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新疆阿魏乙酸乙酯提取物对人结肠腺癌Caco-2细胞迁移、侵袭的影响及相关机制
目的:研究新疆阿魏乙酸乙酯提取物对人结肠腺癌Caco-2细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其相关机制.方法:以Caco-2细胞为研究对象,用6.25,12.5 mg·L-1新疆阿魏乙酸乙酯提取物和顺铂分别作用于处于对数生长期的人结肠腺癌Caco-2细胞,并设空白组,用划痕愈合法观察0~48 h各组Caco-2细胞迁移情况,用transwell小室法计数72 h各组Caco-2细胞穿过基质膜个数,并计算出每个时间段Caco-2细胞迁移率和侵袭抑制率.采用荧光实时定量PCR法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组Caco-2细胞中磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine,Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalina target of rapamgcin,mTOR)基因和蛋白的表达水平.结果:与空白组比较,新疆阿魏乙酸乙酯提取物和顺铂组在24,48 h细胞愈合程度变慢(P<0.05);72 h时穿过基质膜的细胞个数显著减少(P<0.01),各用药组PTEN基因表达水平明显升高,Akt,mTOR基因表达水平明显较低(P<0.05).结论:新疆阿魏乙酸乙酯提取物可以显著抑制人结肠腺癌Caco-2细胞的迁移和侵袭,可能与提高PTEN基因表达水平有关.
关键词: 新疆阿魏 Caco-2细胞 迁移 侵袭 磷酸酶 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原的影响
目的 探讨持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响. 方法 采用全自动生化分析仪测定转氨酶的活性变化,用复性电泳技术分析磷酸酶和蛋白水解酶的变化,用半定量RT-PCR技术分析PCNA mRNA的表达变化.结果 饥饿过程中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性显著升高,是对照水平的10倍以上,恢复喂食后逐渐降低到正常水平;碱性磷酸酶(ALP)的活性在饥饿过程中明显减弱,而酸性磷酸酶(ACP)活性却显著增强;受饥饿影响,140kD和40kD蛋白水解酶的活性均明显增加;然而饥饿过程中PCNA的表达没有明显变化,说明饥饿对该基因的影响很小. 结论持久饥饿对涡虫的生理和生化代谢有重要影响,酶活性的变化反应了涡虫适应持久饥饿的能量代谢变化.
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磷酸酶PTEN 在中枢神经系统中的研究进展
第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因PTEN,是1997年发现的一种新的肿瘤抑制基因.在中枢神经系统中,由于PTEN基因发生突变或功能障碍是导致神经胶质细胞瘤形成的重要致瘤因素.新近研究表明,PTEN除了与肿瘤形成有关外,还与其它脑部病变具有一定的联系,并在中枢神经系统的病理生理变化过程中起一定的作用.本文就PTEN在神经损伤、神经发育和精神疾病中的作用进行综述,并揭示以PTEN为分子治疗的靶点,探索治疗中枢神经系统疾病的一种新的治疗策略.
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LPP3将 LPA6信号局限于内皮细胞非接触区域
溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)在生物体内受精确调控,敲低或者过表达催化其产生的酶都会造成严重的血管发育缺陷。LPA 的降解受磷酸酯磷酸酶(lipid phosphate phosphatase,LPP)催化,其中亚型 LPP3被基因组关联分析(genome-wide association analysis)鉴定为心血管疾病独立危险因素。本研究揭示了 LPP3在细胞内如何分布并调节 LPA 信号。
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1例肝糖原积累病患儿肝移植术后的监护
肝糖原积累病是一种罕见的难以治愈的先天性代谢性疾病,为"常染色体隐性遗传病"[1].该病是由于肝、肾及小肠黏膜缺乏葡萄糖-6-磷酸酶,以致糖原分解发生障碍,过多糖原积累在肝中[2].其主要临床表现为肝脏肿大,空腹低血糖,生长发育迟缓,外表呈"均匀性侏儒样",多无智能障碍.临床多采用对症治疗,无彻底治疗方法.有学者提出对于严重的肝糖原积累病,可以尝试肝脏移植[1].现就1例肝糖原积累病患儿肝移植术后的监护及治疗情况报告如下.
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STAyCIS研究:大剂量阿托伐他汀可减少临床孤立综合征患者头MRI新发T2病灶数量
他汀类药物为临床常用的降脂药物,体外及体内的诸多研究表明,他汀类药物具有免疫调节作用.多发性硬化的实验模型研究中,口服他汀类药物可以通过异戊二烯化ras和rho三磷酸酶刺激T细胞分化,从而阻止炎性反应的复发或者转复肢体的无力.
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Rho/Rho激酶信号通路与高血压
1985年,Rho作为Ras同源物首先被克隆出来,此后的研究发现Rho作为信号调节分子联系细胞表面受体与肌动蛋白细胞骨架的组建,在细胞代谢过程中发挥重要作用.近年来,一系列研究显示Rho/Rho激酶信号通路主要通过磷酸化抑制肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphase,MLCP)的活性来增加肌球蛋白轻链(myosin lightchain,MLC)的磷酸化水平,从而增强平滑肌的收缩力,在高血压的发生和发展中起着非常重要的作用.
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胰岛素信号转导与肝胰岛素抵抗
主要阐述胰岛素信号转导缺陷与肝胰岛素抵抗的关系.IRS-2是肝胰岛素信号转导核心介子,IRS-2基因的缺失或IRS-2信号网络上一些关键信号分子的异常改变,都将导致肝胰岛素信号转导能力减弱,出现肝胰岛素抵抗.研究发现诸多因素,如蛋白和脂类磷酸酶,脂源性细胞因子、游离脂肪酸均可影响肝胰岛素信号转导.肝胰岛素信号转导缺陷参与胰岛素抵抗综合征有关的非酒精性脂肪肝的发生,其分子机制成为目前研究的重点之一.
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肝细胞、胰岛细胞与储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响
目的:探讨肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养对肝细胞功能的影响.方法:采用改良胶原酶消化法分离获得大鼠肝细胞和储脂细胞,同时利用梯度离心分离胰岛细胞.分两组实验,肝细胞培养组(对照组),肝细胞用RPMI1640、胰岛素10-7mol/L、100 mL/L FBS及地塞米松10-8 mol/L配成细胞悬液,2 mL放入9 cm2培养瓶中连续培养15 d(37℃50mL/LCO2).肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养组(实验组):将1×107/L的储脂细胞2 mL先加入培养瓶中,培养条件及培养液同肝细胞培养组,培养48 h后弃上清后将肝细胞2×108/L 2 mL和胰岛细胞(100个)分别加入并观察肝细胞存活情况;全自动生化分析仪测定培养上清液中总蛋白及尿素氮的含量;两组细胞均在培养10 d行细胞组织学及组织化学检测,包括肝细胞HE染色、肝细胞内糖原PAS染色及葡萄糖-6-磷酸酶染色检测.结果:培养第7 d对照组部分肝细胞脱落,核固缩,胞质破碎分解.而实验组肝细胞粘壁生长好,肝细胞、储脂细胞和胰岛细胞相间形成团状和索形.培养10 d对照组肝细胞核完全固缩,胞质破碎分解,糖原、葡萄糖-6-磷酸酶的表达消失;实验组肝细胞呈片状,胞质饱满,糖原、葡萄糖-6磷酸酶的表达良好.培养5 d后实验组白蛋白及尿素氮的合成明显高于对照组(P<0.05).结论:肝细胞、胰岛细胞和储脂细胞共培养明显延长肝细胞存活期.
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以急性溶血性贫血为首发表现的Wilson病1例
目的:认识Wilson病(WD)临床表现的多样性.方法:报告1例以急性溶血性贫血(溶贫)为首发表现的WD,并行文献复习.结果和结论:以急性溶血为首发症状是WD一种少见的起病形式,常伴肝衰竭,预后不佳;WD误诊率较高主要与临床表现复杂多样有关,对于年轻的不明病因的溶贫患者应注意排除WD的可能;血清碱性生磷酸酶舌性下降对诊断有一定帮助.
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赖氨酰氧化酶与肝纤维化研究进展
赖氨酰氧化酶(lysyl oxidases,LOXs)又称蛋白赖氨酸-6-磷酸酶,是一种在细胞外基质(如胶原和弹性蛋白)的修饰过程中起重要作用的酶类,可以引起胶原纤维和弹性纤维的交联效应,包括分子内和分子间的交联[1].因此,在细胞外基质形成和修复反应中发挥关键作用[2].
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肺恶性蝾螈瘤一例
患者男性,29岁,因反复咳嗽,胸痛1个月于2000年6月27日入院.患者入院前1个多月出现无明显诱因的胸痛、咳嗽、咳痰并低热(35 ℃),持续1周.在外院检查结果未明,未做治疗.查体:胸廓无压痛,胸右上部叩诊为实音,双肺呼吸音清,右上肺呼吸音减弱,未闻及音.胸片示:右上肺有一约17 cm × 14 cm × 7.5 cm的肿块,边缘不整、有分叶、内有坏死,液化.实验室检查:碱性肌磷酸酶(CK)为322 IU/L(正常参考值10~190 IU/L).
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心力衰竭家兔蛋白激酶A及磷酸酶1α的异常
研究表明,心肌肌浆网钙泵(SERCA2)的异常在心力衰竭(心衰)的发展机制中发挥重要作用.很多因素可以调节SERCA2的活性,主要的是受磷蛋白的调节.而受磷蛋白的磷酸化及去磷酸化分别由蛋白激酶A和磷酸酶1α调控.
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多发性骨髓瘤PTEN蛋白表达与Akt磷酸化水平的关系
多发性骨髓瘤(MM)是B细胞起源的恶性肿瘤,发病机制仍不清楚.研究表明, 10号染色体丢失的磷酸酶-张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PTEN/PI3K/Akt)信号转导异常在肿瘤的发生、发展中起重要作用,也是当前血液肿瘤发病机制研究的热点[1].
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胆囊癌中抑癌基因PTEN、凋亡调控基因Fas/APO-1和bcl-2的表达及其意义
肿瘤的发生、发展必有癌基因的激活与抑癌基因的失活.1997年,研究人员从10q23.3染色体上克隆到了PTEN基因(磷酸酶张力蛋白基因,phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)并证实为肿瘤抑制基因[1].PTEN基因在胆囊癌中的表达及与生物学特性关系的研究罕见报道.细胞凋亡(apoptosis)与肿瘤的发生、发展有密切关系,大肠癌中的Fas/APO-1和bcl-2为凋亡调控作用相反的基因.我们检测了上述基因在胆囊癌和非癌组织中的表达,以期了解它们在胆囊癌发生发展中的作用.
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PTEN蛋白在肾癌组织中的表达及意义
与张力蛋白在10号染色体同源缺失的磷酸酶(PTEN)可抑制酪氨酸去磷酸化,对细胞增殖起负调控作用.我们采用免疫组化方法检测44例肾癌组织中抑癌基因PTEN蛋白表达,并分析其临床意义.
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磷脂酰肌醇-4-激酶和磷脂酰肌醇-4-磷酸在不同病毒复制中作用的研究进展
诸多病毒对宿主脂质代谢、脂质膜的运输以及脂质介导的信号转导均会产生影响。磷酸肌醇(phosphoinositides,PIs)是一类参与以上几种细胞过程的一种磷脂。磷脂酰肌醇是PIs的基本骨架,磷脂酰肌醇5个羟基中3、4、5位羟基可被激酶可逆的磷酸化后总共得到7种PIs,包括磷脂酰肌醇-3-磷酸(phosphatidylinositol -3-phosphate,PI3P)、磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate, PI4P)、磷脂酰肌醇-5-磷酸(phosphatidylinositol 5-phosphate,PI5P)、磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸盐[phosphatidylinositol 3,4-biphosphate,PI(3,4) P2]、磷脂酰肌醇-3,5-二磷酸盐[phosphatidylinositol 3,5-bisphosphate,PI(3,5)P2]、磷脂酰肌醇4,5-二磷酸盐[phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate,(PI(4,5)2]和磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸盐[phosphatidylinositol 3,4,5-triphosphate,PI(3,4,5)P3]。这7种PIs可以相互间进行转换,不同类型的磷酸酶和激酶参与其相互转换的过程[1]。这些PIs在亚细胞膜中的分布各不相同。PI3P在早晚期内体上都有分布,PI4P主要分布在高尔基体上[2];PI(3,4)P2, PI(4,5)P2,PI(3,4,5)P2主要位于血浆膜[3-4];PI(3,5)P2主要分布于突触分泌小泡[5],晚期内体上也有少量分布。
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磷酸镁骨黏合剂的生物安全性研究
目的 从体外细胞毒性及炎性细胞因子的表达实验研究分析磷酸镁骨黏合剂的生物安全性,为临床应用提供依据.方法 四唑盐比色(MTT)实验:采用小鼠成骨细胞悬液,实验组与不同浓度的磷酸镁骨黏合剂浸提液培养,阴性对照组为细胞培养液,培养1、3、5 d时,加入MTT用酶联免疫检测仪,测定吸光度值,计算细胞相对增殖率及细胞毒性分级;碱性磷酸酶(ALP)实验:小鼠成骨细胞悬液与不同浓度的MPC浸提液混合,酚标准液作为标准组,双蒸水作为空白组,细胞培养液作为阴性对照组,培养1、3、5 d时做ALP测定,用酶联免疫检测仪测定光吸收值;炎性因子表达实验:小鼠成骨细胞悬液与不同浓度的MPC浸提液混合,阴性组为细胞培养液,培养1、3、5 d时做炎性因子IL-1β、IL-6,TNF-α的双抗体夹心法ELISA测定.结果 MTT实验结果细胞毒性在0~1级,有很好的生物相容性;ALP实验提示各组间差异无统计学意义,不影响成骨细胞的正常生长;MPC组的炎性因子表达与阴性对照组差异无统计学意义.结论 对体外培养的成骨细胞的正常生长发育不会产生影响;在细胞分子水平方面的炎性因子生物安全性检测即抗原--抗体结合表达反应亦达到预期设计标准,对炎性因子的表达不会产生影响.
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快速诊断溶酶体缺陷引起的非免疫性胎儿水肿的方法
本文发表在2012年12月的《Prenatal Diagnosis》上.非免疫性胎儿水肿(NIHF)指除因ABO及RH溶血以外的其他原因引起的胎儿水肿,病因复杂.NIHF可经孕期超声诊断,表现为胎儿多浆膜腔积液,皮肤水肿或胎盘肿大.溶酶体缺陷可引起NIHF,如Ⅰ型粘多糖病(缺乏Aβ-艾杜糖醛酸酶)、Ⅶ型粘多糖病(缺乏β-葡萄糖醛酸酶)、Ⅱ型粘脂贮积病(缺乏n-乙酰氨基葡糖-1-转磷酸酶)、神经节苷脂贮积病(缺乏β-半乳糖苷酶)、半乳糖唾液酸贮积症(缺乏β-半乳糖苷酶和神经氨酸苷酶保护蛋白)、戈谢病(缺乏β-葡糖脑苷脂酶)和多种硫酸酯酶缺乏症(缺乏多种硫酸酯酶)等.
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弗氏志贺菌2aphoN1基因功能的初步研究
目的:初步探讨phoN1基因在志贺菌属中的功能。方法使用λ-Red重组系统构建弗氏志贺菌2a 301株phoN1缺失突变株,通过比较蛋白质组学方法研究突变株与野生株的蛋白表达谱差异,并利用豚鼠角膜炎模型、HeLa细胞竞争侵袭实验评价两者之间的毒力差异。结果成功构建了phoN1缺失突变株,蛋白质学研究发现, phoN1缺失对其他胞内蛋白无显著影响,豚鼠角膜实验和HeLa细胞竞争侵袭实验证实,phoN1缺失不影响志贺菌属的侵袭能力。结论 phoN1在体外生存、侵袭宿主细胞过程中未发挥显著作用,其功能有待进一步研究。