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卡介苗免疫治疗应用基础与临床研究进展
自从Robert Koch使用Mtb培养滤液疫苗(旧结核菌素)治疗人类结核病出现"郭霍现象"( Koch phenomenon)、许多患者临床表现恶化、少数患者死亡之后,结核病疫苗治疗研究受到重创,直到化疗药物的出现人们仍然未找到有效的免疫治疗方法.化疗药物的治疗效果和结核病控制策略的成功曾经使人们欣喜若狂,但20世纪80年代后结核病低流行率的西方国家结核病重新抬头和上升,随后全球耐多药结核病和广泛耐药结核病流行形势严峻[1],人们发现,化疗和管理还不能解决结核病治疗的全部问题,结核病的免疫治疗再次成为人们研究的热点[ 2].卡介苗(BCG)曾在人类抗结核病的斗争中发挥了重要的免疫保护作用,至今仍是我国预防儿童结核病的重要武器之一.由于BCG在结核病预防中的肯定作用[1-4],笔者从1988年以来一直致力于结核病化疗同时加用BCG免疫治疗研究.
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结核菌素试验的应用
结核菌素是由结核杆菌蛋白质制成的一种特异性反应原,1891年正式命名结核菌培养滤液为结核菌素(Tuberculin),简称结素。20世纪初Von Pirquet首先用皮上划痕试验应用于检查结核感染。近一个世纪来结素试验一直是用来诊断结核菌感染的一种传统方法,而广泛应用于结核病流行病学调查和监测,考核卡介苗接种质量,配合发现结核病人,选择预防治疗对象,辅助结核病的诊断和鉴别诊断等方面。 一、结素种类 1.旧结素(OT):为结核杆菌在液体培养基中生长和溶解的可溶性物质的浓缩液,主要成分为结核蛋白及其分解产物,尚包含与活性无关的多糖脂类、结核菌代谢产物及培养基中的成分,因此不易标准化和易发生非特异性反应。目前已经很少使用。
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结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白的制备和应用
全球结核杆菌感染者高达 20 亿人,每年新发病例约800 万 ~ 1000 万,其中我国每年新发患者高达 150 万.结核杆菌流行病学的一个重要特征是结核分枝杆菌的潜伏感染.结核分枝杆菌潜伏感染是一种亚临床状态,其中约有 10% 的结核分枝杆菌潜伏感染者会发展成为结核病患者[1].流行病学调查显示,我国受结核杆菌感染人数超过5 亿.因此,如何有效、全面地筛查出结核病患者和结核杆菌潜伏感染人群,是结核病控制首要解决的问题.结核分枝杆菌早期培养滤液蛋白主要为小分子的分泌性蛋白,这些蛋白抗原是记忆性免疫 CD4+T 细胞的靶分子[2].以早期培养滤液蛋白为刺激源,结合 γ 干扰素释放技术,可以用于结核杆菌感染的体外诊断.
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结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究
目前人类预防结核病的惟一疫苗棗卡介苗(BCG)存在着不足,研制新型、有效、安全的预防结核病的疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题.目前由于大多数结核病DNA疫苗的免疫保护效果尚不如BCG,因此,提高DNA疫苗免疫效力是目前结核病核酸疫苗研究的热点.本研究选择新近从结核杆菌培养滤液(CF)中纯化分离出的一种低分子量蛋白抗原棗含信号肽的Mtb8.4(MS)作为目的抗原,与人白细胞介素12(hIL-12)构建成结核病嵌合基因疫苗,旨在提高MS的免疫效力.
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不同幽门螺杆菌培养滤液对胃上皮细胞端粒酶活性的影响
虽然有动物实验[1]显示幽门螺杆菌(H.pylori或Hp)感染可诱导蒙古沙土鼠腺胃癌的发生,但是人类感染Hp后的临床转归多种多样,不同的临床转归除宿主、环境因素外,Hp菌株的不同是不可忽略的因素.近年来发现端粒酶的激活在恶性肿瘤中是普遍存在的.为此本研究分析不同Hp的毒性产物对胃上皮细胞端粒酶活性的影响,以阐明Hp与胃癌的发病机制.
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结核中心结核分支杆菌Ag85A蛋白的克隆、表达及其血清学诊断价值的研究
10多年来国内、外学者一直从结核分支杆菌培养滤液中提纯蛋白质抗原进行多方面的研究,由于该方法制备蛋白抗原较烦琐、费时,因此,近年来许多研究者应用大肠杆菌来表达结核分支杆菌基因,简便地获得了大量结核分支杆菌单一的蛋白抗原.Ag85复合物是结核分支杆菌主要的分泌性蛋白,在结核分支杆菌H37Rv株中占分泌蛋白总量的30%,可从早期培养物中分离,是一种热不稳定的蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦分析可分为Ag85A、Ag85B和Ag85C三个组分[1].因此本研究通过基因工程技术构建结核分支杆菌Ag85A表达株,获得重组Ag85A(rAg85A)蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,为研制更有效的结核病免疫诊断试剂和新型的结核病疫苗奠定了基础.
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结核分枝杆菌保护性抗原的研究进展
结核分枝杆菌(MTB)蛋白根据蛋白分布的位置可分为分泌蛋白、胞质蛋白和膜蛋白.分泌蛋白是MTB在早、中期分泌释放于菌体外的一组蛋白,游离于培养基中或在感染细胞的吞噬小体内,在菌体内仅有微量存在;而胞质蛋白主要存在于细菌的细胞质中,在细菌对数生长的晚期细菌死亡后才释放到培养基中.将培养不超过5 d的滤液蛋白称为短期培养滤液蛋白,这是记忆性免疫CD+4T淋巴细胞的靶分子;将培养7 d以上的滤液蛋白称为长期培养滤液蛋白,随着培养时间的延长,滤液中蛋白越来越多,由于部分MTB开始裂解死亡,释放胞质蛋白,培养42 d时滤液中已有100多种蛋白质.结核病保护性免疫主要是细胞免疫,诱导细胞免疫反应的抗原主要存在于细胞壁、细胞质和培养滤液中,其中分泌蛋白和细胞壁表面的蛋白是主要的免疫保护性抗原,将成为新疫苗研究的首选靶抗原.现将保护性抗原的编码基因、生物学特性、免疫学功能等介绍如下.
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回复严舒俊医师关于结核菌素纯蛋白衍生物的剂量单位问题
早应用于结核病临床诊断的结核菌素为结核杆菌培养滤液浓缩液稀释的旧结核菌素(OT),其剂量单位采用浓缩液的稀释度,由于不同厂家制备的OT效价常不一致,1931年,由英国制备旧结核菌素参考品,1938年建立了以其活性为指标的结核菌素单位(tuberculin unit,TU).
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关于结核菌素纯蛋白衍生物剂量的表述问题
早期,各国制造的结核菌素(旧结素,OT)由各国自己保存的菌株培养滤液制成,效价常不一致.1931年,英国的汉波斯戴(Hampstead)制品定为标准旧结核菌素原液,保存在丹麦血清研究所,作为比较鉴定之用.
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咪唑立宾在肾脏病中的应用
咪唑立宾(mizoribine,MZR)是一种免疫抑制剂,为日本学者1971年从土壤中分离的子囊菌M-2166株培养滤液中分离出来的一种咪唑类核苷,分子式为C9H13N3O6.为白色或微带黄色的结晶粉末,无臭,在水或二甲亚砜中易溶,本品1 g 溶于100 ml水中,pH值为3.5~4.5.在甲醇、乙醇或氯仿中几乎不溶.熔点约为198 ℃.
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纳豆枯草杆菌培养滤液对家兔离体肠平滑肌的作用
目的 观察纳豆枯草杆菌培养滤液(culture filtrate,CF)对家兔离体肠平滑肌的作用,并初步探讨其作用机制.方法 制备兔离体回肠标本,分别记录肠平滑肌的正常收缩张力和收缩频率作为给药前对照,然后按累积剂量分别加入CF小剂量(每次0.2 mL)、CF大剂量(每次0.5 mL)、肉汤(每次0.5 mL),给药间隔3 min,共给药8次,并描记收缩曲线.观察不同剂量CF对肠平滑肌的作用.另取肠段按毛果芸香碱、CF或阿托品、再毛果芸香碱的顺序给药,观察CF对M胆碱受体的作用.结果 CF小剂量组在累积给药达1.6 mL时,CF大剂量组在累积给药达3.5 mL和4.0 mL时,兔离体肠平滑肌收缩张力下降,与给药前比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各点差异均无统计学意义(P>0.05).CF小剂量组在累积给药达1.2、1.4、1.6 mL时,CF大剂量组在累积给药达4.0 mL时,兔离体肠平滑肌收缩频率明显降低,与给药前比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其余各点差异均无统计学意义(P>0.05).CF或阿托品可明显对抗毛果芸香碱引起的兔离体肠平滑肌收缩张力的增加(P<0.05或P<0.01),同时CF还能使其收缩频率明显减少(P<0.01).结论 纳豆枯草杆菌CF能明显抑制兔离体肠平滑肌蠕动,其作用机制可能与阻断M胆碱受体有关.
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应用改良斑点酶联免疫吸附法检测胸腔积液中培养滤液蛋白-10快速诊断结核性胸腔积液
结核性胸腔积液与非结核性胸腔积液的鉴别常成为难题.目前,结核性胸腔积液诊断的金标准仍为胸腔积液抗酸染色和(或)结核分枝杆菌培养阳性.由于结核性胸腔积液中结核分枝杆菌数量少[1],致使抗酸染色阳性率低于10%,结核分枝杆菌培养阳性率也仅12%~70%[2],而结核分枝杆菌培养时间常需2周以上.胸膜活组织检查物培养及典型的结核性肉芽肿检出阳性率分别是11.7%和50%~97%[2-3],但胸膜活组织检查是有创性检查.
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幽门螺杆菌对不同分化程度胃癌细胞环氧合酶-2 mRNA的影响
流行病学研究显示,幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌发生相关,1994年世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)将其列为人类Ⅰ类致癌原,但其确切致癌机制目前仍不十分清楚,近年来研究表明,Hp感染可增加环氧合酶-2(COX-2)表达,而COX 2在胃癌发生、发展过程中起着重要作用,可能是导致胃癌发生的机制之一[1-4].本研究拟通过cagA+和cagA -Hp培养滤液与不同分化程度胃癌细胞系MKN28(高分化癌)、MKN45(低分化癌)、BGC823(未分化癌)共培养后检测COX-2 mRNA含量,进一步了解Hp通过COX-2途径致癌中cagA的作用以及Hp促进COX-2 mRNA表达与胃癌的分化程度是否有关.
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第三讲内毒素血症在重型肝炎发病中的地位
一个世纪前,Pfeiffer首先提出"内毒素"一词,是指革兰阴性细菌培养滤液中具有生物活性的稳定物质.广义地讲,内毒素是指革兰阴性细菌细胞壁的外部结构而言,其化学成分是磷脂-多糖-蛋白质复合物.进一步研究表明,内毒毒的主要成份是脂多糖(LPS),所以现认为LPS即为革兰阴性细菌的内毒素.LPS是一个复杂的大分子,含有与多糖共价结合的脂类,即类脂A(LPS的"毒力中心").
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耻垢分枝杆菌7天培养滤液与Middlebrook 7H9培养液蛋白质组对比分析
目的 初步了解耻垢分枝杆菌体外培养过程中对蛋白质的利用及其蛋白分泌活动状况,以进一步了解其生物特性.方法 应用与弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)联用的表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测Middlebrook 7H9培养液和耻垢分枝杆菌7天培养滤液蛋白质/多肽,采用描述性分析其蛋白质/多肽谱并比较两者问的差异.结果 在Middlebrook 7H9培养液中检测到97种蛋白质/多肽,相对分子质量在1 050~3940之间,丰度水平在86~7 838相对强度值之间(相对强度值通过质谱峰面积计算);在耻垢分枝杆菌7天培养滤液中检测到125种蛋白质/多肽,相对分子质量在1 050~9 330之间,丰度水平在111 ~9 961相对强度值之间;相对Middlebrook 7H9培养液,耻垢分枝杆菌7天培养滤液的蛋白质/多肽谱发生了下列变化:45种消失、20种丰度降低、3种未变化、30种丰度增大、71种新产生.结论 耻垢分枝杆菌作为快速生长分枝杆菌菌种,在体外培养生长时有活跃的蛋白质利用和分泌活动,对于既无侵袭力又无毒素产生的耻垢分枝杆菌而言,这些活动可能与其致病性密切相关,值得人们深入研究.