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体外高通量评价过敏反应模型的建立及其对潜在过敏原异莲心碱的评价研究
目的：建立体外高通量评价过敏反应模型，并对中药单体化合物进行筛选，从而确定其中的潜在过敏原。方法建立稳定表达MrgX2的高通量药物筛选细胞模型。首先将重组质粒pmCherry-C1-MrgX2转染人胚肾HEK293细胞，通过G418筛选建立稳定表达人MrgX2的细胞株；再通过MrgX2特异性激动剂C48/80和拮抗剂2-APB检测细胞株的功能和稳定性，以Z因子确认高通量体系的稳定性和可靠性。采用上述模型对180个单体化合物进行筛选，以EC50、IC50、特异性及毒性确定该激动剂的功能性。结果 MrgX2细胞模型对特异性激动剂C48/80和特异性拮抗剂2-APB的EC50和IC50分别为2.7μg/mL和46.29μmol/L，MrgX2细胞模型第1代和第20代对激动剂的反应基本一致，该模型Z因子为0.78。筛选得到异莲心碱为阳性激动剂，其功能验证结果为：EC50为4.5μmol/L、IC50为39.47μmol/L，只能特异性激动MrgX2受体，且无细胞毒性。结论采用钙流方法可成功构建基于过表达细胞系 HEK293/MrgX2的体外高通量评价过敏反应模型，并且初步确定异莲心碱为潜在引发过敏反应的过敏原。
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RP-HPLC同时测定莲心总碱中的3种生物碱含量
目的:建立同时测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱含量的反相高效液相色谱法.方法:以Hypsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)为固定相,甲醇-磷酸盐缓冲液(73∶27,pH 9.0)为流动相,检测波长为286 nm及230 nm,流速1 mL·min-1.结果:3种生物碱分离良好,在20～700 μg·mL-1线性关系良好,日内、日间RSD在0.24%～4.83%,3种生物碱的加样回收率分别为97.9%,98.4%,98.1%.利用该方法测定了不同批次不同方法提取的莲心总碱中3种生物碱含量,结果显示莲心总碱的甲醇提取方法优于乙醇提取方法.结论:本法简单、快捷、适合于测定莲子心中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量.
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影响莲心总碱中甲基莲心碱稳定性因素的试验研究
莲心总碱是从中药莲子心中提取的总生物碱,主要为莲心碱(liensinine)、异莲心碱(isoliensinine)及甲基连心碱(neferine),其中甲基莲心碱含量高[1],它们的主要药理作用有降血压、抗心律失常、抗心肌缺血、抗血小板聚集等[2-4].
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异莲心碱防止高血压大鼠左室肥厚的可能机制
背景 既往报告异莲心碱是从莲子心中分离的一种双苄基喹啉生物碱单体,具有抗心律失常、Ca2+拮抗及阻断α受体作用,对高血压左室肥厚有不同程度的改善.高血压左室肥厚心肌肌浆网钙泵(SERCA)活力较正常心肌降低.目的 探讨异莲心碱对高血压大鼠左室肥厚及SERCA活力的影响.方法 将二肾一夹肾血管性高血压大鼠(RHR)模型,随机分为3组:正常对照组、肾血管性高血压大鼠对照组(未治疗RHR组)和异莲心碱治疗组.在异莲心碱治疗组持续给药10周后,分别测定各组大鼠的血压、左室质量/体质量,以及左室心肌SERCA活力.结果 治疗后,异莲心碱治疗组血压(136.4±14.6)mm Hg较未治疗RHR组(189.8±4.4)mm Hg显著降低(P＜0.01);异莲心碱治疗组左室质量/体质量(2.23±0.43)也较未治疗RHR组(2.93±0.52)显著降低(P＜0.05);异莲心碱治疗组左室心肌SERCA活力[(0.91±0.18)μmol/(g protein·min)]较未治疗RHR组[(0.61±0.23)μmol/(g protein·min)]显著升高(P＜0.05),但仍较正常对照组[(1.32±0.18)μmol/(g protein·min)]低(P＜0.01).结论 异莲心碱能降低RHR的血压,减低RHR的左室质量/体质量,对高血压左室肥厚具有一定的防治作用;其机制可能与异莲心碱能升高RHR肥厚心肌肌浆网SERCA活力,改善心肌细胞内钙超载有关.
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HPLC法测定莲子心提取物及其胶囊剂中三种主要生物碱的含量
目的 建立HPLC法同时测定莲子心提取物中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量.方法 采用Hedera ODS-2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.05％三乙胺溶液(72.5∶27.5);检测波长:283 nm;柱温:25 c℃;流速:1.0ml ·min-1.结果 3种生物碱分离良好,莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱分别在3.92 ～ 117.60、3.84～ 115.20、5.44～ 163.20μg ·ml-1范围内呈现良好的线性关系.利用该法测定莲子心提取物及其胶囊剂中生物碱的含量,平均总碱含量高于76％.结论 该测定方法准确性高、重复性好、专属性高,可用于同时测定莲子心提取物及其胶囊剂中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量.
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异莲心碱对苯肾上腺素诱导猪冠脉平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨异莲心碱(IL)对苯肾上腺素(Phen)诱导猪冠脉血管平滑肌细胞(CASMCs)增殖作用的影响及其机制.方法改良MTT比色法、免疫组织细胞化学技术和Western Blotting等方法.结果 Phen(0.1 μmol·L-1)明显诱导CASMCs增殖,生长因子、原癌基因与hsp70蛋白表达增多.IL(0.03-3 μmol·L-1)浓度依赖性地抑制Phen促猪CASMCs增殖作用.IL(0.1 μmol·L-1)可抑制Phen诱导的PDGF-β和bFGF的蛋白表达增多,并可抑制c-fos, c-myc和hsp70蛋白表达增多.结论 IL具有抗Phen诱导猪CASMCs增殖的作用,其抗增殖机制与抑制生长因子PDGF-β,bFGF及原癌基因c-fos,c-myc和hsp70的增强表达有关.
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异莲心碱对百草枯诱导的小鼠急性肺损伤及肺纤维化的保护作用
目的 探讨异莲心碱对百草枯(PQ)诱导的小鼠急性肺损伤及肺纤维化是否有保护作用.方法 一次性给不同剂量PQ分别制备小鼠急性肺损伤模型(45 mg·kg-1, ip)和肺纤维化模型(100 mg·kg-1, ig).异莲心碱在给PQ前1 d开始给予至实验结束.实验分空白对照组、模型组(PQ)、单用异莲心碱组及异莲心碱治疗组(异莲心碱+PQ).急性肺损伤模型组给予PQ后第8,24及48 h观察异莲心碱(20 mg·kg-1, ig, 每天3次)对血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.肺纤维化组给予PQ后14 d观察异莲心碱(10, 20, 40 mg·kg-1, ig, 每天2次)对肺组织羟脯氨酸含量、肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.同时采用HE染色方法观察两模型在上述各时间点的肺组织病理变化.结果 在急性肺损伤模型中,与空白组比较,模型组的肺组织出现充血、出血、炎性渗出及水肿等病变,血浆和BALF中的SOD活性明显下降,MDA水平明显升高,而血浆中的ALP活性显著升高;与模型组比较,异莲心碱治疗组的肺组织炎症反应减轻,血浆和BALF中SOD活性明显升高,血浆中ALP活性以及血浆和BALF中MDA含量明显降低;单用异莲心碱以上指标无明显作用.在肺纤维化模型中, 一次性给PQ 14 d后,与空白组比较,模型组肺组织出现肺间质增厚和胶原纤维增生等病理变化,肺组织中羟脯氨酸含量明显升高[(2.44±0.33 )vs (1.26±0.10 )mg·g-1湿组织];与模型组比较,异莲心碱10, 20和40 mg·kg-1治疗组间质炎症及肺纤维化病变有所改善,肺组织中羟脯氨酸含量显著减少[分别为(2.11±0.21), (1.94±0.24)和(1.89±0.26) mg·g-1湿组织];与模型组比较, 异莲心碱40 mg·kg-1治疗组肺组织中TGF-β1和MMP-2的表达明显降低.结论 异莲心碱对PQ诱导的急性肺损伤及肺纤维化具有一定的保护作用.
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对《中国药典》2015年版一部莲子心含量测定方法的改进
目的:改进并优化莲子心中有效组分莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱的含量测定方法.方法:80％乙醇浸泡30 min,超声处理30 min进行提取,采用TSKgelODS-100V(4.6 mm×250 mm,5μm)柱;流动相为乙腈-0.015 mol·L-1十二烷基磺酸钠溶液(取十二烷基磺酸钠0.41 g,加水100 mL使溶解)-冰醋酸(54∶ 45∶1);流速1.0 mL·min-1;检测波长230 nm,柱温35℃.异莲心碱、甲基莲心碱含量以莲心碱计.结果:莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱能得到较好分离.进样量在0.050 04 ～1.251 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r =1.000 0(n=7),平均回收率为88.6％,RSD=1.5％ (n =6).修改后方法对莲心碱的提取率是药典方法的192％.结论:本法比药典方法提取率高,所用试剂毒性小且操作简便,HPLC图谱分离好,测定准确、稳定、重复性好,可用于市售莲子心的质量评价.
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莲子心生物碱类成分的大鼠在体单向灌流肠吸收
目的 考察莲子心提取物中莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱3种生物碱类成分在大鼠的肠吸收性质.方法 以酚红为标示物,运用在体单向肠灌流模型并采用HPLC测定莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱在大鼠十二指肠、空肠、回肠及结肠灌流液中的浓度变化.结果 莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱在全肠道均有吸收,且吸收存在饱和现象.与低浓度比较,3种成分在中、高浓度下的吸收速率常数(K)和/或有效渗透系数(Peeff)大多存在显著性差异(P＜0.05).在各肠段的吸收中,莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱均以回肠和结肠的吸收较好,而在十二指肠和空肠的吸收大多无显著性差异(P＞0.05);在中浓度(117.3μμg· mL-1)组,结肠中以甲基莲心碱吸收好,其他肠段的Ka和Peeff大小依次是:甲基莲心碱＞莲心碱＞异莲心碱.结论 莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱在机体内的转运方式可能是主动转运或促进扩散.
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异莲心碱的药理作用研究进展
异莲心碱是从睡莲属植物莲成熟种子的干燥幼叶及胚根（即莲子心）中提取分离出来的一种双苄基异喹啉类酚性生物碱，与甲基莲心碱、莲心碱等同为莲子心提取物中的主要活性成分，具有类似的化学结构。其药理作用十分广泛，主要集中在心血管疾病方面。另外，异莲心碱在抗氧化、抗增殖、抗局部缺血、抗肿瘤方面也有一定的效果，具有广阔的开发应用价值。
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异莲心碱对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的研究
目的:探讨异莲心碱对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化的作用.方法:选取昆明种成年小鼠50只,随机将其分为空白组、模型组、异莲心碱低剂量组(10 mg/kg)、高剂量组(20 mg/kg)及维生素C(Vitamin C)对照组,测定小鼠体重和肝脏指数,以小鼠血清和肝脏组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及 MDA 含量为指标,考察异莲心碱在体内的抗氧化性能.结果:与空白组比较,模型组小鼠体重和肝脏指数明显下降,为32.87 g和3.87 mg/g;血清和肝脏组织 SOD和GSH-Px 活性明显降低,其值分别为247 U/ml、408 U/ml和358、319 U/mgpro;MDA含量为20.62 nmol/ml和13.01 nmol/mgpro,明显增加(P＜0.01);与模型组比较,异莲心碱20 mg/kg可明显拮抗小鼠体重和肝脏指数的降低、增强血清和肝脏组织 SOD和GSH-Px 活性、减少 MDA含量(P＜0.01),其值分别为36.29 g,4.53 mg/g,305、459 U/ml,438、355 U/mgpro和16.47 nmol/ml.异莲心碱低剂量组小鼠肝脏组织GSH-Px 活性为333 U/mgpro,与模型组比较差异无统计学意义.结论:异莲心碱能显著提高D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化能力.
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莲心季铵碱的结构解析与鉴定
莲子心为睡莲科莲属植物莲Nelumbo nuciferaGaertn种子的幼叶及胚根收载于2000年版<中华人民共和国药典>Ⅰ部.莲子心味苦性寒,具有清心去热、固肾涩精的功效,用于心烦,目赤肿痛,遗精等症的治疗.临床报道其清心火、平肝火、泻胃火、降肺火,可治疗老年人心烦失眠、青年人心火亢盛的高血压.莲子心主要含有莲心碱(liensinine)、异莲心碱(isoliensinine)、甲基莲心碱(neferine)[1]、莲心季铵碱(lotusine)、荷叶碱(nuciferine)和前荷叶碱(pronuciferine)[2,3]等,均为异喹啉类生物碱.
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离子对RP-HPLC法测定不同产地莲子心中甲基莲心碱的含量
莲子心为睡莲科植物睡莲Nelumbo nuciferaGaertn的成熟种子中的干燥幼叶及胚根,具有清心安神、交通心肾、涩精止血之功效[1].<中华人民共和国药典>2000年版,莲子心项下只有显微鉴别和一个生物碱的显色反应.莲子心中主要成分为莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱.
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大孔吸附树脂对莲子心中有效成分的分离纯化研究
目的 研究大孔吸附树脂吸附分离莲子心中莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的工艺条件及参数.方法 考察了AKS-W、AB-8和H214树脂对莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的静态及动态吸附性能,并采用HPLC定量分析莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱.结果 AKS-W树脂对莲子心中有效成分有较好的吸附分离效果,提取物中莲心碱、异莲心碱及甲基莲心碱的质量分数分别提高到10.2%、6.7%和11.9%.结论 大孔型非极性吸附树脂AKS-W对莲子心中有效成分是一种较为理想的分离介质.
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异莲心碱抗实验性心律失常作用及对豚鼠心肌动作电位的影响
采用4种药物及冠状动脉结扎诱发的在体动物心律失常模型，比较了异莲心碱和奎尼丁的抗心律失常效果，证实了异莲心碱对抗多种实验性心律失常，且作用优于奎尼丁。采用标准微电极法，研究了异莲心碱对豚鼠右心室乳头状肌的快、慢反应动作电位的影响，结果表明异莲心碱降低APA、Vmax，缩短APD50。提示其抗心律失常作用机制可能与阻滞Ca2+、Na+电流有关。
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莲子心总碱缓释片体外释放度试验
目的考察莲子心总碱缓释片体外释放度.方法模拟人体体内环境,用紫外分光光度法测定莲子心总碱的体外释放度.结果莲子心总碱释药方程:log(100-Rn)＝2.112-0.128t(F=219.310,P<0.001),r=-0.982(P<0.001),T50=3.233 h,Td=4.274 h,Kr=0.128 h-1.结论莲子心总碱缓释片体外释药符合一级释药模式,具有缓释特点.
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异莲心碱的体外抗氧化活性
目的研究异莲心碱对氧自由基的清除作用及其对脂质过氧化反应(LPO)的抑制作用.方法羟自由基由Fenton体系产生,超氧阴离子自由基由邻苯三酚自氧化法产生,通过比色法测定LPO的终产物-丙二醛(MDA)的相对含量来反映异莲心碱对LPO的影响.结果异莲心碱对羟自由基和超氧阴离子自由基有较强的清除作用,达到50%清除率所需药物浓度(EC50)分别为0.90,1.82 mg/ml,可抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化反应,EC50为0.67 mg/ml.结论异莲心碱对氧自由基有清除作用,对脂质过氧化有抑制作用,其活性与剂量呈正相关.
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核磁共振谱分析莲子心中酚性生物碱的结构
目的分析莲子心中酚性生物碱的结构.方法运用1HNMR、13CNMR、2D-NMR等核磁共振分析技术,对上述3种生物碱的结构作了详细的剖析.结果莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱均属于双苄基异喹啉类生物碱.结论莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱是莲子心中的主要生物碱,对心血管系统具有明显的作用.
关键词： 莲子心 莲心碱 异莲心碱 甲基莲心碱 1HNMR/13CNMR/2D-NMR -
近年来异莲心碱化学和药理的研究进展
综述近年来中药莲子心所含异莲心碱化学和药理的研究进展.系统查阅国内外相关文献和专利,对莲子心中酚性生物碱异莲心碱(Isolien)的提取、分离和鉴定、定量分析方法,以及生物活性和作用机制等方面的研究进展进行分析归纳.
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异莲心碱对大鼠CYP3A酶活性的影响
目的:探讨异莲心碱对CYP3A酶活性的影响,以了解异莲心碱与CYP3A酶底物合用药时可能产生的相互作用.方法:①建立体外肝微粒体混合酶代谢体系；②以睾酮作为底物探针,用HPLC建立检测CYP3A酶代谢活性的方法,考察体外代谢体系的佳孵育条件；③将不同浓度异莲心碱分别与睾酮共同孵育于肝微粒体代谢体系中,测定在有或无异莲心碱存在下睾酮的减少量,以评估异莲心碱对CYP3A酶代谢的影响.结果:在肝微粒体孵育体系中,睾酮体外代谢的佳孵育条件为底物浓度200μmol/L,代谢时间210 min.异莲心碱对CYP3A酶抑制作用较弱,IC50＞1 000 μmol/L.结论:异莲心碱对CYP3A酶无显著影响,可以与其底物联合用药.
