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乙型肝炎疫苗被动免疫长期效果观察
对435名1990年实施乙型肝炎(乙肝)计划免疫以后出生、经乙肝疫苗免疫保护6年以上的小学生进行长期免疫保护效果观察,现将结果报道如下.
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日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的免疫保护效果研究
目的:观察已构建日本血吸虫大陆株31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗VR1012-Sj31及VR1012-SjGST-Sj31在BALB/c小鼠体内的免疫保护效果.方法:用纯化的空白质粒载体VR1012、重组质粒VR1012-Sj31及VR1012-SjGST-Sj31于股四头肌注射免疫BALB/c鼠:将36只6~8周龄BALB/c鼠随机分为3组,每组12只,对照组(A组)注射空白质粒载体VR1012,B组注射重组质粒VR1012-Sj31,C组注射重组质粒VR1012-SjGST-Sj31.质粒剂量均为100 μg,每隔2周免疫1次,共免疫3次,第3次免疫后第21天,每只鼠经腹部感染10条尾蚴,42天后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数,观察诱导产生的减虫和减卵效果,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体.结果:ELISA分析表明,第3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体.与空白质粒对照组比较,2个实验组的减虫率分别为25.0%及30.0%(P<0.05),肝组织减卵率分别为54.90%及69.74%(P<0.001),每雌肝减卵率分别为47.96%、54.62%(P<0.001).与B组相比,C组的肝组织减卵率为32.92%(P<0.001),每雌肝减卵率为12.79%(P<0.05).结论:DNA疫苗VR1012-Sj31和VR1012-SjGST-Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用,二价疫苗的保护效果要大于单价疫苗.
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捻转血矛线虫抗原研究进展
捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)是反刍动物的一种重要消化道线虫,寄生于宿主第四胃,以宿主血液为其营养来源.感染牛、绵羊和山羊,引起动物贫血及贫血综合征,严重的可致动物,特别是羔羊大批死亡.该病主要采用化学药物治疗,取得了很好的效果,但存在严重的药物残留问题.抗药虫株的出现和蔓延,使得传统的化学治疗受到了严重挑战,这给畜牧业生产带来了极大的经济损失(Waller,1996).应用免疫学方法防治该病十分迫切和必要,本文主要就捻转血矛线虫抗原的种类、免疫保护效果以及重组抗原研究情况作如下概述.
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贝氏柯克斯体30kD外膜蛋白基因表达及免疫保护性的研究
贝氏柯克斯体可引起人类急、慢性Q热.急性Q热临床表现多种多样,主要症状为发热、头痛和肌肉酸痛,并常伴有肺炎、肝炎等.慢性Q热常发展为Q热性心内膜炎、骨髓炎.Q热疫苗是预防Q热流行的有效手段,目前人用Q热疫苗是灭活的柯克斯体.虽然灭活疫苗的免疫保护效果很好,但注射该疫苗接种部位常出现不良反应.研究发现,在贝氏柯克斯体的Ⅰ相和Ⅱ相中含有相对分子质量(Mr)为30×103的外膜蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性[1].我们采用分子生物学技术,研制出贝氏柯克斯体Mr 30×103重组外膜蛋白,用重组蛋白免疫小鼠,对其免疫保护性进行初步评价,探讨该重组蛋白作Q热疫苗的可行性.
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结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究
目前人类预防结核病的惟一疫苗棗卡介苗(BCG)存在着不足,研制新型、有效、安全的预防结核病的疫苗成为国内外学者共同关注的一个重要课题.目前由于大多数结核病DNA疫苗的免疫保护效果尚不如BCG,因此,提高DNA疫苗免疫效力是目前结核病核酸疫苗研究的热点.本研究选择新近从结核杆菌培养滤液(CF)中纯化分离出的一种低分子量蛋白抗原棗含信号肽的Mtb8.4(MS)作为目的抗原,与人白细胞介素12(hIL-12)构建成结核病嵌合基因疫苗,旨在提高MS的免疫效力.
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弓形虫DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究
弓形虫表面抗原P30和P22是弓形虫疫苗的候选抗原.本研究将构建的真核表达质粒pBK-P30和pBK-P22联合免疫小鼠,初步观察其免疫保护效果.
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PcDNA3.1(+)-MCP-1和PcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒的构建及鉴定
目的:构建并鉴定真核表达质粒pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα.方法:据GeneBank中大鼠MCP-1和GroαcDNA序列设计并合成引物,提取急性胰腺炎模型大鼠总RNA,RT-PCR扩增,并将扩增产物TA克隆至pGEM-T easy载体,然后分别双酶切pGEM-MCP-1和pGEM-Groα回收目的片段再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+).结果:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建完成后,用限制性内切酶、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定,证实其构建成功.结论:pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Groα真核表达质粒构建成功,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备急性胰腺炎pcDNA3.1(+)-MCP-1和pcDNA3.1(+)-Gro DNA疫苗奠定了基础.
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表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染
目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylorr)尿素酶B亚单位(UreB)与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用.方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与GeneBank中相关序列进行同源性比较.pTrc99A-ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blotting进行鉴定,薄层扫描分析蛋白含量.实验小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A-ureB的SL3261组、携带pTrc99A-ureB/hlyE的SL3261组.免疫后4 wk,予Hpylori107CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击).攻击4 wk后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察H pylori定植情况.结果:核苷酸序列测定及同源性分析证实,原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE中所含的H pylori-ureB及hlyE基因与GeneBank中的H pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42%(1 663/1 707)、99.78%(910/912).重组减毒沙门氏菌可表达约100ku的融合蛋白UreB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15%;表达的融合蛋白能与小鼠抗H pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性.动物实验证实,疫苗组同空白对照组和SL3261组相比,H pylori定植密度明显下降,有显著性差异(P<0.05).表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比,H pylori定植密度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论:重组疫苗菌对小鼠H pylori感染具有一定免疫预防作用,hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果.
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基因疫苗的基础研究及应用现状
基因疫苗已成为疫苗研究领域中的热点之一,特别是其研究方向与世界卫生组织儿童免疫长远目标-用一种疫苗预防多种疾病相吻合.从效力到成本的潜在优点已使基因疫苗成为今后疫苗制造的选择,故澳大利亚昆士兰医学所的Waine和McManus在
上论证,基因疫苗为第三次疫苗革命.令人鼓舞的是艾滋病和T细胞淋巴瘤的基因疫苗已进入到了临床前阶段.基因疫苗不仅能预防某些传染病,还可做为治疗用疫苗来治疗一些复杂难治的疾病,例如病毒性肝炎、癌症等.这些均已显示出基因疫苗的巨大潜力和应用前景.但是,基因疫苗的历史毕竟很短,实验结果均来自动物,在用于人体之前还有许多工作必须完成,其中重要的是解决基因疫苗对人体的安全性和效力问题,例如:(1)须用与人类疾病相关的动物模型证实其效果;(2)须用高度敏感的PCR技术等确证所注射的DNA不与宿主细胞基因组DNA整合,这是确保DNA疫苗遗传学安全性的重要指标之一;(3)终还需要近期和长期的临床试验以明确其毒副作用和免疫保护效果.我国已制定了基因转移治疗的管理条例,基因免疫作为预防性基因治疗技术,同样应遵守此条例,这样才有利于基因治疗的健康发展. -
hsp70/CD80嵌合DNA真核表达质粒的构建及鉴定
我们将结核分支杆菌hsp70和人CD80的编码基因进行连接重组,构建成hsp70/CD80嵌合DNA真核表达质粒,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病hsp70/CD80嵌合DNA疫苗奠定了基础, 可望通过基因免疫获得免疫原性强、以低剂量即可有效刺激机体产生T细胞和B细胞应答、安全可靠的新型结核病疫苗.
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结核分枝杆菌分泌蛋白64基因重组腺病毒疫苗的构建
卡介苗是当前惟一能够应用于人体的结核病疫苗,但对成人肺结核的保护效率很低.DNA、多肽及病毒等亚单位疫苗能够加强卡介苗或重组卡介苗的免疫保护效果,目前被认为是结核病疫苗研究的重要方向之一~([1-2]).同DNA疫苗和多肽疫苗相比,重组活的结核病亚单位疫苗能在体内持续表达MTB特异性抗原,使其具有高效和经济的优势.
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日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗不同免疫途径免疫保护效果研究
目的:观察本室所构建日本血吸虫大陆株31kDa组织蛋白B DNA疫苗在BALB/c小鼠体内的不同免疫途径的免疫保护效果.方法:用纯化的空白质粒载体VR1012、重组质粒VR1012-Sj31免疫BALB/c鼠,将36只6~8周龄BALB/c鼠随机分为3组,每组12只,对照组(A组)肌肉注射空白质粒载体VR1012,实验组(B组)皮下注射重组质粒VR1012-Sj31,C组肌肉注射重组质粒VR1012-Sj31.质粒剂量均为100μg,每隔2w免疫1次,共免疫3次,第3次免疫后第21d,每只鼠经腹部感染10条尾蚴,42d后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数,观察诱导产生的减虫和减卵效果,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体.结果:ELISA分析表明,第3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体.与空白质粒对照组比较,2个实验组的减虫率分别为15.0%(P>0.05)和25.0%(P<0.05),减卵率分别为38.22%和54.90%(P<0.001).与皮下免疫组相比,VR1012/Sj31肌肉免疫组的减卵率分别为26.99%(P<0.001).结论:DNA疫苗VR1012-Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗日本血吸虫感染保护作用,肌肉注射的保护效果大于皮下注射.
关键词: 日本血吸虫 VR1012-Sj31 组织蛋白酶B DNA疫苗 免疫保护效果 -
预防接种门诊与接种儿童的沟通技巧
儿童健康问题是社会关注的中心,疫苗接种给儿童开通了便捷的绿色健康通道.预防接种是法律赋予每个儿童的权利,国家对儿童实行预防接种制度.预防接种主要面对的是健康儿童,注射疫苗后可能出现的异常反应和免疫保护效果一直是计划免疫不可回避的问题,甚至疫苗接种后引起的一般反应如:发热、局部红肿等,也可能导致家长的不满,甚至引发纠纷,使预防接种护理人员处于被动状态.加强预防接种门诊护理工作已是当务之急,笔者结合多年的工作经验,就预防接种门诊与接种儿童的沟通技巧作一阐述.
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hsp70/CD80嵌合DNA疫苗对结核杆菌感染的免疫预防效果
卡介苗(BCG)虽然是全球使用广泛的预防结核的疫苗,可预防和减轻儿童的重症结核,但对成人肺结核的保护效果不稳定.DNA疫苗为结核的防治提供了新的思路.人们试图用嵌合DNA疫苗和DNA疫苗的联合免疫来提高对结核病的免疫保护效果.分支杆菌热休克蛋白70(hsp70)包含多个T细胞和B细胞表位,免疫原性非常强,具有免疫优势抗原的特点,能诱导出特异性Th1型细胞反应,对结核杆菌的攻击可产生较强的保护性免疫效应,但单独的hsp70 DNA疫苗的免疫保护效果不能超过BCGCD80是近年来发现的一种具有免疫活化功能的第二信号分子,与其共刺激受体CD28/CTLA-4间相互作用可提供T细胞活化所必需的协同刺激信号,本研究将结核杆菌hsp70和人CD80的编码基因进行连接重组,制备成结核病hsp70/CD80嵌合DNA疫苗,可望提高hsp70 DNA疫苗的免疫效力,获得免疫原性更强、安全可靠的新型结核病疫苗.
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2065名儿童乙肝疫苗免疫接种效果分析
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区,推广接种乙肝疫苗是防止HBV感染,控制乙肝流行,降低发病率的重要措施.我县于1992年根据卫生部<全国乙肝疫苗接种方案>,将乙肝疫苗接种工作纳入儿童计划免疫.为了解乙肝疫苗的免疫保护效果,我们对1992~1997年出生的并已接受过乙肝疫苗免疫接种的儿童,进行抽样调查,对2065名儿童进行抗-HBs测定,对乙肝疫苗免疫效果进行评价分析,现将结果报告如下.
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结核分枝杆菌TB10.4抗原的分子生物学特性研究进展
结核病(tuberculosis,TB)这种古老的慢性人兽共患病,4千多年前就已流行于全球,而且至今仍危胁着全球近1/3人口的健康[1].自1921年诞生且是当前唯一可行的卡介苗( Bacillus CalmetteGuérin,BCG),是至今接种人数多、使用范围广的疫苗之一,但该疫苗的免疫保护效果并不理想,对成年人保护率在0%~80%之间波动,临床主要采用的结核菌素皮试(tuberculin skin test,TST)检测方法敏感性为60%~84%也不尽人意,因此发展可替代的新型TB疫苗和有效的诊断方法一直是一项世界范围的课题.
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结核分枝杆菌融合基因疫苗的研究进展
BCG在不同地区的免疫保护作用差异很大(0%~80%)[1],加上耐多药菌株的出现,寻找比BCG免疫保护效果更好的疫苗成为当今抗结核疫苗研究的当务之急.
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结核分枝杆菌MPT64疫苗研究进展
结核分枝杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病,当前唯一可用的疫苗卡介苗(Bacille Calmette Guerin;BCG)免疫保护效果极不稳定,因此开发安全、有效的新型疫苗势在必行.本文拟对结核分枝杆菌MPT64疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展作一综述.结核病(tuberculosis;TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculsis;MTB)引起的人兽共患的慢性传染病.据WHO估计,全世界约有20亿人感染过MTB,每年约有900万新发临床病例及200~300万死亡病例,同一时间约有6000万病例处于活动感染期.TB已成为我国乃至全世界危害严重的疾病之一.
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幽门螺杆菌融合蛋白UreB-Omp11在大肠杆菌中的表达与纯化
近年来,研究者发现了多种Hp的有效保护性抗原成分,UreB、Omp、Hsp、NAP等,其中尿素酶、外膜蛋白等是人们研究的焦点.但它们单独免疫动物时,获得的免疫保护效果均不理想,为克服单一抗原分子诱导的免疫保护水平偏低的问题,本研究用重叠延伸PCR法将H.pylori郑州分离株MELHP27的ureB与omp11两个基因进行融合,中间加入弹性蛋白连接肽编码序列为接头,并通过设计合适的酶切位点,将融合蛋白插入原核表达载体pMAL-c2X中,使其融合表达,为Hp多价抗原基因工程疫苗的研究奠定基础.
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弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究
利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位,并探讨其免疫保护效果.用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体12肽库进行三轮筛选,对获得的目的噬菌体用间接ELISA和Dot-ELISA检测其特异性,并对其中的某些克隆进行Western-blot分析和序列测定;用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL/c小鼠,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度,攻击感染后观察小鼠存活情况.经三轮筛选,特异性噬菌体得到富集,随机挑取18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定,有16个克隆能与弓形虫免疫兔血清IgG呈特异性反应.Western-blot分析显示P2克隆能被兔抗弓形虫血清所识别,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性,其序列为5′-CTT CAG TTG GAT CGG GCT CCG TTTTGG AAT CAG GGT-3′,与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性;与原肽库对照组相比,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组.利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用.