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结核分枝杆菌和艾滋病病毒双重感染患者治疗依从性检测方法及影响因素
我国是全球22个结核病高负担国家之一,结核病的发病人数居世界第二位.据2010年世界卫生组织(WHO)结核病控制报告显示,我国结核病发病率为96/10万,估算新发结核病人130万,结核病发病人数中,艾滋病病毒感染率为1.5 %,新发结核患者中有2万例患者为HIV抗体阳性[1].
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结核分枝杆菌持留生存机制的研究进展
全球约有1/3人口被结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染,但只有10%的感染者可发生结核病,而绝大多数足以潜伏感染形式存在.MTB的潜伏感染决定于MTB能在宿主体内以持留状态存在的能力.处于持留状态的MTB能抵抗巨噬细胞的吞噬杀灭作用,并能耐受通常对生长繁殖期的MTB具有杀灭作用的抗结核药的杀灭作用[1].因此,研究MTB进入代谢或休眠持留期和在持留状态下存活的机制,进而寻找抑制其进入持留期和杀灭结核持留菌的方法,对于控制和根除结核病具有重要的临床意义.
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以PCR为基础的结核分支杆菌DNA分型技术及其应用
1998年结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组测序工作宣告完成,这就为建立分子生物学方法鉴定结核分枝杆菌并对其分型提供了更有力的依据.H37Rv整个基因组由4,411,529对碱基组成,含有约4000个基因,整个基因组内有56个区与插入序列(ISs)同源[1].
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结核分枝杆菌药物敏感性表型检测方法的研究进展
结核病是世界性的威胁人类健康的传染性疾病之一,近年其发病率呈明显上升趋势,耐药甚至耐多药结核病的出现是结核病控制不良的重要原因之一.结核分枝杆菌(MTB)药物敏感性的早期、快速检测是耐药结核病早期诊断和治疗的关键.
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噬菌体生物扩增法检测痰液结核分枝杆菌的临床应用
结核病的细菌学检查是发现传染源的主要途径和手段,是结核病诊断和化疗的重要依据,也是考核、评价治疗效果的可靠标准[1].然而,传统的结核分枝杆菌分离培养方法需时较长(2~8周),涂片敏感度和特异度不高,涂片中菌体数要达到104~103个/m]时,才可检出[2].随着耐药结核病尤其是MDR-TB迅速增加[3],现有的细菌学实验方法远不能满足临床要求.近年来分枝杆菌噬菌体法在结核病实验研究中取得巨大进展,其中引人注目的是PhaB[4]检测结核分枝杆菌,但其检测的实际意义、影响因素,尤其在判断疗效的作用报道不多.本研究对前期的实验结果进行分析,评价检验结果的一致性,并与其他细菌学检测结果结合,评估动态检测在疗效评价中的作用.
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结核分支杆菌基因组DNA指纹技术在结核病流行病学中的应用
结核分支杆菌基因组DNA指纹技术,可以在种、株水平对结核分支杆菌进行鉴定,因此在结核病学的多个领域,尤其是流行病学中有很大的应用价值。 一、结核分支杆菌基因组DNA指纹技术及标准方法的确立 将结核分支杆菌的基因组DNA采用特殊的技术切割成大小不同的片段,电泳分离,就可以清楚地看到像人的皮肤指纹一样具有特征性的条带。这就是结核分支杆菌的DNA指纹。建立结核分支杆菌DNA指纹的主要技术有:限制性片段长度多态性(RFLP)方法和聚合酶链反应(PCR)方法。RFLP方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如插入序列IS6110[1]、IS1081[2],多态性富含GC重复序列[3],(GTG)5寡聚脱氧核苷酸[4]等,利用限制性内切酶酶切特征性片段上的某一位点,电泳分离、Southern blot而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法具有良好的特异性和稳定性,已成为结核分支杆菌株水平鉴定的主要方法[5,6]。PCR方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如IS6110、DR[7]、16S rDNA[8],设计特异的引物进行多种方式的聚合酶链反应,电泳分离,而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法简单快速,但特异性和稳定性不及RFLP方法,目前作为RFLP方法的补充。
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结核分枝杆菌RPF蛋白的生物学特性及其在结核病疫苗研究中的应用
复活促进因子(resuscitation-promoting factor,RPF)初是在藤黄微球菌(M.luteus)中发现,该因子可以在g×10-12水平以自分泌和旁分泌形式促进休眠菌的复活和生长,其机制可能是参与了细胞间的信号转导[1].RPF除能促使休眠菌复活和生长以外,对正常生长的细菌也有效.由于RPF的功能类似于真核生物的生长因子,所以被称为细菌的生长因子[2].目前已查明RPF氨基酸的顺序并确定了编码这种蛋白的基因,相似的RPF基因广泛分布在碱基G和C高比率含量的革兰阳性菌中.
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噬菌体生物扩增法及其在结核分枝杆菌研究中的应用
噬菌体生物扩增法(phage amplified biologically assay,PhaB)是由Wilson等[1]于1997年建立.该技术简便、快速,非常适合缓慢生长的结核分枝杆菌(MTB)的实验研究.近年来,该技术发展迅速,已用于MTB耐药性的快速测定和临床标本中的MTB检测研究[1,2].我国也在"十五"攻关课题"耐多药结核病的快速检测技术研究"中采用该方法,并且取得了很大进展.现就PhaB检测方法、研究进展情况综述如下.
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以数目可变的串联重复序列和结核分枝杆菌散在分布重复单位为基础的基因分型方法在结核分枝杆菌流行病学研究中的应用
结核病是一种严重影响人类健康的传染病.全球有近1/3人口感染了结核分枝杆菌,主要分布在发展中国家.如果不能及时和有效地控制结核病传播,在今后20年内,发展中国家将会有2亿人罹患结核病.在我国,三分之一人口已感染结核分枝杆菌,受感染人数超过4亿,其中约有10%发生结核病.如果不采取有效的措施,在未来十年内预计有3 000万人发生结核病.当前结核病控制面临的主要困难有:贫困人口的结核病发病率高、发现率低、耐药结核菌感染增多,而伴随着城市化过程的人口流动,更加剧了结核病在人群间的传播.为了有效地控制结核病传播,除了在全国范围内实施面向贫困人群的结核病控制专项项目外,还需建立完整、准确的结核病流行病学监测体系.分子流行病学是监测传染病传播的有效途径,它是建立在"感染相同菌株的患者有相同的传染源即存在分子流行病学联系"假设基础之上的,而分子流行病学在结核病基因分型中的应用,与传统流行病学相比能更准确地预测疾病的暴发流行及其传播模式.
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结核分枝杆菌DNA疫苗研究进展
20世纪90年代初,有关质粒DNA诱导对其编码的抗原的免疫反应报道之后,DNA疫苗便成为疫苗技术增长迅速的领域[1,2].现将DNA疫苗的概况及结核分枝杆菌DNA疫苗的研究现状介绍如下.
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结核分支杆菌耐药性快速测定方法及其评价
近年来,结核分支杆菌(MTB)耐药性问题日趋严重,已成为结核病控制的三大难题之一.由于传统的耐药性测定方法需时较长,远不能满足临床治疗的需要.因此,寻找快速、准确的耐药性测定方法已成为结核基础研究领域的一个重要课题,也是临床实践中亟待解决的问题[1,2].文中就耐药性快速测定的几种新方法研究进展综述如下.
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结核分枝杆菌embB基因306位点突变与耐药的相关性研究
embB基因突变,特别是其306位点(embB306)的点突变一直被认为是结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的重要原因.但是,Hazbon等对来自世界各地的1020株菌株进行分析后认为,embB306突变不直接引起结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性,而是容易产生对任何药物的耐药性.Plinke等报道,embB306位点突变只发生在乙胺丁醇耐药菌株中,从而说明该位点突变与乙胺丁醇耐药有关.可见embB306位点突变与乙胺丁醇耐药的关系还存在着较大的分歧.
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Newly developed drugs invented to treat tuberculosis in clinical trial
Tuberculosis (TB) is a leading cause of morbidity and mortality in more than one-third of the world population.Its impact on global health is a result of decades of neglect for such an important infectious disease,lack of resources for national TB control programs,poor case detection,and inadequate/inappropriate therapy in high-burden countries.The worldwide dissemination of multidrug (MDR) and extensively drug resistant (XDR) Mycobacterium tuberculosis poses a serious threat to human health due to inadequacy of long and cumbersome tuberculosis (TB) therapy.Treatment regimens consist of at least four drugs with different mechanisms of action.Several new molecules in clinical development hasencouraged the scientific community to discover new drug targets and new drug candidates.Therefore,new drugs are urgently needed to shorten and improve the treatment course in drug resistant TB,and to minimize the occurrence of new infections and death.Nowadays,various new investigational drugs,such as bedaquine (TMC207),nitroimidazoles (PA-824,OPC-67683),diamines (SQ109),oxazolidinones (Linezolid,PNU-100480 (Sutezolid),ADZ5847),pyrroles (LL3858) and fluoroquinolones (moxifloxacin and gatifloxacin),have entered clinical trials and are in progress to be developed for the treatment of MDR-TB.In this perspectivearticle,an overview of the new anti-TB drugs with different structures that are either being clinically used or in advanced stages clinical stages as well as of preclinical development are presented.This review provides snapshots of the efforts that are being made in the development of new drugs as lead anti-TB agents.Finally,it is crucial to improve the connection between research and development institutes,industries,drug contro 1 authorities,and intemational policv-making bodies to deliver efficacious therapies for patients who are suffering from TB.
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Usefulness of animal models for tuberculosis research-A review
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Cell-mediated immune responses are crucial in the protection against tuberculosis. In this study, we constructed epitope DNA vaccines (p3-M-38) encoding cytotoxic T lymphocyte (CTL) epitopes of MPT64 and 38 kDa proteins of Mycobacterium tuberculosis. In order to observe the influence of spacer sequence (Ala-Ala-Tyr) or ubiquitin (UbGR) on the efficacy of the two CTL epitopes, we also constructed DNA vaccines, p3-M-S(spacer)-38, p3-Ub (UbGR)-M-S-38 and p3-Ub-M-38. The immune responses elicited by the four DNA vaccines were tested in C57BL/6 (H-2b) mice. The cytotoxicity of T cells was detected by LDH-release method and by enzyme-linked immunospot assay for epitope-specific cells secreting interferon-gamma. The results showed that DNA immunization with p3-M-38 vaccine could induce epitope-specific CD8+ CTL response and that the spacer sequence (AAY) only enhanced M epitope presentation. The protein-targeting sequence (UbGR) enhanced the immunogenicity of the two epitopes. The finding that defined spacer sequences at C-terminus and protein-targeting degradation modulated the immune response of epitope string DNA vaccines will be of importance for the further development of multi-epitope DNA vaccines against tuberculosis.
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苍南县92株结核杆菌耐药情况分析
为了解苍南县结核杆菌耐药情况,我们于2001~2003年开展了全县范围的初、复治涂阳患者结核杆菌耐药情况的调查.
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免疫色谱检测法在结核分枝杆菌检测和鉴定的评价
结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染性疾病.近年来,在世界范围内有复活、增加的趋势[1~2].
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272株结核分支杆菌耐药性分析
目前控制结核病的主要手段仍然是化学疗法.但随着化疗药物的广泛应用,结核杆菌的耐药率日趋上升,尤其是日益增多的耐多药结核病(MDR-TB),给结核病的控制工作带来巨大困难.为了掌握武汉市结核病人的耐药情况,以便给临床医生制定有效的化疗方案提供依据, 对272例肺结核患者的结核分支杆菌培养阳性菌株,分别用INH、RFP、SM、EMB、PAS进行了药敏试验,结果报告如下.
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结核分枝杆菌耐利福平诊断试验的系统评价
目的 采用Meta分析的方法评价LiPA和phage-based assays法检测结核分枝杆菌耐利福平诊断试验的准确性.方法 通过检索PubMed、EMbase、CBMWeb、CSJD、CJFD数据库和其他方式广泛收集文献.根据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量,用Meta-Disc软件对其敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比等进行合并分析,并进行异质性检验,对无异质性的研究绘制SROC曲线.结果 终纳入42篇文献.(1)LiPA法检测结核分支杆菌耐利福平时,7个研究以BACTEC 460法为参考,合并敏感度0.98,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.992 4;6个研究以proportion法为参考,合并敏感度0.97,合并特异度1.00,SROC(AUC)=0.9961;3个研究以BACTEC 460、Proportion法作为参考,合并敏感度0.92,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9842;(2)噬菌体扩增法(商用)检测结核分枝杆菌耐利福平的7个研究,以BACTEC 460、Proportion法为参考,合并敏感度0.95,合并特异度0.95,SROC(AUC)=0.9842,(3)噬菌体扩增法(内部的)检测结核分支杆菌耐利福平的7个研究,以BACTEC460、比例法、绝对浓度法和电阻率法为参考,其合并敏感度0.98,合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9949;(4)荧光素酶噬菌体报告技术检测结核分枝杆菌耐利福平的7个研究,以BACTEC 460、比例法、绝对浓度法为参考,其合并敏感度0.98.合并特异度0.98,SROC(AUC)=0.9788.结论 现有研究证实:(1)采用分离培养时,噬菌体检测法在检测结核分枝杆菌耐利福平方面具有较高的敏感度和特异度,在提高耐多药结核病诊断准确性方面具有潜力.(2)LiPA在检测结核分枝杆菌耐利福平方面也具有较高的敏感度和特异度,但直接应用临床标本检测时敏感度似乎稍有下降.上述结果尚需更多设计严谨、科学的临床试验进一步证实.