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3-12 加药白酒与普通白酒对小鼠的急性肝损伤
目的选用乙醇性肝损伤敏感指标检测普通38度白酒加入具有抗氧化、调节酯代谢作用的中药后能否减轻乙醇对小鼠急性肝损伤的作用.方法受试物为某酒厂研制的加药38度白酒及本厂生产的38度白酒.试验设加药酒组、普通白酒组、蒸馏水组.选用健康昆明种雄性小鼠(合格证号医动字9-2-3),体重22～24g,随机分组,每组15只,加药酒与普通白酒中乙醇浓度均为38度,给小鼠相同剂量1次灌胃后12 h取肝脏制成质量浓度为10%的肝匀浆测TG、MDA,同时取相同部位肝脏组织做冰冻切片,苏丹Ⅲ染色,镜检,按含脂肪滴的肝细胞占全片肝细胞的比例记分,并累记积分.试验结果经方差分析,秩和检验用STATA软件统计分析.结果加药组肝匀浆中的TG、MDA及病理积分与普通白酒组比较,差异均有显著性(P＜0.01、P＜0.05、P＜0.01).加药酒组与蒸馏水组比较,3项指标差异均无显著性(P＞0.05).结论白酒中加入具有抗氧化、调节酯代谢作用的中药成分后确能减轻乙醇对小鼠急性肝损伤作用.
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代谢指纹谱用于丹参活性成分的分析与筛选
建立了以SD大鼠肝匀浆作为体外代谢方法,并结合HPLC-DAD-MS分析手段作为代谢指纹谱平台,在此基础上,对单味中药丹参进行体外代谢,采用HPLC-DAD-MS辅以MALDI-TOF-MS 对代谢前后的指纹语差异与相似性进行比较,结合抑菌、血凝体外药理实验测定丹参提取物及其代谢物、3种主要成分的活性.抑制大肠杆菌活性和血凝活性药理实验结果表明,丹参代谢物活性均高于其提取物.通过考察隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA的抑菌活性与血凝活性,并结合体外肝匀浆代谢实验,解释了其中的原因:丹参抑制大肠杆菌活性增高是因为隐丹参酮代谢转化为抑制率高的丹参酮ⅡA引起的;丹参提取物血凝活性在代谢后升高的原因是由于隐丹参酮谢转化为血凝活性更高的丹参酮ⅡA引起的.
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大鼠四氯化碳和猪血清肝纤维化模型比较
目的:比较四氯化碳和猪血清染毒复制肝纤维化模型的效果及其对大鼠血生化指标的影响.方法:正常对照组、四氯化碳模型组、猪血清模型组大鼠分别分别于每周一、四腹腔注射蒸馏水、40%CCl4、猪血清0.5ml/鼠,连续7wk.实验末测定肝功能(血清ALT、AST、TP、ALB、Tbili、Dbili)、血脂(TG、CHOL、HDL)及肝纤维化指标(血清、肝匀浆HA、LN、PCIII含量).结果:四氯化碳染毒大鼠一般状况差,体重增长速度明显减慢,肝功能、血脂显著异常,肝纤维化指标不但显著高于正常对照组,且较猪血清组有升高趋势;而猪血清除了引起肝纤维化指标显著升高外,对大鼠的一般状况、血生化指标均无明显影响.结论:四氯化碳诱导肝纤维化的程度或成功率较猪血清高,而猪血清法较四氯化碳造模法对动物的整体损伤要轻微得多.
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黄芩甙对ConA致肝损伤小鼠肝组织MDA含量的影响
目的:观察黄芩甙对模型小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA含量的影响.方法:除正常组灌服及尾静脉注射生理盐水外,其余各组小鼠分别于首日上、下午和次日下午各灌胃给药1次0.2mL/只,联苯双酯为150 g/L,大、中、小及注射剂组分别为200、100、50、50 g/L.末次给药后4-6 h各组动物一次性尾静脉注射ConA 20 mg/kg,观察血清ALT、AST和肝组织MDA含量的变化.结果:除空白组外的各组小鼠血清ALT、AST值黄芩甙大(2321.3±406.2;1638.5±353.4)、中(1890.2±467.3;1550.3±437.3)、小剂量组(1584.7±399.6;1302.9±353.1)以及注射剂组(2570.0±406.7;2 186.4±443.9)较模型组(4499.9±334.2;3967.6±392.7)均显著降低(P＜0.01),说明各治疗组均有降低转氨酶的作用.在降低ALT作用方面,黄芩甙大剂量与注射剂组的ALT降低不及联苯双酯组(P＜0.05),黄芩甙中、小剂量降低ALT的作用与联苯双酯组(1612.8±309.2)较为接近(P＞0.05).在降低AST作用方面,黄芩甙大、中、小剂量的作用无明显差异并与联苯双酯较为接近(P＞0.05),同时可以肯定的是,黄芩甙注射剂也有明显的降低AST的作用,但效果不如黄芩甙大、中、小剂量和联苯双酯组(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.05).肝组织匀浆中的MDA含量,以黄芩甙大(2.61±0.3)、中(2.11±0.4)、小剂量组(2.60±0.5)及注射剂(2.66±0.5)和联苯双酯组(2.81±0.3)均较模型组(4.66±0.5)显著降低(P＜0.01),黄芩甙中剂量组的肝匀浆MDA含量低,而黄芩甙大、小剂量组及注射剂组的肝匀浆MDA含量低于联苯双酯组,但组间比较无显著差异(P＞0.05).结论:黄芩甙可降低血清ALT、AST和肝组织MDA含量且优于联苯双酯,这可能是其抗ConA肝损伤机理的重要方面.
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肝内肾素-血管紧张素-醛固酮系统与大鼠肝纤维化的关系
目的:验证肝脏是否存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统,明确其与肝纤维化的关系.方法:取♂成年SD大鼠40只,随机分为4组.Ⅰ组为对照组,给予橄榄油皮下注射;Ⅱ～Ⅳ组为四氯化碳肝纤维化模型组,分别于2、4、6wk被处死.采用放射免疫法测定血液和肝匀浆中肾素、血管紧张素、醛固酮水平;采用紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶活性;采用图像分析法判定肝纤维化程度.结果:正常大鼠肝脏中可测到肾素活性、血管紧张素Ⅰ&Ⅱ、醛固酮和血管紧张素转换酶活性(分别为1.5±1.2μg/L/h,5.18±1.3μg/L,561.6±210.7ng/L,O.4±0.1μg/L,66.2±7.2μmol/L/min),并随肝纤维化进展逐渐升高(造模后6wk为4.3±1.8μg/L/h,13.1±2.4μg/L,762.5±322.5 ng/L,0.6±0.2μg/L,96.2±17.8μmol/L/min).结论:肝脏存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统,并随肝纤维化进展逐渐激活,说明此系统参与了肝纤维化形成.
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肉桂酸的代谢与CYP450酶的相关性研究
目的 通过离体肝匀浆实验法来研究肉桂酸的代谢转化过程,探讨参与肉桂酸代谢的CYP450亚酶,为临床上合理用药提供科学依据.方法 应用高效液相色谱法检测大鼠肝匀浆温孵液中剩余肉桂酸的含量,分析各诱导和抑制剂对肉桂酸代谢的影响.结果 特异性CYP1A诱导剂β-NF组中肉桂酸代谢速率明显高于对照组,而主要诱导CYP2B的PB组和CYP3A的DEX组与对照组比较无明显区别;特异的CYP1A抑制剂α-NF则显著抑制肉桂酸的代谢.结论 CYP1A是介导肉桂酸代谢转化的主要酶系,肉桂酸与抑制或诱导CYP1A酶的药物合用可能存在相互作用.
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银杏叶提取物抗氧化作用的实验研究
目的:本课题用果蝇生存实验及快速老化模型小鼠实验对银杏叶提取物抗氧化作用进行实验研究.果蝇生存试验中,各组果蝇生长活动良好.雄性果蝇0.0600%和0.1800%浓度组半数死亡天数均比对照组延长5天;0.0200%、0.0600%和0.1800%浓度组平均寿命和平均高寿命均比对照组延长,有统计学意义(P＜0.05).快速老化模型小鼠(SAM老化鼠)实验中,对SAM老化鼠经口给予不同剂量的银杏叶提取物,染毒60天后取其肝匀浆,各剂量组匀浆中MDA均低于SAM中对照组、SOD均高于SAM种对照组,且有统计学意义(P＜0.05).本实验研究结果表明银杏叶提取物具有抗氧化作用.
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布洛芬丁香酚酯前体药物的合成及其水解动力学
目的合成布洛芬丁香酚酯并研究其在不同pH水溶液中及血浆、肝匀浆中的水解动力学.方法以布洛芬和丁香酚为原料,经过酯化反应合成了布洛芬前体药物布洛芬丁香酚酯,利用HPLC法测定不同pH值的缓冲溶液、血浆及肝均浆中药物水解动力学.经UV、IR、MS和NMR确证了目标化合物的结构.结果布洛芬丁香酚酯在pH 1.10～9.96时水解速率常数不受pH影响,pH 10.91～11.91时随pH值增加水解速率增大;在血浆及肝均浆中布洛芬丁香酚酯可迅速水解成布洛芬和丁香酚.结论布洛芬丁香酚酯是一个具有良好前景的非甾体抗炎前体药物.
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八仙长寿汤对小鼠脑、肝脂质过氧化作用的影响
目的 探讨八仙长寿汤对小鼠脑、肝抗脂质过氧化的作用.方法 采用硫代巴比妥酸反应法,观察了八仙长寿汤对小鼠在体和体外肝脏与脑组织匀浆及四氯化碳(CCl1)引起的脂质过氧化作用的影响,同时观察了对小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)的影响.结果 八仙长寿汤对小鼠体内和体外及CCl4诱导产生的脑、肝组织中的丙二醛(MDA)生成量均有不同程度的降低作用且有量效关系,不同剂量的八仙长寿汤还能减轻CCl4对肝脏的损害.结论 八仙长寿汤能降低脑和肝脏的脂质过氧化作用,可减少MDA的生成.
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苦豆碱对氧自由基的清除作用
苦豆碱系豆科槐属植物苦豆子(Sophora alopecuroides L.)中的生物碱,苦豆子分布于我国宁夏等北方沙漠地区.苦豆碱具有明显的抗炎、抗变态反应作用.本文作者报道其对小鼠肝匀浆中过氧化脂质产物-MDA、过氧化氢酶及血清中超氧化物歧化酶的影响.
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槐苷在大鼠肝匀浆中的代谢
目的为阐明槐苷在大鼠肝中的代谢产物及其代谢过程,对槐苷进行体外代谢研究.方法应用HPLC测定槐苷在大鼠肝匀浆中主要代谢产物的含量,并测定其动力学参数.结果槐苷在大鼠肝匀浆中孵育4h后总回收率大于78%(槐苷+苷元),主要代谢产物为其苷元.Km为(334.27±15.28)μmol/L.结论槐苷在大鼠肝匀浆中主要通过水解得到活性代谢产物苷元,对其充分发挥活性作用具有意义.
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空心莲子草醇提物对化学性肝损伤的影响
目的观察空心莲子草(APG)对化学性肝损伤小鼠的影响.方法分别采用CCl4和D-半乳糖胺作为化学毒物制成化学性肝损伤模型.测定各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性.光镜下观察其肝脏病理变化,并测定肝匀浆MDA含量和SOD活力.结果CCl4肝损伤模型组和D-半乳糖胺肝损伤模型组小鼠的血清ALT和AST均明显高于正常对照组(P＜0.01),SOD活力较正常对照组低(P＜0.01),MDA含量高于正常对照组(P＜0.01),表明CCl4和D-半乳糖胺均造模成功.空心莲子草高、中剂量组较模型组血清ALT和AST活性明显降低(P＜0.01),MDA含量明显降低和SOD活力明显提高(P＜0.01).病理组织学观察,空心莲子草组肝损较模型组明显减轻.结论空心莲子草对化学性肝损伤有保护作用.
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仙草多糖对大鼠肝匀浆脂质过氧化的实验研究
目的研究仙草多糖对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响,为仙草的保健功能提供实验依据.方法以大鼠肝匀浆为体外实验体系,以H2O2为氧化损伤因素,应用TBA微量测定法检测仙草多糖的干预对大鼠肝匀浆脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响.结果仙草多糖对H2O2所致大鼠肝匀浆MDA的生成具有明显的抑制作用(P＜0.01),并呈现出一定的剂量-效应关系.结论仙草多糖具有显著的抗脂质过氧化作用.
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大鼠非酒精性脂肪肝病程中细胞色素P450酶的分析
目的 探讨4种主要的细胞色素P450酶在非酒精性脂肪肝( NAFLD)发病进程中的表达变化. 方法 建立大鼠NAFLD的病理模型,并分别测定肝匀浆中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和三酰甘油(TG)等生化指标.采用Western blot法检测在各个病理时期CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A1的表达水平的变化.结果 随着NAFLD严重程度的增加,AST与ALT的活性显著上升( P<0. 01 ) , TG的水平则在重度脂肪肝时期之前上升,而后显著下降( P<0. 01).CYP1A2和CYP2D6的表达水平在发病进程中总体呈下降趋势, CYP3A1 虽总体下调,但幅度不大,而CYP2E1的表达水平则明显上升( P <0. 01 ). 结论 在NAFLD 的发病进程中 CYP1A2、 CYP2D6、 CYP3A1 和CYP2E1的表达水平发生明显的改变,实验结果可以为内科医师针对NAFLD患者的用药提供指导.
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分离氨基酸层析液制备方法的改进
纸层析法分离氨基酸是近代生化领域为常用的快速、高效、灵敏的分离技术.该项技术是将肝匀浆中分别加入丙氨酸和α-酮戊二酸,通过转氨基作用使得产生谷氨酸和丙酮酸.然后以饱和苯酚水溶液为层析液,水为固定相,苯酚为流动相.用纸层析法将肝组织中的谷氨酸和丙氨酸分离开.这一技术多年来在实验教学上一直使用,在使用过程中,我们逐渐发现该层析液在制备过程中操作较为麻烦,耗费时间长、毒性大.为解决这一问题,通过查阅大量资料、反复实验,制备了不同层析液进行比较,终获得了满意的层析效果.现报道如下:
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异莲心碱对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响
目的:研究异莲心碱(isoliensinine,IL)对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响.方法:用硫代巴比妥酸(TBA)法测定异莲心碱对大鼠肝匀浆自氧化及Vit C-Fe2+系统诱导引起的脂质过氧化产物丙二醛的含量.结果:异莲心碱能显著抑制大鼠肝匀浆自氧化及Vit C-Fe2+系统诱导所产生MDA的含量,且呈现出一定的量效关系,达到50%抑制率所需药物浓度IC50分别为0.67 g·L-1和1.05 g·L-1.结论:异莲心碱具有显著的抗脂质过氧化作用.
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急性肝衰竭大鼠肝匀浆蛋白诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化
目的 研究D-氨基半乳糖/内毒素介导的急性肝衰竭大鼠肝匀浆蛋白对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的影响.方法 将D-氨基半乳糖/内毒素腹腔注射制备而成的肝衰竭大鼠肝匀浆蛋白加入培养液中培养BMSCs,通过观察BMSCs形态以及检测ALB、AFP、糖原、尿素氮的合成来观察它对细胞分化的影响.结果 肝衰竭大鼠肝匀浆按分子量的大小可以分为6个部分,其中4个部分的蛋白可以导致BMSCs转变成较为典型的多角型、卵圆形细胞,并且这些细胞中的AFP、ALB、糖原染色、培养液中尿素氮浓度也有明显增加,以第3、第4部分蛋白更为显著.结论 急性肝衰竭模型肝匀浆蛋白可以促进BMSCs向肝细胞样细胞分化,其中以第3、第4波峰蛋白更为显著.
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红花黄色素对大鼠中毒性肝纤维化血清和肝组织HA和LN及胶原含量的影响
目的:本实验以透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)为指标,观察CCl4诱导大鼠中毒性肝损伤和肝纤维化后肝组织内储脂细胞变化和胶原的沉积及红花黄色素对其变化的影响,以探讨红花黄色素对中毒性肝纤维化防治作用的机制.方法: Wistar大鼠随机分为3组:①病理模型组:接受40% CCl4一橄榄油皮下注射,剂量为1.2 mL/kg体重,每周2次,共12周,与治疗组等容量生理盐水灌胃;②红花黄色素治疗组接受40% CCl4一橄榄油注射,方法、剂量同病理模型组,同时红花黄色素550 mg/kg体重灌胃,每日1次,共12周;③正常对照组接受橄榄油皮下注射,方法、剂量同上.各组分别于实验开始后,每隔3周随机处死5只大鼠,剩余大鼠于12周末全部处死.断头采血,分离血清,取1 g新鲜肝组织匀浆,用放免法测定大鼠血清和肝匀浆中HA、LN含量.肝组织V-G染色,用病理图像分析系统进行胶原定量分析.用透射电镜观察肝组织内储脂细胞变化.结果: 红花黄色素治疗组大鼠血清和肝匀浆中HA、LN含量及肝组织内胶原含量和储脂细胞变化显著低于病理模型组.结论: 红花黄色素能抑制肝脏储脂细胞增殖转化及HA、LN的合成,减少胶原沉积,有防治CCl4诱发中毒性肝纤维化的作用.
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银莲花素A在大鼠肝匀浆中的代谢产物
目的 研究银莲花素A在大鼠肝脏的代谢产物.方法 采用薄层色谱和质谱鉴别银莲花素A在大鼠肝匀浆中的主要代谢产物.结果 银莲化素A在大鼠肝匀浆中乇要得到水解产物3-O-[β-D-吡哺葡萄糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖]齐墩果酸、齐墩果酸;经苯巴比妥诱导后的肝中水解产物量减少,主要产物可能是水解产物经还原后与甘氨酸的结合产物.结论 银莲花素A在普通大鼠肝匀浆中主要发生水解反应,在经苯巴比妥诱导的肝匀浆中主要发生还原反应.
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LC-MS/MS法体外测定肝匀浆液中乌头碱及其代谢产物
目的:建立测定大鼠肝匀浆液中乌头碱含量的LC-MS/MS方法,评价附子甘草配伍前后在大鼠肝组织匀浆液中的体外温孵代谢情况.方法:对LC-MS/MS法进行验证,并测定不同温孵时间点甘草附子合煎液、附子单煎液加空白大鼠肝匀浆中乌头碱的含量及附子单煎液加甘草诱导后大鼠肝匀浆中乌头碱的含量.结果:建立的LC-MS/MS方法线性关系、精密度、准确度和灵敏度都符合样品分析测试要求.体外温孵6h后,附子单煎液加空白组代谢率为10.97％,附子甘草合煎液加空白组代谢率为25.42％,附子单煎液加甘草诱导组代谢率为18.99％;体外温孵22 h后,附子单煎液加空白组代谢率为13.05％,附子甘草合煎液加空白组代谢率为47.01％,附子单煎液加甘草诱导组代谢率为32.13％.结论:所建立的LC-MS/MS方法用于大鼠肝匀浆中乌头碱的含量测定,简单、准确、灵敏.甘草与附子配伍后能加快乌头碱在肝脏中的代谢速度,且甘草与附子同时给药比甘草诱导后再给附子药液其乌头碱的代谢速度更快.
