亡、下调K-rasmRNA和P21蛋白表达,并抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生长.结论:反义K-ras基因可使胰腺癌细胞增生受到抑制,并可诱导细胞凋亡和下调K-rasmRNA和P21蛋白表达.
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选择性环氧合酶-2抑制剂CelebreX对胰腺癌PGE2和血管内皮因子表达的影响
目的:观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对裸鼠胰腺癌PC-3细胞株移植瘤生长和肿瘤组织VEGF和PGE2表达的影响.方法:观测Celebrex对移植瘤生长的影响,并采用放射免疫测定(RIA)和酶联免疫黏附测定(ELISA)检测裸鼠移植瘤组织中PGE2和VEGF的表达.结果:治疗组移植瘤生长曲线较对照组明显低平.对照组移植瘤近似体积为0.438 cm3,治疗组为0.212 cm3(抑瘤率为51.6%,P<0.05).PGE2表达,对照组为66±12 ng/g,治疗组为29±5 ng/g,两组间表达有非常显著性(P<0.01).VEGF表达,对照组1.11±0.11μg/g,治疗组0.66±0.11μ/g,VEGF抑制率为40.6%,两组间有显著性差异(P<0.05).结论:COX-2可能参与了肿瘤新生血管的生成,而PGE2可能在该过程中起着重要的介导作用,选择性COX-2抑制剂Celebrex则具有抑制肿瘤生长和对抗肿瘤新生血管生成的作用.
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奥曲肽对胰腺癌组织SST2R和SST2RmRNA表达的影响
目的探索SD大鼠胰腺癌组织SST2R及SST2R mRNA的表达以及外源性生长抑素类似物善得定治疗后其表达量的变化.方法采用二甲基苯丙蒽(DMBA)诱导鼠胰腺癌模型.将实验大鼠随机分为胰腺癌组(A组)、胰腺癌治疗组(B组)、模型制作后未形成胰腺癌的假阳性组(C组),以及正常大鼠组(D组).在善得定(10μg/kg,每6 h 1次)治疗前和治疗后的3 d、7 d、14 d,分别取各组胰腺组织标本.分别采用放射免疫法、逆转录聚合酶链法(RT-PCR)分析各组胰腺癌组织SST2R及SST2RmRNA的表达.结果A、B组SST2R及SST2R mRNA的表达比C、D组显著减少(P<0.05),尤以善得定治疗后的B组减少更为明显,其与A组比较有显著性差异(P<0.05).B组在治疗后3 d、7 d、14 d时相互比较无显著性差异(P>0.05),但与其治疗前比较有显著性差异(P<0.05).结论SD大鼠胰腺癌组织SST2R mRNA和SST2R的表达量明显减少;在善得定治疗后其表达量下降更为明显(P<0.05).我们认为,胰腺癌组织SST2R mRNA表达量明显减少可能是导致SSTR表达量显著减少和外源性生长抑素类似物治疗临床胰腺癌效果不佳的主要原因之一.
关键词: 奥曲肽 鼠胰腺癌 SST2R SST2R mRNA -
5-脂氧合酶基因沉默后裸鼠胰腺癌移植瘤相关基因的变化
目前认为,5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢途径异常是促进多种肿瘤发生、发展的重要原因之一.其机制为促进细胞过度增殖、抑制凋亡;促进恶性肿瘤血管生成;提高恶性肿瘤发生及转移的潜能、增加肿瘤细胞的侵袭力;抑制5-LOX能使多种恶性肿瘤细胞增殖减低并诱导细胞凋亡[1].本实验利用基因芯片检测靶向5-LOX的shRNA真核表达载体导入SW1990细胞形成的裸鼠皮下移植瘤内并联合雷公藤内酯醇(TL)治疗后移植瘤组织基因表达谱的变化,探讨沉默5-LOX基因表达治疗胰腺癌的应用价值.
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大鼠胰腺癌组织蛋白组学分析
我们诱导形成与人类胰腺癌的病理生物学特性很相近的大鼠胰腺癌[1],并将大鼠胰腺癌组织作为研究对象,进行双向电泳和质谱分析,初步筛选胰腺癌组织与正常胰腺组织中的差异蛋白质。一、材料与方法清洁级SD大鼠70只,随机分为模型组50只和假手术组20只。模型组将二甲基苯并蒽(DMBA)植入胰腺被膜内并荷包缝合后关腹。假手术对照组只进行荷包缝合。术后两个月处死。所有胰腺组织取下后,各取1块组织行苏木素-伊红(HE)染色,进一步确认癌组织及良性组织。分别取胰腺癌模型及正常胰腺组织,参照文献[2]方法制备组织总蛋白。等电聚焦主要按IPGphor电聚焦系统指南以及Rajcevic等[3]的方法优化进行。为了减小误差,每份蛋白样品重复电泳3次。凝胶染色参照文献[4]优化进行。
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SD大鼠胰腺癌模型制作及其癌基因K-ras和抑癌基因p53、Smad4的表达
胰腺癌恶性程度高,预后差,其病因及发病机制尚未完全明了[1].我们通过6、9 mg两种不同剂量化学致癌剂二甲基苯并蒽(DMBA)诱导Sprague-Dawley(SD)大鼠原位胰腺癌模型,并比较其优劣,寻找出一个较理想的胰腺癌模型制作方法[2],用免疫组织化学方法动态检测大鼠胰腺组织标本K-ras、p53、Smad4的表达[3],探讨胰腺癌的发病机制.
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大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织希佩尔林道病基因和缺氧诱导因子-1α表达及意义
希佩尔林道病基因(VHL)为一种抑癌基因.缺氧诱导因子(HIF)-1α是一种转录因子.一些研究结果证实VHL和HIF-1α表达水平与恶性肿瘤进展、血管生成、转移发生及侵袭能力密切相关"~[1-4].且新近研究证实恶性肿瘤中VHL基因突变及其蛋白表达水平与HIF-1α表达水平密切相关~[5].
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白细胞介素-23基因转染树突细胞联合β-榄香烯对小鼠胰腺癌的抑制作用
本研究旨在探讨白细胞介素(IL)-23基因转染的树突状细胞(DC)疫苗联合β-榄香烯协同对实体肿瘤的抑制作用.
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裸鼠胰腺癌动物模型及其应用进展
胰腺癌恶性度较高,预后差,死亡率列癌症死亡第4位,平均5年生存率<5%[1],其临床表现无特异性,早期诊断和手术切除困难.临床上很难获得新鲜的、不同时期的胰腺癌组织标本,更不可能在临床上观察其发生发展过程.随着裸鼠移植瘤细胞系的建立,通过建立胰腺癌实验动物模型,可为深入探讨胰腺癌的发生发展、浸润转移机制及治疗奠定基础.