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一起食物中毒的致病性弧菌检验
2000年10月22日~24日,在南京市举办了全国警犬观摩会,22日晚约60人就餐,餐后6 h左右 ,陆续有人发生不同程度的呕吐、腹痛、腹泻、水样粪便等急性肠胃炎症状,至23日晚为止 ,共计38人到医院就诊.经流行病学调查及实验室研究证实,是一起由副溶血性弧菌和溶藻弧菌引起的食物中毒,现将结果报告如下.1 材料与方法标本粪便6份,呕吐物1份,剩余食物(盐水鸭)3份. 1.1 主要试剂与仪器 API鉴定系统(法国梅里埃),rapid ID 32E试剂条. 其余试剂为干粉培养基购自上海市疾病预防控制中心培养基室,微量生化管购自杭州天和微生物试剂有限公司.1.2 致病菌检测与鉴定所有检样均按<食品卫生微生物检验方法>GB 47 89-1994[1]及<卫生防疫检验>[2]做沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、致病性孤菌的检测和鉴定.
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在食品微生物检测和鉴定中应用的一种质谱新技术
基质辅助激光解析电离(MALDI)是近年来发展的一种新的软电离技术,常与飞行时间质谱(TOF-MS)联用,称为基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS).它具有快速、灵敏和高通量等特点,被广泛应用于生命科学及其他领域.全细胞或细胞裂解产物经MALDI-TOF-MS分析得到的指纹图谱可完成对细菌、真菌及病毒的检测及鉴定.
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应用PCR-反向斑点杂交法快速检测和鉴定常见医学真菌
近年来,机会性真菌感染呈不断上升趋势,这主要归因于器官移植、骨髓移植的广泛开展;艾滋病患者的大量增多及皮质类固醇激素、免疫抑制剂和广谱抗生素的应用等;另外不同真菌菌种对抗真菌药物具有不同的天然耐药性,这就不仅要求实验室快速检出感染的病原菌,而且还应准确鉴定到种,才能使临床采取有效措施控制感染.目前,真菌的分离培养鉴定仍是主要诊断方法,但存在耗时长且不敏感等问题.为建立快速、敏感、特异的检测与鉴定方法,我们用真菌通用引物扩增广范围医学真菌的细胞色素P450羊毛固醇-14α-去甲基化酶(L1A1)基因的1个片段(约350bp).通用引物以生物素标记,结合种特异性探针进行反向斑点杂交,可鉴定临床常见的8种真菌,其中包括近年来新发现的都柏林念珠菌.
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PCR-变性梯度凝胶电泳检测和鉴定解脲脲原体和人型支原体
为方便支原体病研究我们建立了解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)通用的PCR-变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)检测技术.
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PCR-焦磷酸测序法快速检测和鉴定临床常见致病菌的研究
焦磷酸测序(Pyrosequecing)技术为近年新一代短片段DNA序列分析技术.国外主要用于分子流行病学的单个核苷酸多态性位点大容量快速检测[1]和临床微生物菌种鉴定与分型[2-3],但国内尚未开展.本研究用该技术对针对不同细菌的独特分子标志,设计基于PCR技术的快速菌种鉴定方法,以提供从分子水平快速鉴定菌种的新的可靠方法.
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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测尿液中大肠埃希菌方法的建立
大肠埃希菌(Escherichia coli,E. coli)是引起尿路感染的常见病原菌,其病原学诊断主要依据细菌培养的结果[1],然而常规的培养法检测和鉴定大肠埃希菌需2~3 d的时间,常常延误诊断和治疗.
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GC/MS在苯丙胺类药物分析中的应用
苯丙胺类药物的滥用已经成为世界严重的社会问题之一.在过去的几年中,大量的文章报道了血、尿及毛发中苯丙胺类药物的检测和鉴定.通过使用不同的检测器,低检测浓度已经达到了ng@ml-1.这里我们主要介绍GC/MS在苯丙胺类药物分析中的应用以及还存在的一些不足之处.
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李斯特菌FTA卡-16S rRNA测序法鉴定
单增李斯特菌的传统鉴定方法主要是进行生化反应,辅以溶血实验和小鼠毒力试验.这些传统鉴定方法操作复杂、耗时长,鉴定结果易受各种因素影响.近年来各种分子生物学方法开始逐步应用于李斯特菌的检测和鉴定[1-7],其中适用于细菌鉴定的方法只有脉冲电场凝胶电泳(PFGE)法、随机扩增DNA多态性(RADP)法、测序法,但由于操作比较繁琐、操作技术和分析能力要求较高,在实际检测中应用并不多.
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ERIC-PCR鉴定单核细胞增生利斯特氏菌
近年来,由于单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes,以下简称单增利斯特菌)污染食品,导致利斯特病的发病率日趋上升,对食品中的单增利斯特菌做出快速的检测和鉴定,是预防利斯特病的有效方法.目前,对单增利斯特菌的鉴定一直采用传统的国标生化方法,费时、费力,并难以与属内的无害利斯特菌(L.innocua)区分.为寻找单增利斯特菌快速检测方法,本文作者收集了6种、62份食品样本,从中分离单增利斯特菌可疑菌落,用肠杆菌基因间一致重复序列聚合酶链反应(Enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence,ERIC-PCR)法加以鉴定,并与国标生化(GB)法进行比较,以探讨ERIC-PCR法快速鉴定单增利斯特菌分离株的可行性.
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双歧杆菌的分子生物学检测和鉴定方法进展
双歧杆菌传统的检测和鉴定需要分离、培养,这些方法常可影响其结果的正确性.目前,分子生物学的广泛应用为双歧杆菌的检测和鉴定提供了新方法.本文对其中主要的依赖rRNA基因的序列分析、脉冲场凝胶电泳、核糖体分型和随机扩增多态DNA等技术作一综述.
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043 毒力基因stx1、stx2、eae、ehxA和自凝粘附素的多重聚合酶链反应法直接检测和鉴定产志贺毒素大肠埃希菌
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实时荧光定量PCR快速鉴定五种常见念珠菌
近年来,深部真菌感染的发病率和死亡率呈上升趋势,其中由念珠菌属引起的感染占有较高比例,耐药程度亦较高~([1-2]).临床上深部念珠菌感染的实验室检测和鉴定均存在一定不足.本研究旨在建立实时荧光定量PCR快速鉴定五种常见念珠菌的方法.
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免疫色谱检测法在结核分枝杆菌检测和鉴定的评价
结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染性疾病.近年来,在世界范围内有复活、增加的趋势[1~2].
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悄然兴起的基因诊断
基因诊断是在分子生物学基础上建立的一种新的诊断技术,可用于多种疾病的诊断。遗传病是指遗传物质(基因)异常所导致的一类疾病。因此遗传病的诊断,本质和直接的是检测出异常的基因,即基因诊断。但在分子生物学技术建立之前,我们无法鉴定基因的分子缺陷,只能通过缺陷基因所导致的表型症状加以识别,或者根据缺陷基因所引起的生化异常的测定作出诊断。就遗传病的本质而言,这些诊断都属于间接诊断。随着分子生物学技术的发展,现在可以直接检测和鉴定缺陷的基因,使遗传病诊断从传统的表型诊断上升到基因诊断的水平。
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质谱技术在微生物检测和鉴定中的应用
目前常用的微生物鉴定方法都是基于微牛物的形态学、细胞牛理生化,以及核酸基础建立的.白20世纪90年代,微生物鉴定系统不断发展,自动化程度不断提高,但仍然是建立在传统的生理生化和核酸基础上.近年来,基于蛋白质组学的质谱技术凭借其高灵敏度、高通量、快速等特点在微生物检测和鉴定方面得到快速发展.
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱用于直接鉴定临床病理样本中微生物的研究
在临床微生物实验室,鉴定患者样本的微生物长期主要基于检测假定的目标微生物所表现出来的表型特征.革兰染色、菌落形态学、镜检、选择性培养基上的生长情况和各种生化试验是传统鉴定方法的主要手段.因为这些方法一般需依赖于相关微生物的活性代谢过程,因此,一般需要一个较长的培养过程.而临床微生物检测需要对感染患者的检测样本进行快速鉴定以及时给予适当的对症治疗,所以传统方法明显不能满足临床检测需要.分子诊断方法,主要是16S核糖体RNA测序或实时PCR基因检测方法.经过多年的发展并已被普遍应用于微生物的鉴定,是一种重要的微生物鉴定方法.
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抗体鉴定问题的解析
1前言抗体检测和鉴定是免疫血液学的基础.抗体鉴定可以作为抗体临床重要性判定的指南,并为选择合适血液输注提供信息.在某些情况下,抗体鉴定可能是一个困难和费时的过程,因而可能延误患者的治疗.已经有抗体检测、ABO血型和D定型的操作指南,但很少有抗体鉴定必要程序的指南.
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一个带有HLA-DRB1*04序列基序的新等位基因DRB1*1457
人类白细胞抗原(HLA)是至今所知人类复杂的免疫遗传多态系统.截止2006年4月,已被世界卫生组织HLA命名委员会正式命名的HLA-DRB基因座位上的等位基因数为527,DRB1等位基因数为445.为了提高在骨髓库中找到HLA配合的无关供者的机会,目前国际通用的策略是在了解本地区人群HLA分布特征的基础上,合理地增加不同来源的骨髓供者登记的数量.因此检测和鉴定本地区骨髓供者中新的等位基因就成为中国造血干细胞捐献者资料库建设中很重要的研究课题.本文在四川地区发现一个骨髓捐献者家庭带有HLA-DR新等位基因,近被世界卫生组织(WHO)HLA因子命名委员会正式命名为HLA-DRB1*1457,现报告如下.
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谱技术在临床常见呼吸道病原菌检测和鉴定中的应用进展
质谱(mass spectrometry)技术是一种测量离子荷质比(电荷-质量比)的分析方法,可用来分析同位素、元素成分及有机物构造等。质谱仪早的临床应用主要在于检测一些生物标记物以帮助诊断癌症和遗传疾病等。20世纪80年代,日本岛津公司的田中耕一发明了基质辅助激光解析电离(ma-trix assisted laser desorption ionization,MALDI)技术,使得质谱能够检测生物大分子[1,2],该发明在2002年荣获诺贝尔奖。质谱技术的诞生和发展奠定了用蛋白质指纹图谱鉴定微生物的基础,通过检测未知微生物的蛋白质指纹图谱并与质谱图数据库中特征性谱图进行比对,从而对待测微生物进行快速鉴定。由于测定的图谱中主要的分子离子峰为菌体内高丰度,且表达稳定、进化保守的核糖体蛋白,因而此法不但鉴定结果精确度高,且能借助聚类剖析获取微生物间的进化与亲缘关系。
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MALDI TOF MS在细菌检测和鉴定中的应用
近年来质谱技术有了快速的发展,新的软电离技术,基质辅助激光解析电离和电喷雾电离使得质谱能够对核酸或蛋白质,多肽等生物大分子进行微量分析,且具有高灵敏度和高质量检测范围,通过串联质谱的分析还可以得到结构信息.MALDI TOF MS能给出微生物多方面的信息,包括分子量和结构信息等,用于微生物的各种研究中,如根据细菌的组成成分获得指纹图谱检测和鉴定细菌,细菌体内含有大量的生物标志分子能用于细菌的化学分类和鉴定.
关键词: MALDI TOF MS 细菌 应用 检测和鉴定