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维生素E对培养的肝细胞和储脂细胞细胞外基质的影响
1989年,Chojkier和Igarashi分别报告脂质过氧化可发生在未受刺激、静止的培养成纤维细胞和活体正常组织.本实验旨在了解体外培养大鼠肝细胞和储脂细胞(Ito细胞)是否存在过氧化脂质和前胶原基因表达的产物,正常培养大鼠Ito细胞有无其它细胞外基质的产生,维生素E(VE)能否抑制基础脂质过氧化和细胞外基质(ECM)产生.
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肝细胞、胰岛细胞与储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响
目的:探讨肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.方法:采用改良胶原酶消化法分离获得大鼠肝细胞和储脂细胞,同时利用梯度离心分离胰岛细胞.分两组实验,肝细胞培养组(对照组),肝细胞用RPMI1640、胰岛素10-7mol/L、100 mL/L FBS及地塞米松10-8 mol/L配成细胞悬液,2 mL放入9 cm2培养瓶中连续培养15 d(37℃50mL/LCO2).肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养组(实验组):将1×107/L的储脂细胞2 mL先加入培养瓶中,培养条件及培养液同肝细胞培养组,培养48 h后弃上清后将肝细胞2×108/L 2 mL和胰岛细胞(100个)分别加入并观察肝细胞存活情况;全自动生化分析仪测定培养上清液中总蛋白及尿素氮的含量;两组细胞均在培养10 d行细胞组织学及组织化学检测,包括肝细胞HE染色、肝细胞内糖原PAS染色及葡萄糖-6-磷酸酶染色检测.结果:培养第7 d对照组部分肝细胞脱落,核固缩,胞质破碎分解.而实验组肝细胞粘壁生长好,肝细胞、储脂细胞和胰岛细胞相间形成团状和索形.培养10 d对照组肝细胞核完全固缩,胞质破碎分解,糖原、葡萄糖-6-磷酸酶的表达消失;实验组肝细胞呈片状,胞质饱满,糖原、葡萄糖-6磷酸酶的表达良好.培养5 d后实验组白蛋白及尿素氮的合成明显高于对照组(P<0.05).结论:肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养明显延长肝细胞存活期.
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灯盏花液对实验性肝纤维化胶原合成的抑制作用
笔者用灯盏花液对实验性肝纤维化大鼠进行防治,结果表明其具有保护肝细胞、改善肝功能、减轻肝组织病理损伤程度、减少血清和肝匀浆中透明酸、层粘蛋白含量的作用.本实验通过灯盏花液对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化肝组织中胶原含量分析及储脂细胞变化影响的观察,以探讨其抗肝纤维化的机制.
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人参皂苷Rd干预体外培养肝储脂细胞胶原的表达
背景:肝储脂细胞产生胶原是导致肝硬化的直接原因,调控肝储脂细胞产生胶原的能力即可以防治肝硬化.目的:观察人参皂苷Rd 对体外培养肝储脂细胞Ⅰ,Ⅲ型胶原表达的影响.方法:体外培养肝储脂细胞,随机分为对照组和实验组,实验组用100 mg/L 人参皂苷Rd 进行培养干扰,用免疫组织化学、免疫荧光技术检测Ⅰ,Ⅲ型胶原基因的表达.结果与结论:实验组比对照组,Ⅰ,Ⅲ型胶原阳性产物吸光度和面积比值明显降低(P < 0.05),说明人参皂苷Rd 对体外培养肝储脂细胞Ⅰ,Ⅲ型胶原的表达有明显调节作用,影响肝储脂细胞产生胶原纤维.
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肝脏星状细胞与细胞外基质、金属蛋白酶的研究进展
80年代初,用胶原酶、链酶蛋白酶原位循环灌注法首先成功地分离了大鼠肝星状细胞(旧称储脂细胞、Ito细胞),从此人们开始了肝脏星状细胞(HSC)的体外研究.HSC是肝纤维化细胞外基质的主要来源细胞.而肝细胞的正常功能和HSC能保持静止状态,均有赖于Disse腔内正常的细胞外基质成分.本文就HSC与细胞外基质及金属蛋白酶之间的相互关系、相互作用机制作一综述.
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硒对大鼠肝细胞和储脂细胞过氧化脂质及细胞外基质的影响
目的观察微量元素硒(Se)对大鼠肝细胞、储脂(Ito)细胞过氧化脂质和细胞外基质(ECM)产生的影响.方法采用原位灌注方法分离大鼠肝细胞和Ito细胞.结果培养肝细胞、Ito细胞有一定水平的基础丙二醛(MDA)产生和ECM分泌.Se可提高肝细胞、Ito细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,抑制基础MDA产生,减少3H-脯氨酸(3 H-Pro)掺入、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)分泌及Ito细胞透明质酸(HA)分泌.结论 Se可抑制肝细胞和Ito细胞过氧化脂质产生和ECM分泌.
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复方汉防己治疗实验性肝纤维化的机制探讨
目的:观察复方汉防己抗肝纤维化的疗效并探讨其机制。方法:用复方汉防己治疗CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠,观察它对血清透明质酸(HA)、肝组织纤维化评分及储脂细胞的影响,HA测定采用放免法,储脂细胞观察采用免疫组化法。结果:复方汉防己治疗组肝纤维化评分明显低于生理盐水对照组,血清HA及结蛋白阳性细胞数明显减少。结论:复方汉防己有良好的抗肝纤维化作用,其机制可能是抑制储脂细胞的增殖。
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一种同时分离肝细胞和储脂细胞的简易方法
目的探讨同时分离肝细胞和储脂细胞的有效方法.方法采用门静脉胶原酶灌注消化法同时分离大鼠肝细胞和储脂细胞,先用300r/min(20℃)低速离心5 min,将细胞悬液分成上清和沉淀两部分并分别放入两个离心管中.A管为沉淀部分(肝细胞悬液)经0.02%胶原酶孵育液孵育10min(37℃ 5%CO2),100目网过滤,离心后即为肝细胞.B管为上清部分主要是储脂细胞,经胶原酶恒温震荡消化(200r/min,37℃),200目网过滤,Nycodenz液进行梯度离心(3 000r/min)后即得储脂细胞.结果肝细胞存活率和细胞产率分别为 (93.5± 3.5)%和 (2.4± 0.2)×108/大鼠,储脂细胞分别为 (94.5± 3.5)%和 (2.3± 0.4)×107/大鼠.肝细胞组织学及组织化学检测肝细胞形态正常,细胞培养功能表达正常.储脂细胞在激发波长为328 nm的荧光显微镜下发出蓝绿色荧光,细胞培养贴壁良好.结论一步法同时分离肝细胞和储脂细胞是一种简单有效的方法.
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红花黄色素对大鼠中毒性肝纤维化血清和肝组织HA和LN及胶原含量的影响
目的:本实验以透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)为指标,观察CCl4诱导大鼠中毒性肝损伤和肝纤维化后肝组织内储脂细胞变化和胶原的沉积及红花黄色素对其变化的影响,以探讨红花黄色素对中毒性肝纤维化防治作用的机制.方法: Wistar大鼠随机分为3组:①病理模型组:接受40% CCl4一橄榄油皮下注射,剂量为1.2 mL/kg体重,每周2次,共12周,与治疗组等容量生理盐水灌胃;②红花黄色素治疗组接受40% CCl4一橄榄油注射,方法、剂量同病理模型组,同时红花黄色素550 mg/kg体重灌胃,每日1次,共12周;③正常对照组接受橄榄油皮下注射,方法、剂量同上.各组分别于实验开始后,每隔3周随机处死5只大鼠,剩余大鼠于12周末全部处死.断头采血,分离血清,取1 g新鲜肝组织匀浆,用放免法测定大鼠血清和肝匀浆中HA、LN含量.肝组织V-G染色,用病理图像分析系统进行胶原定量分析.用透射电镜观察肝组织内储脂细胞变化.结果: 红花黄色素治疗组大鼠血清和肝匀浆中HA、LN含量及肝组织内胶原含量和储脂细胞变化显著低于病理模型组.结论: 红花黄色素能抑制肝脏储脂细胞增殖转化及HA、LN的合成,减少胶原沉积,有防治CCl4诱发中毒性肝纤维化的作用.