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钩端螺旋体不含兔血清培养基的应用研究
目前国内普遍使用兔血清培基(Tepckий、Korthof)培养钩体,国外普遍使用不含兔血清培养基(EMJH).将EMJH、Korthof、Tepckий各分装每管5ml,接种0.2ml(菌量2×108/ml)钩体,用Helber计算室活菌计数.
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幽门螺杆菌免疫兔血清抗体特异性分析
对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)抗原、抗体的研究是Hp分型、检测及疫苗开发的基础.Hp免疫血清的制备已成为常规技术,但血清制备过程中的各种因素均可能影响免疫血清的抗体谱,从而引起同类研究间因所用Hp抗体不同导致的结果的差异.本研究对Hp全菌免疫的兔血清抗体谱加以分析,讨论坳免疫血清制备中存在的一些问题和应对方法.
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对氧磷酶在有机磷中毒中的防治作用及研究进展
(paraoxonase,PON)于1953年被发现,因其能水解对氧磷而得名对氧磷酶.PON存在于多种微生物、昆虫、爬行动物、鸟类及哺乳动物体内,以兔血清PON活性高.PON主要由肝脏分泌,广泛存在于肝、肾、脑、血液等器官中,以肝和血液中的PON活力高.肝脏中的PON全部存在于线粒体中,血液中的PON主要与高密度脂蛋白(HDL)结合[1].
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补阳还五汤进入兔血清中化学成分的研究
为研究补阳还五汤进入兔血清中的化学成分.作者按临床常用量的10倍剂量,连续给药3 d,后1次给药后2 h从颈总动脉插管取血,血液离心得血清样品.甲醇超声提取兔血清冷干粉样品,利用RP-18柱色谱法分离含药血清的甲醇提取液;利用HPLC-DAD法分析给药血清样品分离流份与空白血清样品化学成分的HPLC图,确定含药血清特有的色谱峰;利用HPLC/MS,UV等方法鉴定给药血清特有色谱峰的化学结构.结果表明,确定含药血清特有色谱峰32个,已鉴定了其中3个色谱峰的化学结构.
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离子对反相高效液相色谱法测定兔血清中的头孢曲松
目的建立一种快速、准确测定兔血清中头孢曲松浓度的高效液相色谱方法.方法在兔血清中加入含有内标甲硝唑的甲醇沉淀蛋白后取上清液,用微孔滤膜过滤后,直接进样测定.使用Agilent1100色谱系统.ThermoHpersil ODS2色谱柱,流动相:CH3OH:H2O:29.8mmol·L-1K2HPO3:14.7mmol·L-1KH2PO3:87.7mmol·L-1C6H5Na3O7=214:440:27.5:27.5:5,其中含有3.1mmol·L-1的四丁基溴化铵,缓冲盐部分用0.95mol·L-1的C6H8O4调PH值=3.0±0.1;流速为1ml·min-1;柱温:28℃;检测波长254nm.结果头孢曲松在兔血清中浓度在31.5~1008mg·L-1范围内线性良好.低检测浓度为4 mg·L-1.血清中日内差≤0.90%,日间差≤1.41%.回收率95.85%~102.54%.结论本方法快速、准确,可为头孢曲松在体内血清药物浓度分析提供有意义的方法学参考.
关键词: 离子对反相高效液相色谱法 头孢曲松 兔血清 -
肝细胞生长因子对胰腺作用研究进展
1982年Strain等首先报道从血小板提取到一种肝细胞生长因子.1年后相继有报道从人血清、兔血清及急性肝衰病人血浆中提取到能促进体外培养的肝细胞DNA合成的因子,因其对培养肝细胞具有强大的促进有丝分裂作用,故称之为肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF),又名离散因子(scatter factor).
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固相化学法对兔血清部分生化指标的检测研究
目前临床检验中的固相化学法主要是多层膜法(Multiple Layer-Film),它集当代化学、光学、酶学、化学计量和计算机技术于一体,并已作为定量分析法达到常规湿化学法的测定水平.由于其具有准确度高、精密度高;标本量少;不需配制试剂操作简便、快速,可随时随地进行,无废液产生等优点,更适用于实验动物特别是小动物的体内生化成份测定.本项研究目的在于应用固相化学法的优点以新西兰大耳兔为实验动物模型对兔血清中的ALT、AST、GLU、TB、BUN和Ca2+进行分析测定,并应用临床化学分析法的选择和评价原理,在重复性实验、稀释实验、回收实验和方法比较实验等方面进行了固相化学法对实验动物血清中生化成分测定的可行性实验探讨.
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微量脉冲进样-导数火焰原子吸收法测定乳品中微量铜
测定食品中铜,常规火焰原子吸收分光光度法所需进样量大、灵敏度低,因而难以完成样品中微量元素的测定任务.自Sebastiani等首先报道微量脉冲进样技术以来[1],该技术以其需样量少、线性范围宽以及重现性好等优点已用于多种元素的测定.籍雪平[2]等报道了脉冲喷雾火焰原子吸收法直接测定牛乳中锌含量.导数火焰原子吸收技术是近年来提出的一种新的测定方法[3],灵敏度较常规法提高数十倍.笔者[4]将微量脉冲进样技术和导数火焰原子吸收技术有机地结合,解决了常规火焰原子吸收分光光度法所需进样量大、灵敏度低的问题,成功地测定了兔血清中微量锌.本文利用该技术进一步研究了市售乳品中铜含量的测定.结果令人满意.
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磁片贴敷穴位对家兔血清过氧化脂质水平的影响
过氧化脂质(LPO)是在自由基作用下氧化和过氧化作用的产物,它的产生和积累对机体有着毒害作用,加速了机体的老化过程。本实验根据磁场的生物效应,研究了磁场穴位刺激对机体血清LPO水平的影响。材料和方法 日本纯种大耳兔21只,由本校动物部提供,平均体重(3.0~3.5)kg。随机分为实验组11只,对照组10只。实验组进行磁场穴位刺激,每天1次,30 min。在每只家兔的腹部(相当于中脘、下脘、天枢、关元穴)呈十字形贴磁5片,在背部脊柱两侧凹陷处(相当于夹脊穴)每排贴磁5片,腹背磁片的N、S极均交叉放置,此外,在膝关节下方(相当足三里穴)各置一直径为5 mm×3 mm 圆柱形磁片。每片磁感应强度为0.2 T,贴磁部去毛,并用胶布包裹固定。6周后,由耳静脉采血,分离血清进行LPO测定,测定方法见文献[1]。测试仪器为日立-3000荧光分光光度计,统计学处理采用t检验。
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推拿治疗对急性软组织损伤家兔血清神经递质表达影响的研究
急性软组织损伤是临床上的常见病和多发病,中医推拿疗法是治疗该病的主要疗法,具有操作简便、疗效确切等优势。本研究通过观察推拿疗法对急性软组织损伤家兔血清中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺( DA)、去甲肾上腺素( NE)和β-内啡肽(β-EP)表达水平的影响,旨在分析推拿治疗急性软组织损伤疼痛的作用机制,促进推拿疗法在急性软组织损伤治疗中的应用。
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兔血清中过氧化物酶同工酶在兔分类中的研究
应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)对中国白兔、新西兰兔、獭兔血清中的过氧化物酶同工酶进行研究.研究结果表明:这三种兔在血清中的过氧化物酶有着明显的区别,可以利用过氧化物酶的区别对兔种进行分类鉴定.本方法可为过氧化物酶同工酶在动物分类鉴定中提供参考依据.
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哈慈五行针对家兔血清过氧化脂质水平的影响
过氧化脂质是自由基在血清中过氧化产生的,是形成粥样动脉硬化和血管老化的主要因素.在对家兔血清过氧化脂质影响的试验中测得对照组血清中过氧化脂质含量为 14.05,五行针组含量为 10.03(nmol/mL),下降率为 28.6%.试验证明家兔血液粘度、胆固醇、血脂明显下降,说明哈慈五行针双极针法具有溶血栓、改善心脑血管循环的功能.哈慈五行针双极透针法作用于经穴和体液明显降低血清中过氧化脂质,揭示了哈慈五行针治疗冠心病、高血压等心脑血管疾病的机理.
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抗肾小球基底膜抗体肾炎动物模型的建立及应用研究
目的:建立稳定的抗小鼠肾小球基底膜(GBM)抗体诱导的小鼠肾炎模型,用于相关药物药效学及机制的研究.方法:①制备含抗小鼠GBM抗体的兔血清.分离获得小鼠GBM组分,制备成冻干粉免疫家兔,得到含抗小鼠GBM抗体的兔血清.②建立抗小鼠GBM抗体诱导的小鼠肾炎模型.将兔IgG与弗氏完全佐剂(CFA)充分乳化,于C57BL/6小鼠右脚脚掌注射进行致敏,3d后尾静脉注射兔血清进行再次免疫.③肾炎小鼠口服肾上腺皮质激素类药物醋酸泼尼松龙(PNS)进行干预治疗,口服给药14 d,2mg·kg-1 ·d-1,观察小鼠蛋白尿、蛋白肌酐比、血生化的变化.结果:注射含抗小鼠GBM抗体的兔血清(200μl,300μl,500μl),成功建立小鼠肾炎模型,模型小鼠蛋白尿及血清尿素氮(BUN)水平显著升高,血清白蛋白(ALB)水平明显降低,具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);PNS治疗后,能明显降低肾炎小鼠蛋白尿水平、蛋白肌酐比及BUN水平(P <0.05,P <0.01),缓解小鼠肾炎症状.结论:含抗小鼠GBM抗体的兔血清能够成功诱导小鼠肾炎模型,醋酸泼尼松龙能够有效发挥治疗作用,证实该模型可用于相关药物药效学及机制的研究.
关键词: 兔血清 抗肾小球基底膜抗体肾炎 醋酸泼尼松龙 动物模型 小鼠 -
致弱尾蚴感染血清对日本血吸虫尾蚴和成虫抗原免疫识别初步研究
众所周知,血吸虫减毒尾蚴可诱导宿主产生较高免疫保护力,但是,刺激宿主免疫系统的究竟是哪些目标抗原,目前仍未定论.血清被动转移实验证明减毒尾蚴多次免疫后血清可诱导宿主产生针对幼虫期的免疫保护,因此我们用多次免疫兔血清初步筛选日本血吸虫可溶性尾蚴中的保护性抗原,以期为血吸虫疫苗的研制提供一些新的线索.
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三峡库区首次分离出巴达维亚群钩端螺旋体
1997年10月在重庆市三峡库区七个钩体监测点之一渝北区硌碛镇,长江边稻田和野外菜地,采用夹夜法布鼠夹100只,捕获7只,其中黑线姬鼠5只,褐家鼠2只。用背式法解剖取肾标本,经8%兔血清磷酸盐培养基培养分离。从其中一只雄性黑线姬鼠左肾检出钩端螺旋体,经我站检定,并经四川省卫生防疫站鉴定,确定为巴达维亚血清群钩体。这是重庆市首次分离出巴达维亚群钩体。巴达维亚群钩体所致病例在三峡库区中尚未发现。黑线姬鼠是重庆市稻田型钩体病主要带菌宿主和重要的传染源,常从该鼠种中检出黄疸、澳洲、秋季等病原体,并与人群流行菌群基本一致。近年来,国内福建、海南有报道巴达维亚钩体的暴发流行和流行菌群更迭现象,巴达维严群上升尤为明显。三峡大型水利工程的兴建,库区地理情况的改变,是否会出现钩体流行菌群更迭现象等新的钩端螺旋体病地理流行病学问题,值得重视。提示应加强对黑线姬鼠带菌监测和人间疫情监测,做好三峡库区钩体疾病监测工作。
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弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究
利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位,并探讨其免疫保护效果.用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体12肽库进行三轮筛选,对获得的目的噬菌体用间接ELISA和Dot-ELISA检测其特异性,并对其中的某些克隆进行Western-blot分析和序列测定;用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL/c小鼠,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度,攻击感染后观察小鼠存活情况.经三轮筛选,特异性噬菌体得到富集,随机挑取18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定,有16个克隆能与弓形虫免疫兔血清IgG呈特异性反应.Western-blot分析显示P2克隆能被兔抗弓形虫血清所识别,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性,其序列为5′-CTT CAG TTG GAT CGG GCT CCG TTTTGG AAT CAG GGT-3′,与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性;与原肽库对照组相比,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组.利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用.
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弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的原核表达分析
构建弓形虫GRA8的原核重组表达质粒,分析其表达状况.采用PCR技术扩增GRA8及其截短型片段的基因序列,经克隆后,亚克隆至原核表达载体中,构建GRA8及其截短型片段的重组表达质粒,分析GRA8的表达;将各重组菌进行诱导,从其裂解上清中纯化目的蛋白.GRA8基因被正确插入原核表达质粒中;原核重组表达质粒在大肠杆菌中表达GRA8的水平低,几乎无完整GRA8的表达;纯化的截短型GRA8能被弓形虫感染兔血清识别.GRA8的原核重组表达质粒表达GRA8的水平低,纯化的截短型GRA8具有良好的免疫活性.
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重组弓形虫GRA8的表达及其诱导的免疫应答
表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答.从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达GRA8,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答.GRA8基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌中未见GRA8的明显表达;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被弓形虫感染兔血清识别.成功构建了GRA8的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性.
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表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白的重组卡介苗构建
构建能够表达胞壁结合型贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白的重组卡介苗.用PCR技术从卡介苗(BCG)基因组扩增分支杆菌19kDa抗原的细胞壁结合区基因和从贝氏柯克斯体基因组扩增27kDa外膜蛋白基因,将它们分别插入大肠杆菌-分支杆菌穿梭质粒(pSMT3)的XbaⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/HindⅢ位点.将重组的穿梭质粒转化大肠杆菌和从大肠杆菌提取重组穿梭质粒转化卡介苗.从含潮霉素的培养基筛选到具有该抗生素抗性重组卡介苗菌落,用免疫印迹分析重组质粒转化的卡介苗,发现一约27kD的蛋白带与贝氏柯克斯体27kD重组蛋白免疫兔血清特异反应,用27kD重组蛋白免疫兔血清做间接免疫荧光检测重组卡介苗,结果为阳性.重组卡介苗能表达贝氏柯克斯体27kDa外膜蛋白,表达的27kDa外膜蛋白存在卡介苗菌体表面,卡介苗菌体表面的27kD抗原可能有效地诱导特异性的抗Q热免疫应答.
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反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度
目的 应用反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度.方法 兔血清样品经乙酸乙酯/异丙醇(84/16)萃取后,水浴氮气吹干,流动相定容后进样.色谱柱为kromasil-C18柱(250 min×4.6 mm,5μm),流动相为20 mM醋酸铵/乙腈(体积比98.2:1.8,pH8.05),流速0.8 mL/min,紫外检测波长为270 nm.结果 5-氟尿嘧啶在5~80μg/L浓度范围内呈良好的线性关系.10、20、40 μg/L三个浓度的批内RSD分别为11.6%、5.6%、5.4%;批间RSD分别为12.8%、2.7%、6.2%;平均回收率分别为106.7±11.7%、98.0±5.3%、99.3±5.3%.结论 本方法可靠、重复性好,具有特异性强、灵敏、精密度与准确度高等特点,满足5-氟尿嘧啶药代动力学研究的要求.