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PCR-DGGE技术在肉制品中微生物分析中的应用
PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)是一种分析微生物区系的分子指纹技术。本文概述了PCR-DGGE的基本原理、发展和在食品微生物分析中应用现状,着重阐述该技术在评价肉制品中的细菌群落组成和动态变化、肉品微生物鉴定等研究领域中的应用以及该技术存在的一些缺点,并进一步展望DGGE技术在今后肉制品研究领域的应用前景。
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间隔区寡聚核甘酸分型技术(spoligotyping)的建立及其对结核分支杆菌菌株北京基因型的初步鉴定
目的:建立一种以PCR为基础的结核分支杆菌DNA指纹技术,即间隔区寡聚核甘酸分型技术(Spoligotyping),研究该方法在结核分支杆菌北京基因型鉴定中的应用,并探讨该方法在结核分支杆菌流行病学中的应用.
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分子工具在寄生虫学研究中的应用
现代分子技术对寄生虫的基础研究和应用研究都有着重要的影响,尤其是PCR相关技术有着更广泛的应用,因为PCR反应能够极其敏感的从少量的寄生虫材料中扩增到所需的DNA片段,另外高分辨率的电泳技术和基因组方法应用也越来越多.本文对核酸技术如聚合酶链式反应、突变扫描技术、指纹技术的发展和应用进行了综述,并着重强调了这些核酸技术在寄生虫方面的用途和潜力.
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分子流行病学在低收入、高负担国家的作用
分子流行病学的出现已经有约20年的历史,其出现的标志是1991年第1个分子菌株分型技术的问世.之后,很多种用于分型的替代技术被开发出来,并被不同程度的应用,其中基于IS6110的RFLP指纹技术、spoligotyping和MIRU-VNTR分型技术已经成功地发展为非常有价值的工具,用于监测和了解疾病在宿主人群中的发病过程.
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结核分支杆菌基因组DNA指纹技术在结核病流行病学中的应用
结核分支杆菌基因组DNA指纹技术,可以在种、株水平对结核分支杆菌进行鉴定,因此在结核病学的多个领域,尤其是流行病学中有很大的应用价值。 一、结核分支杆菌基因组DNA指纹技术及标准方法的确立 将结核分支杆菌的基因组DNA采用特殊的技术切割成大小不同的片段,电泳分离,就可以清楚地看到像人的皮肤指纹一样具有特征性的条带。这就是结核分支杆菌的DNA指纹。建立结核分支杆菌DNA指纹的主要技术有:限制性片段长度多态性(RFLP)方法和聚合酶链反应(PCR)方法。RFLP方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如插入序列IS6110[1]、IS1081[2],多态性富含GC重复序列[3],(GTG)5寡聚脱氧核苷酸[4]等,利用限制性内切酶酶切特征性片段上的某一位点,电泳分离、Southern blot而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法具有良好的特异性和稳定性,已成为结核分支杆菌株水平鉴定的主要方法[5,6]。PCR方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如IS6110、DR[7]、16S rDNA[8],设计特异的引物进行多种方式的聚合酶链反应,电泳分离,而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法简单快速,但特异性和稳定性不及RFLP方法,目前作为RFLP方法的补充。
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HPLC-Q-TOF/MS指纹技术对比分析附子配伍炙甘草前后化学组分变化
目的 分析附子-炙甘草配伍前后化学组分变化,探讨附子配伍炙甘草减毒的机制.方法 采用HPLC-Q-TOF/MS分别对附子配伍炙甘草前后汤液进行化学对比研究.分别制备附子单煎液与附子炙甘草合煎液供试品溶液,在同一分析条件下,分别建立其HPLC-MS指纹图谱,并采用Q-TOF/MS检测.结果 从附子单煎液中指认出20种成分及其结构;从附子炙甘草合煎液中指认出32种成分及结构,其中4种成分来源于炙甘草,28种成分来源于附子,但附子配伍炙甘草前后汤液中生物碱成分种类和量差别均较大.结论 说明配伍炙甘草可能导致汤液中附子生物碱成分状态的改变,为附子-炙甘草配伍减毒机制的探讨提供了实验依据.
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从亲子鉴定存在的问题看标准化、规范化管理的重要性
亲子鉴定的应用与医学、生物学技术的发展水平密切相关.虽然我国涉及亲子鉴定的记载历史悠长,但实现对父权的认定却是近十几年的事情.我国自20世纪80年代中期开始,组织相容性抗原(HLA)及酶型、血清型检测技术的发展及应用,使亲权认定成为可能.20世纪80年代末,DNA指纹技术的开发,使得亲子鉴定手段从对蛋白质的分析水平提高到对遗传物质本身的检测分析水平.近年来,短串联重复序列(STR)的发现和应用得到了飞速发展,有成百上千个遗传标记待以开发利用.这些检测技术的发展,促进了亲子鉴定实验室各项设备的更新换代.同时,对成功案例的宣传,也使得人们对亲子鉴定的知识了解得更多更广.这些无疑给亲子鉴定工作的发展提供了一个广阔的天地,各鉴定机构亲子鉴定的数量都在逐年增长,有的更是翻倍增加.但仔细审视观察,我们的鉴定却也存在着许多危机,值得思考与探讨.
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随机扩增多态DNA指纹技术在检测院内感染中的应用
院内感染是目前现代医学界全球性突出问题,是患者入院后久治不愈的重要因素,也是导致院内病死率增加的重要原因之一.院内感染的多数病原对常用抗生素不敏感或耐药.这就造成疫情不易控制及治疗困难.国外学者利用随机扩增多态DNA指纹(RAPD)技术对细菌流行病学及分型进行研究具有分型率及分辨率高的特点[1].
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RAPD技术在微生物学领域的研究与应用
新型DNA指纹技术--RAPD(随机多态DNA)作为一种基因分析法,具有简便、重复性好、价格相对低廉等诸多优点,在无需预知靶基因DNA的情况下,可迅速得出多态性很好的DNA指纹图.目前,这种方法在细菌、分枝杆菌、真菌等领域中都已得到了广泛的应用.
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比较替吉环素和其他11种抗感染药物对215株多重耐药鲍曼不动杆菌分离株的体外活性
本试验比较替吉环素和其他11种抗感染药物对215株鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性.菌株为1990-2003年采集于欧洲和美国,包括散发菌株和流行菌株均有收录,但每次爆发流行仅收录1株,并由脉冲场凝胶电泳(PFGE)指纹技术确认为独立克隆.
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肿瘤微环境影响乳腺癌耐药蛋白转录调控的研究进展
乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)是ABC转运蛋白超家族G亚家族重要成员之一。该基因(Gene ID:9429)于1998年由Doyle等[1]应用mRNA指纹技术在人乳腺癌细胞株MCF-7/AdrVp细胞中首次克隆,又名ABCG2蛋白。BCRP能够将进入乳腺癌细胞内的多种化疗药泵出细胞外,如5-FU、阿霉素、托泊替康、甲氨蝶呤、喜树碱及多柔比星等,从而使细胞产生耐药性,在乳腺癌多药耐药方面有着不可忽视的地位。因此,研究其转录调控机制对逆转乳腺癌的多药耐药,提高化疗疗效具有十分重要的意义。目前,对于BCRP的调控方面研究甚少。研究表明,BCRP启动子的两个调节因素缺氧和雌激素受体(estrogen receptor, ER)[2-3]在控制BCRP表达方面发挥作用;另外,BCRP的转录调控还受到肿瘤微环境及多种转录因子、细胞因子和生长因子等的共同协调。
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DNA指纹技术在结核杆菌鉴定中的应用
结核分枝杆菌进行型别鉴定在结核病流行病学中具有重要价值,传统的分型方法因分型少或操作繁琐,且分型与传染活性、药物耐受性、毒力相关性之间的关系不明确,一直未得到认可.分子生物学分型方法是根据病原菌的遗传特征而区分的,有良好的特异性和稳定性.其中以DNA指纹技术较为常用.本文就此应用综述如下.
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依赖于STR的法医学DNA分型技术研究进展
DNA分型技术,又称DNA指纹技术 ,是对人类基因组中具有多态性的重复序列进行基因分型的技术.该技术首先出现在20世纪80年代中期,它的出现使法医学实验室根据一个人的体液进行个体识别的能力有了划时代的进步,从而摆脱以前依赖于血型、血清酶型和HLA等技术而无法对个体识别做出肯定结论的尴尬境况.在过去的16年里,现代分子生物学技术在法医遗传学中的应用使个体识别和亲权鉴定技术得到飞速发展, 现在分析样本所需DNA的量仅为1985年英国遗传学家Alec Jeffreys进行第一次DNA分型所需量的1/25~1/100;可被分析样本的范围也大大拓宽,包括了从血液到精斑、唾液、毛囊等任何含有基因组DNA的样本,甚至一些DNA严重降解的样本;同时,鉴定所需时间也大大缩短. 初,Alec Jeffreys进行DNA分型采用多位点DNA指纹技术,利用的是人类基因组中的一种被称为数目可变的串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTR),采用限制性内切酶切割VNTR附近的DNA区域再与特异性探针杂交产生多位点DNA指纹图谱,又称限制性片段长度多态技术(restriction fragment length polymorphism,RFLP).后来,随着对人类基因组认识的加深,出现了第二代DNA指纹技术,检测单个基因位点,又称DNA纹印技术 .检测技术也从RFLP的杂交发展到多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的扩增.在第二代DNA指纹技术中,从早检测人类基因组的VNTR,发展到现在的短串联重复(sh ort tandem repeats,STR),再到STR基因位点的多重PCR扩增和四色荧光技术,DNA在法医学中的应用逐步完善.对于几种DNA分型技术的比较见图1.
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指纹的奥秘
中国指纹技术比"四大发明"还早指纹博物馆专家介绍,中华指纹技术源远流长,是我国早于"四大发明"的一项伟大创造,据实物考证和史料记载,我国指纹运用早可追溯到史前新石器时代的陶器指纹画,在唐代乃至更远的秦代,古人就开始将指纹技术运用到案件侦破中.
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防治结核病研究的新进展(一)
结核病诊断学的进展痰涂片虽特异性高(>99%),但敏感性低(30%左右),且不能鉴别非结核分枝杆菌.痰培养的特异性与敏感性均较高,但需时太长.肺外结核病原诊断也非常困难.因此诊断技术目前被认为是在结核控制以及病例管理中的主要障碍.但20世纪80年代以来,由于BACTEC、聚合酶链反应(PCR)、核酸探针(DNA)、分枝杆菌指纹技术等先进技术的应用,结核病病原学诊断有了突破性进展.近几年又有不少新的办法和经验.
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DNA指纹技术及应用
DNA指纹技术是分子生物学各种新兴技术中的一种,目前已被广泛应用于法医学、疾病诊断、肿瘤研究等领域.本文就DNA指纹技术的建立、发展及其应用作一综述.